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CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用
1
作者 蔡天晶 黎志良 +1 位作者 金凌应 甘云波 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期991-994,共4页
目的:探讨CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用。以及CD46和Nectin-4之间的相互作用。方法:分为麻疹病毒感染前处理组和感染后2 h组,均用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理人肺泡上皮细胞,并设对照组。检测细胞内病毒滴... 目的:探讨CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用。以及CD46和Nectin-4之间的相互作用。方法:分为麻疹病毒感染前处理组和感染后2 h组,均用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理人肺泡上皮细胞,并设对照组。检测细胞内病毒滴度的变化,采用Western blot和Real-time PCR检测NP蛋白的表达水平,并运用免疫共沉淀检测CD46与Nectin-4的相互作用。结果:与对照组相比,麻疹病毒感染前用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理的人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度显著降低,分别为对照组的48.03%和49.53%,同时用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理使病毒滴度下降为27.15%,差异均有统计学意义(P<0.01)。然而,在麻疹病毒感染2 h后用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理,人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度和NP蛋白量未见显著减少。Western blot和Real-time PCR结果与上述结果一致;免疫共沉淀实验显示,CD46与Nectin-4存在相互作用。结论:CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染肺泡上皮细胞中起到介导作用,CD46与Nectin-4可能存在协同作用,该作用对麻疹病毒的感染起到了增强效果。 展开更多
关键词 麻疹病毒 人肺泡上皮细胞 CD46 Nectin-4
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高氧抑制SIRT1和PGC-1α表达引起肺泡上皮细胞线粒体功能障碍 被引量：3
2
作者 汪璠 雷小平 +3 位作者 康兰 朱晓丹 阮颖 董文斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期788-793,共6页
目的探讨沉默配对型信息调节因子2同源物1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(SIRT1-PGC-1α)信号途径介导高氧对A549人肺泡上皮细胞线粒体功能的影响及其可能机制。方法取对数生长期的人肺泡上皮细胞,随机分为对照组和高氧组... 目的探讨沉默配对型信息调节因子2同源物1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(SIRT1-PGC-1α)信号途径介导高氧对A549人肺泡上皮细胞线粒体功能的影响及其可能机制。方法取对数生长期的人肺泡上皮细胞,随机分为对照组和高氧组。对照组置于37℃、50 mL/L CO2饱和湿度培养箱中培养,高氧组予以950 mL/L O2处理。培养24 h后,Mito SOX^TM染色法检测线粒体活性氧(Mito-ROS)水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,实时定量PCR检测线粒体DNA含量及SIRT1、PGC-1α、核呼吸因子1(NRF1)和线粒体转录因子A(TFAM)mRNA水平,Western blot法检测SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白水平。结果与对照组相比,高氧组细胞Mito-ROS明显增加,膜电位明显下降;高氧组线粒体DNA含量减少,SIRT1、PGC-1α、NRF1和TFAM的mRNA和蛋白表达均下降。结论高氧诱导SIRT1和PGC-1α表达降低引起人肺泡上皮细胞线粒体功能障碍。 展开更多
关键词 高氧 人肺泡上皮细胞 沉默配对型信息调节因子2同源物1(SIRT1) 过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α) 线粒体功能障碍
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人脐带间充质干细胞对感染状态下人肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响
3
作者 杨淑梅 郑璇儿 +5 位作者 杨浩鸣 卢春敏 赖卫明 饶韵蓓 任竹潇 杨杰 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期842-847,共6页
【目的】探讨人脐带间充质干细胞(h UCMSC)对感染铜绿假单胞菌(PA)状态下人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)的影响。【方法】人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549(1×105/m L)2 m L与PA(3×104CFU/m L)2 m L共培育6 h后,加入h UCMSC(1×106/m L)... 【目的】探讨人脐带间充质干细胞(h UCMSC)对感染铜绿假单胞菌(PA)状态下人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)的影响。【方法】人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549(1×105/m L)2 m L与PA(3×104CFU/m L)2 m L共培育6 h后,加入h UCMSC(1×106/m L)2 m L为实验组,加入等量磷酸缓冲液(PBS)为感染组,A549与PBS及培养基共培育为对照组。比较组间A549细胞形态学改变(透射电镜),A549细胞存活率(CCK-8新型细胞增殖检测试剂盒),A549细胞凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪)以及A549肺表面活性物质A(SP-A)表达量(Western Blot)。【结果】电镜细胞形态学观察显示,感染组A549细胞受损明显,胞质出现空泡变性,染色质高度凝集,可见凋亡小体;实验组细胞包膜结构完整,核膜完整,核仁明显,核染色质电子密度低,染色质均一,未见凋亡小体;对照组A549细胞结构完整,细胞膜表面微绒毛丰富,核膜完整,核周间隙结构正常,染色质均一;感染组与对照组相比,感染组A549细胞细胞存活率显著降低[(70.35±2.89)%与(97.37±2.07)%,n=3,P<0.01],凋亡率显著增加[(8.63%±0.16)%与(2.55±0.11)%,n=3,P<0.01],SP-A表达显著降低[(0.105±0.01)与(0.232±0.015),n=3,P<0.01];实验组与感染组相比,实验组细胞存活率显著增加[(85.69±3.07)%与(70.35±2.89)%,n=3,P<0.01],凋亡率显著下降[(6.34±0.12)%与(8.63±0.16)%,n=3,P<0.01],感染组中,PA可能损伤A549细胞,使其SP-A表达量著减少(n=5,P<0.05),实验组中,h UCMSC可能对感染后A549细胞的保护作用,其SP-A表达量增加(n=5,P<0.05)。【结论】h UCMSC能抑制感染状态下的A549细胞凋亡,保护A549细胞分泌SP-A。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549) 细胞凋亡 SP-A
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绵羊肺炎支原体对人肺泡Ⅱ型上皮细胞活性及炎症反应的影响 被引量：1
4
作者 高力扬 张颖 +5 位作者 陈方正 李小杰 马金成 马小明 赵琰龙 李敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1051-1057,共7页
为探究绵羊肺炎支原体(MO)是否对人体造成潜在影响,本研究以人肺泡Ⅱ型上皮细胞为细胞模型,将MO Y98株荧光染色后感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞,于激光共聚焦显微镜下可见MO存在于细胞中;分别利用CCK-8及CellTiter-LumiTM试剂盒检测细胞的增... 为探究绵羊肺炎支原体(MO)是否对人体造成潜在影响,本研究以人肺泡Ⅱ型上皮细胞为细胞模型,将MO Y98株荧光染色后感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞,于激光共聚焦显微镜下可见MO存在于细胞中;分别利用CCK-8及CellTiter-LumiTM试剂盒检测细胞的增殖及活力,结果显示MO对人肺泡Ⅱ型上皮细胞的增殖及活性均无显著影响;扫描电镜检测细胞形态,结果显示肺泡上皮细胞伪足明显增多;基因芯片分析筛选出3个mRNA及5个lncRNA,荧光定量PCR验证后确定SCNN1G、LOX、ST6GALNAC1及lncRNA RP11-29G8.3-001在MO感染后的转录水平发生显著变化;荧光定量PCR检测肺泡上皮细胞中IL-1β、TNF-α、IFN、IRF7等炎症因子,结果显示这些因子基因的转录水平无明显变化;采用将lncRNA RP11-29G8.3-001过表达的方法对其功能进行研究,结果显示少量lncRNA RP11-29G8.3-001表达增高不会调控细胞免疫相关基因的表达。本研究结果表明MO并不降低人肺泡Ⅱ型上皮细胞的增殖及活性,且MO对人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子的表达无显著影响,提示MO对人肺泡Ⅱ型上皮细胞影响较小。本研究为防范MO对人呼吸系统存在的潜在影响提供了实验依据。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 人肺泡Ⅱ型上皮细胞 lncRNA RP11-29G8.3-001
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不同浓度重组人促红细胞生成素对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的影响研究 被引量：5
5
作者 党嘉文 董文斌 +2 位作者 雷小平 何娜 郭琳 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2018年第33期4094-4097,4103,共5页
目的探讨不同浓度重组人促红细胞生成素(rhEPO)对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)功能的影响。方法 2017年1—12月,培养A549细胞,取对数生长期的A549细胞,将其随机分为对照组(将细胞置于37℃恒温的50 ml/L CO2培养箱中进行培养... 目的探讨不同浓度重组人促红细胞生成素(rhEPO)对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)功能的影响。方法 2017年1—12月,培养A549细胞,取对数生长期的A549细胞,将其随机分为对照组(将细胞置于37℃恒温的50 ml/L CO2培养箱中进行培养)、高氧组(以3 L/min速度通过900 ml/L O2和50 ml/L CO2高纯混合气,持续通气10 min,之后进行密闭培养)及10、20、50、100 U/ml rhEPO组(分别将细胞加入含10、20、50、100U/ml rhEPO的培养基,之后预处理24 h,再用高氧诱导),每组中包含8个复孔。24 h后,采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化,细胞增殖实验检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果高氧组细胞间空隙较大,细胞受损明显,活细胞数量显著降低,悬浮细胞明显增多;10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞损伤改善,50、100U/ml rhEPO组细胞形态学变化与对照组较为相似。高氧组及10、20 U/ml rhEPO组细胞增殖水平小于对照组(P<0.05);10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于高氧组(P<0.05);50、100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于10、20 U/ml rhEPO组(P<0.05);100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于50 U/ml rhEPO组(P<0.05)。高氧组及10、20U/ml rhEPO组细胞凋亡率大于对照组(P<0.05);10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于高氧组(P<0.05);50、100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于10、20 U/ml rhEPO组(P<0.05);100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于50 U/ml rhEPO组(P<0.05)。结论高氧抑制A549细胞增殖、促进A549细胞凋亡,而rhEPO可减轻这种作用,且50、100U/ml rhEPO能有效抑制A549细胞发生损伤。 展开更多
关键词 肺损伤 高氧症 细胞增殖 细胞凋亡 重组人促红细胞生成素 人肺泡Ⅱ型上皮细胞
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卷烟添加木犀草素与黄芩苷混合物对细胞损伤的减害作用研究
6
作者 陈义坤 魏敏 +4 位作者 宋旭艳 罗诚浩 李文芳 王君 胡霞敏 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期6-9,共4页
将木犀草素、黄芩苷混合物加入卷烟制成样品卷烟,研究其在卷烟烟气中对人肺泡上皮细胞损伤的影响。用不同浓度卷烟烟气提取物(cigarette smoke extract,CSE)刺激人肺泡上皮细胞A549,采用MTT实验检测细胞存活率,彗星实验观察DNA损伤,荧... 将木犀草素、黄芩苷混合物加入卷烟制成样品卷烟,研究其在卷烟烟气中对人肺泡上皮细胞损伤的影响。用不同浓度卷烟烟气提取物(cigarette smoke extract,CSE)刺激人肺泡上皮细胞A549,采用MTT实验检测细胞存活率,彗星实验观察DNA损伤,荧光法测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。结果表明,与对照卷烟比较,样品卷烟组细胞存活率升高,细胞内活性氧(ROS)彗星尾长、尾部DNA含量、尾距、Olive尾距均小于对照卷烟组。因此,添加木犀草素与黄芩苷混合物的特制卷烟烟气对细胞的损伤较少,产生较少ROS,减少一定的DNA损伤,对细胞毒性有一定的减害作用。 展开更多
关键词 卷烟烟气提取物 木犀草素 黄芩苷 人肺泡上皮细胞A549 细胞内活性氧 DNA损伤
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PLTP在香烟诱导A549细胞合成白介素8中的作用 被引量：1
7
作者 余秀英 陈亚娟 +3 位作者 巫凤苹 邹琳琳 陈雨晗 黎友伦 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期318-322,共5页
目的:研究磷脂转运蛋白(Phospholipid transfer protein,PLTP)对香烟诱导人肺泡上皮A549细胞合成白介素8(Interleukin-8,IL-8)的影响。方法:体外培养人肺泡上皮A549细胞株24 h,加入不同浓度的烟草提取物(Cigarette smoking extracts,CSE... 目的:研究磷脂转运蛋白(Phospholipid transfer protein,PLTP)对香烟诱导人肺泡上皮A549细胞合成白介素8(Interleukin-8,IL-8)的影响。方法:体外培养人肺泡上皮A549细胞株24 h,加入不同浓度的烟草提取物(Cigarette smoking extracts,CSE)共培养24 h;1.0%CSE与A549细胞株共培养6、12、24、48 h;PLTP siRNA预处理后,加入CSE共培养24 h。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测A549细胞增殖情况;实时定量PCR(RT-PCR)检测PLTP和IL-8 mRNA的表达量;蛋白质印迹法(Western blot)检测PLTP的表达量;酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测IL-8相对含量。结果:0.125%烟草提取物促进A549细胞增殖,0.25%、0.5%、1.0%CSE浓度对A549细胞生长无明显影响,而2.0%、4.0%CSE浓度抑制A549细胞增殖;不同浓度的(0.25%、0.5%、1.0%)CSE作用24 h后,PLTP和IL-8 mRNA及蛋白表达量增加,并且IL-8蛋白分泌呈现一定时间依赖性;PLTP siRNA处理后,IL-8表达量明显升高(P<0.001)。结论:PLTP基因缺失促进香烟诱导A549细胞合成IL-8。 展开更多
关键词 烟草烟雾提取物 人肺泡上皮细胞 A549 PLTP IL-8
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