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人肺腺癌细胞系A549细胞双向电泳-飞行时间质谱研究 被引量:4
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作者 杨拴盈 田应选 +3 位作者 南岩东 卜丽娜 霍树芬 阮禹松 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期422-426,共5页
目的初步分析人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质表达情况,从蛋白组水平探讨肺腺癌发病的分子机制。方法应用2-DE技术对人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生... 目的初步分析人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质表达情况,从蛋白组水平探讨肺腺癌发病的分子机制。方法应用2-DE技术对人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生物信息学进行蛋白质鉴定。结果3块胶平均蛋白斑点数为1 138±49,平均匹配点数为986±32,匹配率为85.8%。随机选取背景清晰、分辨清楚、蛋白含量较高的20个斑点进行MALDI-TOF-MS分析,共获得了18个肽质量指纹图谱(PMF)。将PMFs质量数据通过Aldente软件查询SWISS-PROT数据库,根据匹配片段及氨基酸序列覆盖率等,初步鉴定出15种蛋白质。根据功能,这些蛋白质可分为:①基本代谢相关的酶类:果糖2-磷酸醛缩酶、视网醛脱氢酶1(RALDH1)、吡多醛激酶;②细胞骨架类:蛋白细胞角蛋白8(CK8)、-β2链微管蛋白;③应激相关蛋白:蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3);④信号转导分子:膜联蛋白1(ANX1)、膜联蛋白4(ANX4);⑤分子伴侣:热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白-β1、抑制素(PHB);⑥转录及翻译相关蛋白:不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H);⑦杂类:Rgr protein、NPM、PCBP1。结论应用2-DE/MALDI-MS方法获得了较为理想的人肺腺癌细胞系A549细胞2-DE蛋白质表达谱,初步鉴定了15种蛋白质。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞系 蛋白质组学 双向电泳 基质辅助激光解吸离子化电离飞行时间质谱 肽指纹图谱
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尿刊酸修饰的壳聚糖介导野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系H1299增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 王伟 姚静 +2 位作者 周建平 李夷平 陶磊 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期440-444,共5页
目的:研究尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因转染对人肺腺癌细胞系H1299(p53基因缺失)的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,采用荧光显微术、RT-PCR法和West-ernblot法分别检测细胞内绿... 目的:研究尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因转染对人肺腺癌细胞系H1299(p53基因缺失)的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,采用荧光显微术、RT-PCR法和West-ernblot法分别检测细胞内绿色荧光蛋白(GFP)、wt-p53mRNA和蛋白的表达,并通过MTT法分析基因转染对细胞的生长抑制作用,DAPI染色法和琼脂糖凝胶电泳法评价其对细胞的诱导凋亡作用。结果:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,大量细胞表达GFP,细胞内wt-p53mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞生长受到显著地抑制,凋亡细胞数量明显增加,并有清晰的DNA梯状条带出现。结论:UAC介导wt-p53基因转染能够显著地抑制人肺腺癌细胞系H1299的增殖,并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 尿刊酸修饰的壳聚糖 野生型P53 人肺腺癌细胞系 增殖 凋亡
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人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究
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作者 张利群 陈杭薇 +3 位作者 王四海 辛庆红 杜玉国 尤兰华 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第12期15-16,共2页
目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(... 目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western Blot进行验证。结果 得到了约6 5 0 bp的基因插入片段,DNA测序表明该基因高度保守。筛选出了稳定高量表达M2 - 1基因的PAa和A5 4 9细胞,并被证实有M2 - 1蛋白表达。结论 获得了稳定表达h RSV M2 - 1蛋白的PAa和A5 4 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 基因转染 转录调节 基因真核表达载体 M2-1基因 人肺腺癌细胞系 Western A549细胞 HRSV 稳定表达 DNA测序 PAa 基因重组 阳性表达 插入片段 Blot 蛋白表达 脂质体 筛选
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紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ基因的表达 被引量:4
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作者 王志举 樊红琨 +2 位作者 李敏 赵国强 董子明 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期358-363,共6页
目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20... 目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20;MTT法检测A549/TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数(RF);细胞克隆形成法测定A549/TXL20对紫杉醇的敏感性;高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度;RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp和topo Ⅱ的基因表达。结果①A549/TXL20形态不规则,较亲本细胞略小,核/浆比增加,倍增时间没有明显变化;②A549/TXL20对紫杉醇的RF为19.3,对顺铂的RF为67.4,对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性;③A549/TXL20对紫杉醇的敏感性降低,其紫杉醇的含量较亲本细胞下降;④A549/TXL20细胞中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20,其耐药机制可能与mdr1、GST-π、mrp1l、rp和DNA polβ基因的高表达有关。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞系 多药耐药 紫杉醇 DNA聚合酶Β
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人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系DNA polβ的表达
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作者 王志举 李敏 +1 位作者 赵国强 董子明 《山东医药》 CAS 北大核心 2007年第1期19-20,共2页
目的建立人肺腺癌紫杉醇多药耐药细胞系,测定耐药细胞系DNA聚合酶β(DNA polβ)基因和蛋白表达。方法以紫杉醇为诱导药,人肺腺癌细胞系(A 549)为诱导对象,逐步增加紫杉醇药物浓度进行诱导,建立耐紫杉醇的多药耐药细胞系A 549/TXL 20。采... 目的建立人肺腺癌紫杉醇多药耐药细胞系,测定耐药细胞系DNA聚合酶β(DNA polβ)基因和蛋白表达。方法以紫杉醇为诱导药,人肺腺癌细胞系(A 549)为诱导对象,逐步增加紫杉醇药物浓度进行诱导,建立耐紫杉醇的多药耐药细胞系A 549/TXL 20。采用M TT法检测A 549/TXL 20耐药指数,同时对顺铂、长春新碱、5氟脲嘧啶、丝裂霉素和羟基尿素五种药物进行交叉耐药检测。RC-PCR法和W estern b lotting法分别测定细胞内DNA polβ表达水平。结果A 549/TXL 20对紫杉醇及其他五种抗癌药物均有不同程度的耐药性。A 549/TXL 20细胞中DNA polβmRNA及蛋白的表达水平均高于A 549细胞(P<0.05)。结论A 549/TXL 20具有多药耐药表型,耐药性产生可能与细胞内DNA polβ表达增高有关。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞系 抗药性 多药 紫杉醇DNA聚合酶β
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Effects of herpes simplex virus thymidine kinase/acyclovir system on growth of human pulmonary adenocarcinoma A549 cell line in vitro and in vivo
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作者 何祥梁 何东华 +4 位作者 郭先健 钱桂生 黄桂君 陈维忠 李淑萍 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2002年第3期227-231,共5页
Objective: To observe the effect of anciclovir (ACV) treatment on tumors induced by inoculation of TK gene-transfected human pulmonary adenocarcinoma A549 cells in nude mice. Methods: A recombinant plasmid containing ... Objective: To observe the effect of anciclovir (ACV) treatment on tumors induced by inoculation of TK gene-transfected human pulmonary adenocarcinoma A549 cells in nude mice. Methods: A recombinant plasmid containing TK gene was constructed and transfected into A549 cells by electroporation. The sensitivity of the transgenic cells (A549-TK) to ACV was examined by MTT assay in vitro and for in vivo observation, inoculation of A549-TK and A-549 cells into nude mice was separately performed to induce tumor growth, the response of which to ACV treatment was observed, and the tumor tissues were pathologically examined. Results: A recombinant plasmid containing TK gene was successfully constructed and transfected into A549 cells. The sensitivity of A549-TK cells to ACV was 43 times higher than that of A549 cells. The tumors induced by A549-TK cells showed no significant increase in size after ACV treatment (P>0. 05) , and light microscopy revealed local tissue necrosis, karyoklasis, and nuclei disappearance. Conclusion: A549-TK cells acquires sensitivity to ACV both in vitro and in vivo, and ACV can inhibit the growth of tumors induced by A549-TK cell inoculation in nude mice. 展开更多
关键词 pulmonary carcinoma herpes simplex virus thymine kinase gene gene therapy ACYCLOVIR nude mice
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