miR-15b-5p靶向FOXO1对缺氧/复氧诱导的人肾小管上皮细胞损伤的调控作用及其机制

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作者 李华锋 张鸿毅 +3 位作者 肖克兵 杨辉 李子峰 赵刚刚 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1311-1318,共8页

目的探讨miR-15b-5p靶向叉头框蛋白O1(FOXO1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的调控作用及其机制。方法取对数生长期HK-2细胞,设置:(1)对照组(正常培养)与H/R组(H/R诱导培养)。倒置显微镜下观察HK-2细胞形态,采用实... 目的探讨miR-15b-5p靶向叉头框蛋白O1(FOXO1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的调控作用及其机制。方法取对数生长期HK-2细胞,设置:(1)对照组(正常培养)与H/R组(H/R诱导培养)。倒置显微镜下观察HK-2细胞形态,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测mi-15b-5p、FOXO1 mRNA的表达,Western blotting检测FOXO1蛋白的表达。(2)对照组(正常培养)、H/R组(H/R诱导培养)、H/R+mimic对照组(转染mimic对照质粒后H/R诱导培养)、H/R+miR-15b-5p mimic组(转染miR-15b-5p mimic后H/R诱导培养)、H/R+miR-15b-5p mimic+OE-NC组(共转染mi R-15b-5p mimic和OE-NC质粒后H/R诱导培养)与H/R+miR-15b-5p mimic+OE-FOXO1组(共转染miR-15b-5p mimic和FOXO1过表达质粒后H/R诱导培养)。采用qRT-PCR检测mi-15b-5p的表达,Western blotting检测FOXO1、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡情况。(3)对照组(正常培养)、H/R组(H/R诱导培养)、H/R+miR-15b-5p mimic组(转染miR-15b-5p mimic后H/R诱导培养)与H/R+miR-15b-5p mimic+OE-FOXO1组(共转染miR-15b-5p mimic和OE-FOXO1后H/R诱导培养)。采用Western blotting检测LC3、p62、Beclin-1蛋白的表达,LC3免疫荧光检测细胞自噬水平。双荧光素酶报告实验检测miR-15b-5p与FOXO1之间的靶向关系。结果倒置显微镜下观察显示,对照组细胞数量较多,细胞大多呈典型鹅卵石形态,铺路石状生长;H/R组大部分细胞收缩变圆,贴壁细胞数量明显减少。与对照组比较,H/R组miR-15b-5p表达水平明显降低,FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。荧光素酶报告实验结果显示miR-15b-5p直接靶向作用于FOXO1的3'-UTR。miR-15b-5p过表达抑制H/R诱导的HK-2细胞活力,降低细胞凋亡,抑制细胞自噬(P<0.05)。与H/R+miR-15b-5p mimic组相比,H/R+miR-15b-5p mimic+OE-FOXO1组HK-2细胞存活率降低,细胞凋亡和自噬水平增高(P<0.05)。结论miR-15b-5p通过靶向抑制FOXO1降低细胞自噬减缓H/R诱导的HK-2细胞损伤。 展开更多

关键词 miR-15b-5p 叉头框蛋白O1 人肾小管上皮细胞 缺氧/复氧 自噬

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靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响 被引量：10

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作者 郝军 石宏 +2 位作者 赵松 任韫卓 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期371-377,共7页

目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选... 目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。 展开更多

关键词 固醇调节元件结合蛋白-1 人肾小管上皮细胞 RNA干扰 短发夹状干扰RNA 脂滴形成 脂肪酸合成酶

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贫铀对人肾小管上皮细胞的毒性作用 被引量：9

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作者 李蓉 艾国平 +6 位作者 徐辉 楼淑芬 程天民 粟永萍 郑怀恩 蒋建新 黄跃生 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期185-188,共4页

目的　阐明贫铀 (depleteduranium ,DU)对人肾小管上皮细胞 (humankidneycell,HKC)的急性毒性作用及损伤部位 ,为救治提供依据。方法　将 0 0 63～ 0 5 0 0mg ml的DU溶液作用于HKC ,研究细胞超微结构、存活率的变化 ,多种酶含量的改变... 目的　阐明贫铀 (depleteduranium ,DU)对人肾小管上皮细胞 (humankidneycell,HKC)的急性毒性作用及损伤部位 ,为救治提供依据。方法　将 0 0 63～ 0 5 0 0mg ml的DU溶液作用于HKC ,研究细胞超微结构、存活率的变化 ,多种酶含量的改变及HGPRT基因突变的频率。结果　 0 0 63～ 0 5 0 0mg ml浓度的DU可引起HKC细胞结构改变 ,存活率显著下降 ;溶酶体酶NAG含量随DU浓度的增加而增加 ;其他酶含量也发生变化 ;HGPRT基因突变的发生率显著高于正常对照组 ,并呈二项式相关关系。加入苯乙酸、亚硒酸钠使上述指标变化不大。结论　DU可引起细胞活力降低 ,损伤细胞膜、线粒体、溶酶体等 ,使细胞抗氧化能力下降 ;HGPRT基因突变率与DU浓度之间呈相关关系 ;加入恶性转化的抑制剂亚硒酸钠和苯乙酸 。 展开更多

关键词 贫铀 毒性 人肾小管上皮细胞

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动力相关蛋白-1在缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用 被引量：13

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作者 陈雨 侯卫平 袁发焕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1251-1256,共6页

目的观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor f... 目的观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)以及炎性因子的表达改变和细胞焦亡情况,探讨Drp1在H/R诱导肾小管上皮细胞焦亡中的作用。方法 HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12液培养于37℃、5%CO2和95%O2的恒温培养箱。将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+Drp1抑制剂(H/R+Mdivi-1)组、H/R+si Nlrp3腺病毒(H/R+si Nlrp3)组、H/R+空腺病毒(H/R+Scra)组。检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶LDH活性,Western blot检测Drp1、Nlrp3、凋亡相关蛋白-1(caspase-1)、IL-1β表达,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,流式分析仪检测细胞焦亡情况。结果与正常对照组比较,H/R组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显升高,Drp1、Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达增高,细胞焦亡明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较,H/R+Mdivi-1组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显降低,Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达降低,细胞焦亡明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在H/R条件下,Drp1通过激活Nlrp3炎性体诱导人肾小管上皮细胞焦亡。 展开更多

关键词 动力相关蛋白1 Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3 细胞焦亡 人肾小管上皮细胞 缺氧/复氧损伤

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高钙离子诱导人肾小管上皮细胞表达MCP-1和HMGB1 被引量：4

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作者 王扬 黎承杨 +5 位作者 孙春 邓耀良 曾国华 王翔 陶芝伟 关晓峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期726-732,共7页

目的:观察体外培养的人肾小管上皮细胞在高钙离子环境下细胞损伤及炎性因子MCP-1和HMGB1的表达。方法:体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2细胞),使用Ca Cl_2配制成不同钙离子浓度的溶液作为刺激剂,实验分为正常对照组(正常培养液)、Ca Ⅰ组(... 目的:观察体外培养的人肾小管上皮细胞在高钙离子环境下细胞损伤及炎性因子MCP-1和HMGB1的表达。方法:体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2细胞),使用Ca Cl_2配制成不同钙离子浓度的溶液作为刺激剂,实验分为正常对照组(正常培养液)、Ca Ⅰ组(5 mmol/L Ca^(2+)液)、Ca Ⅱ组(10 mmol/L Ca^(2+)液)和Ca Ⅲ组(15 mmol/L Ca^(2+)液)。各组细胞分别培养至3 h、6 h、9 h时,采用MTT法检测细胞活力。培养6 h时,采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞凋亡染色,观察各组细胞凋亡情况;同时收集细胞培养上清液,采用ELISA法分别检测各组细胞上清液过氧化氢(H_2O_2)和8-异前列烷(8-IP)浓度,微量酶标仪法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性。此外,培养6 h时收集各组细胞,采用real-time PCR法检测细胞MCP-1和HMGB1的mRNA表达情况;并收集各组细胞上清液,采用ELISA法检测其MCP-1和HMGB1的含量。结果:随着细胞培养液中钙离子浓度的增加,细胞活力抑制率和细胞凋亡明显增加。LDH活性、细胞上清液H_2O_2的浓度和8-IP的含量在Ca Ⅰ组、Ca Ⅱ组和Ca Ⅲ组均较正常对照组高(P<0.05)。real-time PCR的结果显示,与对照组比较,3个钙离子诱导组细胞MCP-1和HMGB1的mRNA表达水平升高,差异有统计学显著性(P<0.05)。此外,3个钙离子诱导组细胞上清液MCP-1和HMGB1含量均较正常组高(P<0.05)。结论:本研究结果提示,高钙离子可诱导人肾小管上皮细胞出现氧化应激损伤,同时细胞高表达MCP-1和HMGB1。由MCP-1和HMGB1引发的炎症反应可能是高钙尿参与结石形成的重要机制。 展开更多

关键词 高钙尿 人肾小管上皮细胞 MCP-1 HMGB1

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糖基化终产物对人肾小管上皮细胞Fractalkine表达的影响 被引量：5

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作者 周燕 孙子林 +1 位作者 周莉 翟清 《医学研究生学报》 CAS 2010年第10期1042-1047,共6页

目的既往实验已观察到糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)可增加人肾系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、RANTES等表达,fractalkine(FKN)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的... 目的既往实验已观察到糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)可增加人肾系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、RANTES等表达,fractalkine(FKN)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中的作用尚不明确。本实验探讨AGE对人肾小管上皮细胞(tubular epithelial cells,TEC)株HK-2 FKN表达的影响。方法运用AGE-BSA按不同的时间和浓度干预HK-2,分别用RT-PCR和ELISA法检测FKN mRNA的表达及蛋白分泌;用AGE-BSA及AGE-BSA加FKN中和抗体分别干预HK-2,用Transwell小室、共培养及荧光染色法检测HK-2趋化和黏附单核细胞株U937的功能。结果AGE-BSA干预组的HK-2 FKN的mRNA表达和蛋白分泌较对照组显著增加(P<0.05),且随干预时间和浓度的增加而进一步增加。AGE-BSA干预组HK-2趋化及黏附的U937数较对照组和加FKN抗体组明显增加(P<0.01)。结论AGE可能部分通过FKN/CX3CR1途径参与DN肾小管间质病变的发生发展。 展开更多

关键词 糖基化终产物 糖尿病肾病 人肾小管上皮细胞 单核细胞

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复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响 被引量：3

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作者 刘明龙 曾永祥 +3 位作者 卢守燕 李建华 刘天喜 赵建雄 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期221-225,共5页

目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF... 目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒100μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL)。培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达。结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01)。结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达。 展开更多

关键词 复肾颗粒 人肾小管上皮细胞 细胞增殖 肾纤维化 转化生长因子β激活激酶

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晚期糖基化终产物对人肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响 被引量：2

8

作者 李琳娜 王利娟 +4 位作者 何可可 李海成 何金花 蒋建伟 刘誉 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期125-129,共5页

目的:研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人肾小管上皮细胞株(HKC)的细胞毒性作用。方法:以体外培养的HKC细胞为研究对象,采用MTT法测定不同质量浓度(0、50、100、200、400、800 mg/L)AGEs对HKC生长的抑制作... 目的:研究晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人肾小管上皮细胞株(HKC)的细胞毒性作用。方法:以体外培养的HKC细胞为研究对象,采用MTT法测定不同质量浓度(0、50、100、200、400、800 mg/L)AGEs对HKC生长的抑制作用,应用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况,RT-PCR分析不同浓度AGEs处理HKC后其IL-1β,TNF-α,HMGB1基因的转录水平变化。结果:AGEs质量浓度为100、200、400、800 mg/L时分别刺激HKC细胞24和48 h后,均能显著抑制细胞的增殖,且抑制作用具有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析发现,AGEs能促使HKC发生凋亡,凋亡率亦随AGEs浓度的增高而增加。RT-PCR方法检测显示,AGEs使HKC细胞IL-1β、TNF-α、HMGB1基因的表达上调。结论:AGEs可抑制人肾小管上皮细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,此作用可能与其上调IL-1β、TNF-α和HMGB1基因的表达有关。 展开更多

关键词 晚期糖基化终产物 细胞毒性 人肾小管上皮细胞

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氨氯地平对造影剂致人肾小管上皮细胞毒性的保护作用 被引量：1

9

作者 周晓蓉 段绍斌 +4 位作者 彭佑铭 刘伏友 叶云 刘瑞洪 李桂源 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期806-811,共6页

目的:从细胞分子水平探讨氨氯地平对造影剂(泛影葡胺)致人肾小管上皮细胞毒性的保护作用及其机制。方法:选择人肾小管上皮细胞株(human kidney cell,HKC)为研究对象,实验分为4组,即模型组(泛影葡胺111g/L)、预防组(泛影葡胺111g/L+氨氯... 目的:从细胞分子水平探讨氨氯地平对造影剂(泛影葡胺)致人肾小管上皮细胞毒性的保护作用及其机制。方法:选择人肾小管上皮细胞株(human kidney cell,HKC)为研究对象,实验分为4组,即模型组(泛影葡胺111g/L)、预防组(泛影葡胺111g/L+氨氯地平10-5mol/L)、氨氯地平对照组(氨氯地平10-5mol/L)和培养基对照组(单纯无血清DMEM-F12培养基),采用四甲基偶氮唑盐试验和细胞培养上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)测定泛影葡胺对HKC细胞毒性,采用Ho-chest33258荧光染色和流式细胞仪DNA分析观察泛影葡胺诱导的肾小管上皮细胞凋亡。采用Western blot和免疫荧光法检测凋亡调控基因Bax的蛋白表达,采用荧光比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性。结果:与模型组相比,预防组细胞活力明显增高,细胞培养上清中LDH浓度明显减低,细胞凋亡率显著降低,Bax蛋白表达下调,caspase-3活性降低。结论:氨氯地平可显著减轻泛影葡胺所致的肾小管上皮细胞损伤,对泛影葡胺诱导的肾小管上皮细胞凋亡有保护作用,其机制可能为通过Bax和caspase-3介导调控造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡。 展开更多

关键词 造影剂 人肾小管上皮细胞 细胞凋亡 钙拮抗剂 BAX CASPASE-3

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胰岛素对人肾小管上皮细胞SREBP-1、FAS表达及脂质代谢的时效性研究 被引量：1

10

作者 郝军 刘淑霞 +5 位作者 刘青娟 赵松 郑书深 姚芳 刘巍 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期517-521,共5页

目的探讨胰岛素对人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubularepithelial cells line,HKCcells)固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合成酶(fat acid synthase,FAS)表达以及细胞... 目的探讨胰岛素对人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubularepithelial cells line,HKCcells)固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合成酶(fat acid synthase,FAS)表达以及细胞内脂滴形成的时效性影响。方法给予人肾小管上皮细胞100nmol·L-1胰岛素刺激并根据刺激时间分为0、2、4、6、12和24h组。SREBP-1和FAS mRNA采用RT-PCR检测,SREBP-1蛋白的表达用免疫细胞化学和Western blot检测,细胞内脂滴检测采用油红O染色。结果和0h组相比,2h组HKC细胞未见SREBP-1和FAS mRNA表达变化,而4、6、12h组HKC细胞SREBP-1和FAS mRNA表达均升高,其中6h组升高最明显,分别是0h对照组的3.578倍和4.272倍,差异有统计学意义。Western blot检测显示4、6和12h组HKC细胞SREBP-1蛋白的前体和成熟片段表达均较0h和2h组增强,其中也是6h组表达最强,前体和成熟片段分别是0h组的4.106倍和5.167倍。免疫细胞化学技术显示SREBP-1蛋白在人肾小管上皮细胞株中定位于细胞质,在4、6和12h组HKC内其表达明显强于0、2和24h组。油红O染色提示胰岛素刺激6h后HKC细胞内可见明显红染脂滴颗粒,而其他各组HKC细胞未见着色。结论胰岛素呈时间依赖性引起人肾小管上皮细胞SREBP-1和FAS的上调,且作用在6h达到高峰,并最终导致细胞内脂滴沉积,这可能是代谢综合征引起肾脏脂质沉积的重要机制之一。 展开更多

关键词 胰岛素 人肾小管上皮细胞 固醇调节元件结合蛋白-1 脂肪酸合成酶 脂滴形成 时效性影响

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过表达THEM4对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响 被引量：1

11

作者 陈宁 郝军 +4 位作者 朱桂云 安晓颖 康丽菲 李晓霞 杨永辉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1740-1743,共4页

目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell,HKC),将细胞随机分为正常对照... 目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell,HKC),将细胞随机分为正常对照组(5.5 mmol·L^(-1)normal glucose,Control)、高糖组(30 mmol·L^(-1)high glucose,HG)、高糖+p Yrads-4-THEM4质粒转染组(HG+THEM4)、高糖+p Yr-adshuttle-4空质粒对照组(HG+V)。后3组经高糖刺激48 h后终止培养,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser473)、TGF-β1、α-SMA的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况。结果高糖刺激可导致人肾小管上皮细胞内THEM4表达降低,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达增强及ColⅠ、ColⅢ分泌;过表达THEM4能够逆转高糖刺激所导致人肾小管上皮细胞phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达,抑制ColⅠ、ColⅢ的分泌。结论过表达THEM4能够降低高糖诱导的胶原分泌,可能是通过抑制phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现的。 展开更多

关键词 硫酯酶超家族成员4 PI3K/AKT 高糖 人肾小管上皮细胞 转化生长因子β1 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原

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同位素标签技术在人肾小管上皮细胞蛋白质组学研究中的应用 被引量：1

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作者 陈永熙 李娅 +5 位作者 张文 陈晓农 王伟铭 张群业 黄秋花 陈楠 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期513-516,共4页

目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴... 目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴定,研究iTRAQ在HK-2细胞的标记情况和蛋白质组学。结果通过质谱检测,检测到带有iTRAQ标记肽段。随机选取20个前体离子,通过3次重复试验,鉴定出iTRAQ标记多肽肽段分别为17、15和18个,标记效率在75.5%～90.0%,且组间标记效率差异无统计学意义(P>0.05)。结论iTRAQ可以在HK-2细胞中标记效果满意,且重复性较好,为进一步研究肾脏疾病的蛋白质组学奠定了基础。 展开更多

关键词 相对和绝对定量的同位素标签试剂 定量蛋白质组学 人肾小管上皮细胞

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高糖激活PI3K/AKT/mTORC1通路诱导人肾小管上皮细胞骨桥蛋白的表达 被引量：6

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作者 王凤梅 蒋克国 +4 位作者 张桂霞 周海胜 查晓军 郝丽 王德光 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1156-1160,共5页

目的探讨高糖刺激上调人肾小管上皮细胞株(HK-2)骨桥蛋白(OPN)表达的分子机制。方法利用高糖(25mmol·L-1)刺激HK-2细胞,并应用特异性抑制剂、siRNA抑制PI3K和(或)mTOR活性,应用Real-time PCR检测OPN mRNA表达;Western blot检测OPN... 目的探讨高糖刺激上调人肾小管上皮细胞株(HK-2)骨桥蛋白(OPN)表达的分子机制。方法利用高糖(25mmol·L-1)刺激HK-2细胞,并应用特异性抑制剂、siRNA抑制PI3K和(或)mTOR活性,应用Real-time PCR检测OPN mRNA表达;Western blot检测OPN、p-AKT、p-S6、Raptor和Rictor蛋白表达。结果高糖刺激呈时间依赖性上调HK-2细胞OPN表达,其中,OPN mRNA在刺激48h后达高峰;OPN蛋白表达在72h达到最高。此外,高糖刺激激活PI3K/AKT/mTORC1信号通路。利用PI3K特异性抑制剂LY294002、mTORC1特异性抑制剂rapamycin抑制PI3K/AKT/mTOR通路后,HK-2细胞的OPN表达明显降低。进一步,siRNA敲低Raptor降低HK-2细胞中OPN蛋白的表达,而敲低Rictor对OPN蛋白表达无影响。结论高糖通过激活PI3K/AKT/mTORC1通路上调HK-2细胞OPN的表达。 展开更多

关键词 高糖 人肾小管上皮细胞 骨桥蛋白 雷帕霉素 调控机制

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稳定敲低SIGIRR的人肾小管上皮细胞的构建及其初步功能的研究 被引量：4

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作者 蒋克国 王德光 +7 位作者 周海胜 查晓军 张桂霞 金福泉 季爽 潘海峰 叶冬青 郝丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第2期129-135,共7页

目的建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与GV248-GFP-Puro慢病毒载体连接产生重组体(GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR)。将测序... 目的建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与GV248-GFP-Puro慢病毒载体连接产生重组体(GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR)。将测序验证正确的重组体与包装质粒(p MDL、pRev、p VSVG)共转染293T细胞进行病毒包装,收集病毒并感染HKC细胞。实时荧光定量PCR(qRTPCR)和Western blot法分析检测HKC细胞中SIGIRR干涉效率。应用白细胞介素-1β(IL-1β)刺激成功敲低SIGIRR的HKC细胞及对照细胞,Western blot法检测其下游核转录因子NF-κB(p65)的磷酸化水平,qRT-PCR分析单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常T细胞表达和分泌的活化调节蛋白(RANTES)mRNA水平。结果成功构建重组慢病毒载体GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR。qRT-PCR和Western blot法均证实在HKC细胞中成功敲低SIGIRR的表达。此外,IL-1β刺激后,与对照细胞相比,敲低SIGIRR的HKC细胞(HKC/sh SIGIRR)的p65磷酸化水平上调,MCP-1和RANTES mRNA表达水平升高。结论 HKC的炎症反应中,SIGIRR蛋白对Toll样受体/白介素1受体(TLR/IL-1R)通路起"刹车"作用。该研究为狼疮性肾炎的治疗提供了新的潜在的靶点。 展开更多

关键词 狼疮性肾炎 人肾小管上皮细胞 SIGIRR 慢病毒载体 NF-ΚB 趋化因子

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大黄素对高尿酸环境下人肾小管上皮细胞PPARγ/NF-κB通路的影响 被引量：4

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作者 王洁 孟凤仙 +7 位作者 商学征 白羽 张承承 白华 卜祥伟 张笑栩 杨蕾 张润云 《辽宁中医杂志》 CAS 2023年第9期174-179,共6页

目的观察大黄素(emodin,EM)对高尿酸(uric acid,UA)环境下人肾小管上皮细胞氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响,探讨其抑制尿酸性肾病(UAN)的分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞株,分为正常对照组、... 目的观察大黄素(emodin,EM)对高尿酸(uric acid,UA)环境下人肾小管上皮细胞氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响,探讨其抑制尿酸性肾病(UAN)的分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞株,分为正常对照组、高UA组、EM低(EML,5μmol·L^(-1))、中(EMM,10μmol·L^(-1))、高(EMH,20μmol·L^(-1))剂量组,设立24、36、48 h 3个时间进行观察。QPCR检测PPARγ、NF-κB mRNA表达水平;Western blot检测PPARγ、IκBα蛋白表达水平;ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,高UA组24 h时间点PPARγmRNA及蛋白、IκBα蛋白下调,TNF-α蛋白上调;36 h时间点PPARγ及IκBα蛋白下调,NF-κB mRNA及TNF-α蛋白上调;48 h时间点IκBα蛋白下调,NF-κB mRNA及TNF-α蛋白上调。与高UA组比较,24 h时间点EML组PPARγmRNA及IκBα蛋白上调,TNF-α蛋白下调,EMM组PPARγmRNA上调,TNF-α蛋白下调,EMH组TNF-α蛋白下调;36 h时间点EML组IκBα蛋白上调,TNF-α蛋白下调,EMM组NF-κB mRNA及TNF-α蛋白下调,IκBα蛋白上调,EMH组NF-κB mRNA及TNF-α蛋白下调,PPARγ蛋白上调;48 h时间点EML组NF-κB mRNA及TNF-α蛋白下调,IκBα蛋白上调,EMM组PPARγmRNA及IκBα蛋白上调,TNF-α蛋白下调,EMH组PPARγmRNA上调,NF-κB mRNA及TNF-α蛋白下调。结论EM可通过调控PPARγ/NF-κB信号通路,抑制下游炎性因子表达,从而改善UAN肾脏炎性损伤。 展开更多

关键词 大黄素 尿酸性肾病 人肾小管上皮细胞 PPARγ/NF-κB通路

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面包皮中水溶性晚期糖基化终产物对人肾小管上皮细胞的氧化损伤 被引量：6

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作者 贾本盼 袁晓金 +2 位作者 范智义 胡静 李巨秀 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期136-141,共6页

晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)是食品在热加工和贮藏过程中形成的一类化合物,与心血管疾病、糖尿病、肾病等多种慢性病的发生有重要联系。本实验研究了含有AGEs的面包皮水提取物(bread crust extract,BCE)对... 晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)是食品在热加工和贮藏过程中形成的一类化合物,与心血管疾病、糖尿病、肾病等多种慢性病的发生有重要联系。本实验研究了含有AGEs的面包皮水提取物(bread crust extract,BCE)对人肾小管上皮细胞(human kidney tubular epithelial cells,HKCs)内氧化应激的影响及细胞损伤。采用不同质量浓度的BCE处理HKCs,并经噻唑蓝法确定后续BCE处理质量浓度;通过检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)及培养上清液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)水平,评价BCE对HKCs胞内氧化应激平衡及细胞损伤程度的影响。结果表明:不同质量浓度的BCE处理24 h后,HKCs胞内ROS水平随着BCE质量浓度的增大不断升高,且在8 mg/m L和12 mg/m L时胞内ROS水平达到最大值;与对照组相比,胞内MDA含量在BCE质量浓度为4 mg/m L和8 mg/m L时极显著增加(P<0.01),但BCE质量浓度达12 mg/m L时,MDA含量却显著降低(P<0.05)。相反,胞内总SOD活力却随着BCE质量浓度的增大而降低,在8 mg/m L和12 mg/m L时,胞内总SOD活力发生极显著降低(P<0.01)。胞外分泌型LDH水平随着BCE处理质量浓度的增大而升高,在BCE质量浓度为8 mg/m L和12 mg/m L时,LDH活力发生极显著增加(P<0.01)。因此,BCE可以通过提高HKCs胞内活性氧水平,引起胞内总SOD活力降低,进而促进细胞发生脂质过氧化反应,改变细胞膜通透性,使胞外LDH活力升高,导致细胞严重受损。 展开更多

关键词 人肾小管上皮细胞 面包皮水提取物 氧化损伤 脂质过氧化

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槐耳清膏对人肾小管上皮细胞内质网应激损伤的保护作用 被引量：3

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作者 傅桐 侯玲 +1 位作者 范洋 杜悦 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期147-150,共4页

目的探讨槐耳清膏对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内质网应激的保护作用。方法将HK-2细胞分为对照组(正常HK-2细胞),毒胡萝卜素(TG)组(5μmol/L TG处理8 h),5 mg/mL、10 mg/mL中药组(5、10 mg/mL槐耳清膏处理12 h),中药+TG组(5、10 mg/mL... 目的探讨槐耳清膏对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)内质网应激的保护作用。方法将HK-2细胞分为对照组(正常HK-2细胞),毒胡萝卜素(TG)组(5μmol/L TG处理8 h),5 mg/mL、10 mg/mL中药组(5、10 mg/mL槐耳清膏处理12 h),中药+TG组(5、10 mg/mL槐耳清膏处理4 h后加入5μmol/L TG共同作用8 h)。采用Western blotting检测各组细胞内质网源性转录因子(CHOP)和内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达情况。结果与对照组相比,TG组细胞CHOP和GRP78的表达显著增加(P<0.05),中药组CHOP及GRP78表达无明显变化(P>0.05)。与TG组相比,中药(5、10 mg/mL)+TG组CHOP与GRP78表达显著减少。结论TG可诱导人肾小管上皮HK-2细胞发生内质网应激反应。适宜浓度的槐耳清膏可能通过下调CHOP、GRP78表达,抑制HK-2细胞内质网应激反应,从而发挥保护肾小管上皮细胞的作用。 展开更多

关键词 槐耳清膏 人肾小管上皮细胞 内质网应激

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迷迭香酸对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制研究 被引量：1

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作者 蔡闫闫 黄松明 +6 位作者 丁巍 张爱华 冯泉城 费莉 郭梅 潘晓勤 陈荣华 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期356-361,共6页

目的:探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对醛固酮(aldosterone,ALD)诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),分为5组:正常对照组、ALD(100nmol/L)诱导组、ALD(100nmol/L)+RA(5μg/ml... 目的:探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对醛固酮(aldosterone,ALD)诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),分为5组:正常对照组、ALD(100nmol/L)诱导组、ALD(100nmol/L)+RA(5μg/ml)干预组、ALD(100nmol/L)+RA(25μg/ml)干预组、ALD(100nmol/L)+线粒体呼吸链酶抑制剂rotenone(ROT,10μmol/L)干预组。应用倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;应用RT-PCR、Western blot检测波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙粘蛋白(E-cadherin)的表达水平;采用Western blot检测细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)的磷酸化水平;DCFDA荧光法定量检测活性氧(ROS)表达情况。结果:①与对照组相比,醛固酮诱导肾小管上皮细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;Vimentin和α-SMA表达显著上调,E-cadherin表达下降;ERK1/2磷酸化水平增高;活性氧族(ROS)释放显著增高。②不同浓度的RA(5μg/ml,25μg/ml)及ROT(10μmol/L)干预组与ALD(100nmol/L)诱导组相比,Vimentin mRNA和α-SMA蛋白表达下调,E-cadherin mRNA及蛋白表达均上调;ERK1/2磷酸化水平下降;活性氧族(ROS)表达显著下降。结论:RA能够抑制醛固酮诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT),RA对EMT的负性调节作用可能是通过抑制ROS引起的ERK1/2信号转导途径实现的。 展开更多

关键词 迷迭香酸 人肾小管上皮细胞 上皮细胞转分化 醛固酮 活性氧

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达格列净对棕榈酸诱导的人肾小管上皮细胞损伤的保护机制研究 被引量：3

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作者 丁庭庭 潘李萌 +3 位作者 杨光 杨婧 钟兴 潘天荣 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第3期390-395,401,共7页

目的探讨达格列净对棕榈酸诱导的人肾小管上皮细胞的保护作用及机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常对照(CON)组、棕榈酸(PA)组、棕榈酸+达格列净(PA+Dapa)组、单纯达格列净(Dapa)组,干预24 h后采用CCK-8法检测细胞增殖... 目的探讨达格列净对棕榈酸诱导的人肾小管上皮细胞的保护作用及机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常对照(CON)组、棕榈酸(PA)组、棕榈酸+达格列净(PA+Dapa)组、单纯达格列净(Dapa)组,干预24 h后采用CCK-8法检测细胞增殖力,DCF免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光检测线粒体膜电位,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,Western blot检测凋亡蛋白caspase3、Cleaved caspase3和细胞色素C(Cyto C)水平,Hoechst33258荧光检测细胞凋亡情况。结果与CON组比较,PA组细胞增殖力降低,ROS水平升高,线粒体膜电位下降,SOD水平降低及MDA水平升高,凋亡蛋白caspase3和Cleaved caspase3水平升高以及Cyto C水平表达量增加,Hoechst33258检测凋亡水平增加,差异均有统计学意义(P<0.05);Dapa组以上指标与CON组比较差异无统计学意义;与PA组比较,PA+Dapa组细胞增殖力升高,ROS水平降低,线粒体膜电位上升,SOD水平升高、MDA水平降低,凋亡蛋白caspase3、Cleaved caspase3及Cyto C蛋白表达量降低,Hoechst33258检测凋亡水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论达格列净对棕榈酸诱导的人肾小管上皮细胞具有保护作用,机制可能与改善线粒体功能及氧化应激水平有关。 展开更多

关键词 人肾小管上皮细胞 糖尿病肾病 达格列净 棕榈酸 线粒体功能障碍 氧化应激

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iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤 被引量：2

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作者 薛璐 汪靓婧 +2 位作者 胡雪茹 吴永贵 齐向明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第3期379-385,共7页

目的探讨钙离子非依赖型磷酸酯酶A2β(iPLA2β)在高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达,iPLA2β与铁死亡的关系以及iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护机制。方法用30 mmol/L葡萄糖刺激HK-2细胞,iPLA2β质粒转染构建过表... 目的探讨钙离子非依赖型磷酸酯酶A2β(iPLA2β)在高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达,iPLA2β与铁死亡的关系以及iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护机制。方法用30 mmol/L葡萄糖刺激HK-2细胞,iPLA2β质粒转染构建过表达模型,铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)和铁死亡激活剂erastin作为铁死亡对照组。干预36 h后,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、铁含量,DCF免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot法检测铁死亡指标ACSL4、GPX4、LPCAT3、TFR1的表达。结果高糖刺激可以降低HK-2细胞内iPLA2β的表达,HK-2细胞内ROS、MDA水平升高,GSH、SOD水平降低。Western blot结果显示ACSL4、LPCAT3、TFR1表达增高,GPX4表达降低。Fer-1干预后上述指标改善。过表达iPLA2β后,可降低KIM-1表达,减轻HK-2细胞损伤。进一步研究发现,过表达iPLA2β后可抑制高糖诱导的HK-2细胞的氧化应激和铁死亡。另外,erastin减弱了iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用。结论iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的HK-2细胞损伤。 展开更多

关键词 人肾小管上皮细胞 糖尿病肾病 铁死亡 钙离子非依赖型磷酸酯酶A2β

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