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沉默HerpUD1基因表达提高人肝L-02细胞对放射处理的敏感性
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作者 张乃宁 杨彦勇 +2 位作者 马莉 张情 宋立华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期272-277,共6页
目的:利用RNA干扰技术沉默人肝L-02细胞内可诱导的同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(homocysteine-inducible,endoplasmic reticulum stress-inducible,ubiquitin-like domain member 1,HerpUD1)基因表达,探讨其对人肝L-02细胞的辐... 目的:利用RNA干扰技术沉默人肝L-02细胞内可诱导的同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(homocysteine-inducible,endoplasmic reticulum stress-inducible,ubiquitin-like domain member 1,HerpUD1)基因表达,探讨其对人肝L-02细胞的辐射增敏作用。方法:根据HerpUD1基因序列设计shRNA片段,构建靶向HerpUD1基因的shRNA表达载体,稳定转染L-02细胞,采用real-time PCR和Western blotting检测转染后细胞中HerpUD1 mRNA及蛋白的表达。以8 Gy X射线照射转染后细胞,Hoechst荧光染色观察细胞的凋亡情况。结果:成功构建靶向HerpUD1的真核表达干扰载体,并建立稳定转染shHerpUD1的L-02细胞株。在稳定转染的L-02细胞中,shHerpUD1-1420干扰片段干扰效果最好,与pGPU6-NC组(阴性对照组)相比,shHerpUD1-1420组HerpUD1 mRNA表达显著下降[(0.15±0.05)vs(1.00±0.08),P<0.05],其蛋白水平的表达也显著降低[(0.19±0.01)vs(1.62±0.08),P<0.01]。转染后细胞经8 Gy X射线照射后24 h,L-02-shHerpUD1-1420组细胞凋亡率显著高于L-02-NC组(阴性对照组)[(10.23±3.37)%vs(6.89±1.49)%,P<0.01],而L-02-NC组与L-02-Neo组相比则无显著差异(P>0.05)。结论:HerpUD1基因表达沉默显著增加X射线辐射引起的L-02细胞凋亡,具有辐射增敏作用。 展开更多
关键词 RNA干扰 HerpUD1基因 内质网膜蛋白 人肝l-02细胞 放射处理 增敏作用
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BDE-209对人正常肝L-02细胞生长和凋亡的影响 被引量:1
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作者 朱婷婷 陆永奋 +6 位作者 齐秀娟 黄毅 孟海涛 尹东高 孙滔滔 邓臣 吴德生 《北京大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期966-970,共5页
采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)和Hoechst 33342/PI等,分析十溴联苯醚(BDE-209)对人正常肝L-02细胞增殖和凋亡的影响。结果显示,在不同浓度水平(0~70μg/mL)的BDE-209中暴露24小时后,细胞增殖抑制率随着BDE-209浓度的升高而升高。经SPS... 采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)和Hoechst 33342/PI等,分析十溴联苯醚(BDE-209)对人正常肝L-02细胞增殖和凋亡的影响。结果显示,在不同浓度水平(0~70μg/mL)的BDE-209中暴露24小时后,细胞增殖抑制率随着BDE-209浓度的升高而升高。经SPSS-Probit-Logit法计算,得出BDE-209对人正常肝L-02细胞24小时的IC50为127.08±24.93μg/mL。在不同浓度水平(0~15μg/mL)的BDE-209中暴露24小时后,与对照组相比,各剂量组细胞未出现明显的细胞形态变化,仅在15μg/mL剂量组观察到细胞减少的现象。凋亡染色后,荧光显微镜检发现,随着BDE-209浓度升高,亮蓝、淡粉染色细胞数量增大,人正常肝L-02细胞的凋亡率增高。与对照组相比,各剂量组差异均具有统计学意义。分析结果表明,BDE-209可引起人正常肝L-02细胞增殖受到抑制,并诱导细胞凋亡率增加。 展开更多
关键词 BDE-209 人肝l-02细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用 被引量:2
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作者 陈大卫 梁娇娇 +9 位作者 程月 瞿恒贤 陈春萌 任晨瑜 张臣臣 关成冉 马文龙 陈霞 李启明 顾瑞霞 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期61-67,共7页
建立由游离脂肪酸(free fat acid,FFA)诱导的体外人肝细胞L-02非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型,探究益生菌发酵乳在模型中对人肝细胞的益生作用。利用FFA(油酸∶棕榈酸=2∶1,摩尔比)诱导人肝细胞脂肪变... 建立由游离脂肪酸(free fat acid,FFA)诱导的体外人肝细胞L-02非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型,探究益生菌发酵乳在模型中对人肝细胞的益生作用。利用FFA(油酸∶棕榈酸=2∶1,摩尔比)诱导人肝细胞脂肪变性,通过细胞存活率、胞内甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)含量、培养液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量及细胞凋亡率等指标来评价脂肪变性模型,探讨鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠4周后的血清在模型中对人肝细胞L-02的影响。结果表明,当模型中FFA的浓度为1.5和2 mmol/L时,人肝细胞的存活率显著低于未添加(P<0.05),均低于32%,细胞数量明显减少且形状发生变化;当FFA浓度为1 mmol/L时,人肝细胞存活率较高,为86.37%,脂滴数量达到最高,此时建立的NAFLD细胞模型中胞内TG含量和培养液中AST含量分别为5.73 mmol/L和113.50 U/L,均显著高于未添加(P<0.05),而胞内TC含量及培养液中ALT含量则无显著性差异(P>0.05),且细胞凋亡率差异较小。鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠后的血清降低了NAFLD模型中肝细胞的脂滴数量,胞内TG含量及大鼠血清细胞培养液中AST含量均显著低于未干预菌株的对照组大鼠血清(P<0.05),分别为1.95 mmol/L和93.33 U/L;细胞凋亡率较对照组下降了2.96%,正常细胞数量上升了4.50%。利用1 mmol/L的FFA可以建立人肝细胞L-02的NAFLD模型,鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中人肝细胞L-02的脂肪变性具有改善作用。 展开更多
关键词 鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301 发酵乳 人肝细胞l-02 游离脂肪酸 非酒精性脂肪性
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苦参碱对于人肝细胞冻存保护效应的实验性研究 被引量:6
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作者 郭跃虎 高毅 陈建锋 《实用医学杂志》 CAS 2006年第12期1347-1349,共3页
目的:了解苦参碱对人肝细胞液氮冻存复苏后功能的影响,探索一种改善人肝细胞冻存的新方法。方法:将胎肝细胞及常规培养的L-02人肝细胞系分别以5种不同冻存保护体系犤10%二甲亚砜(DMSO)、5%DMSO+0.2mg/L苦参碱、5%DMSO+2mg/L苦参碱、5%DM... 目的:了解苦参碱对人肝细胞液氮冻存复苏后功能的影响,探索一种改善人肝细胞冻存的新方法。方法:将胎肝细胞及常规培养的L-02人肝细胞系分别以5种不同冻存保护体系犤10%二甲亚砜(DMSO)、5%DMSO+0.2mg/L苦参碱、5%DMSO+2mg/L苦参碱、5%DMSO+6mg/L苦参碱、5%DMSO+10mg/L苦参碱犦在液氮中冷冻保存1个月。1个月后快速复苏,进行存活率、形态学及功能检测。结果:不同冻存保护体系保存的人肝细胞存活率、形态学及功能表现均有所不同。其中5%DMSO+6mg/L苦参碱组效果最好,复苏后细胞存活率、24h贴壁率及细胞功能检测优于其他冻存液组。结论:⑴苦参碱对人肝细胞液氮冻存有保护作用,6mg/L苦参碱是最好的浓度;⑵苦参碱与DMSO联合使用降低了冻存保护剂DMSO的浓度,表明两者有协同作用。 展开更多
关键词 细胞 低温保存 苦参碱 人胎细胞 l-02人肝细胞
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