目的探讨体外培养人羊膜上皮细胞(HAEC)并定向诱导分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法采用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离培养HAEC,通过Transwell^(TM)非接触共培养系统与人角膜上皮细胞(CEC)进行共培养2周,诱导HAEC分化;通过免疫荧光...目的探讨体外培养人羊膜上皮细胞(HAEC)并定向诱导分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法采用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离培养HAEC,通过Transwell^(TM)非接触共培养系统与人角膜上皮细胞(CEC)进行共培养2周,诱导HAEC分化;通过免疫荧光细胞化学染色法检测诱导后HAEC中细胞角蛋白3+12(CK3+12)、CK14、CK19、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测分化细胞CK12、CK14、CK19、P63 m RNA水平,Western blot法检测HAEC诱导前后CK3+12、CK14、CK19、P63的蛋白水平。结果体外培养的HAEC和CEC形态相似,免疫荧光细胞化学染色检测到HAEC诱导分化细胞CK3+12、CK14、CK19、PCNA呈阳性表达,诱导后HAEC中P63、CK12、CK19、CK14 mRNA相对表达量分别为共培养前的3.35、6.76、2.42、1.06倍。结论在与CEC共培养2周后,HAEC可以转分化为角膜上皮样细胞,HAEC可用作组织工程角膜重建的种子细胞。展开更多
文摘目的探讨体外培养人羊膜上皮细胞(HAEC)并定向诱导分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法采用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离培养HAEC,通过Transwell^(TM)非接触共培养系统与人角膜上皮细胞(CEC)进行共培养2周,诱导HAEC分化;通过免疫荧光细胞化学染色法检测诱导后HAEC中细胞角蛋白3+12(CK3+12)、CK14、CK19、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测分化细胞CK12、CK14、CK19、P63 m RNA水平,Western blot法检测HAEC诱导前后CK3+12、CK14、CK19、P63的蛋白水平。结果体外培养的HAEC和CEC形态相似,免疫荧光细胞化学染色检测到HAEC诱导分化细胞CK3+12、CK14、CK19、PCNA呈阳性表达,诱导后HAEC中P63、CK12、CK19、CK14 mRNA相对表达量分别为共培养前的3.35、6.76、2.42、1.06倍。结论在与CEC共培养2周后,HAEC可以转分化为角膜上皮样细胞,HAEC可用作组织工程角膜重建的种子细胞。
