目的:探讨sh RNA干扰骨形成蛋白和激活素的穿膜抑制剂(bone morphogenetic protein and activin membrane bound inhibitor,BAMBI)基因对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:转染SW480细胞sh-BAMBI成功后...目的:探讨sh RNA干扰骨形成蛋白和激活素的穿膜抑制剂(bone morphogenetic protein and activin membrane bound inhibitor,BAMBI)基因对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:转染SW480细胞sh-BAMBI成功后,实时定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting检测BAMBI m RNA和蛋白表达水平,MTT法检测SW480细胞增殖能力,Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测SW480细胞迁移能力,Western blotting检测TGF-β/Smad2通路相关蛋白的表达水平。结果:转染成功后sh-BAMBI组中BAMBI的m RNA和蛋白水平均低于对照组(P<0.05);与对照组相比,sh-BAMBI组细胞增殖率明显降低(P<0.05)、细胞凋亡率显著升高(P<0.01),同时其侵袭和迁移能力明显减弱(均P<0.05)。sh-BAMBI组TGF-β蛋白水平和p-Smad2/Smad2比值明显高于对照组(P<0.05)。结论:sh RNA干扰BAMBI可诱导人结肠癌SW480细胞凋亡并抑制细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与激活TGFβ/Smad2通路有关。展开更多
目的:慢病毒介导siRNA沉默结直肠癌SW480细胞内信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activators of transcription 3,STAT3)的表达,观察其对SW480细胞凋亡、侵袭、集落形成及下游信号分子Mcl-1、caspase3表达的影响。方法:...目的:慢病毒介导siRNA沉默结直肠癌SW480细胞内信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activators of transcription 3,STAT3)的表达,观察其对SW480细胞凋亡、侵袭、集落形成及下游信号分子Mcl-1、caspase3表达的影响。方法:用携带针对STAT3的siRNA的慢病毒Lenti-STAT3-siRNA感染SW480细胞,Real-time PCR和Western blotting分别检测Lenti-STAT3-siRNA感染对SW480细胞内STAT3、Mcl-1及caspase3 mRNA和蛋白表达的影响,流式细胞术检测下调STAT3表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell实验检测下调STAT3表达对SW480细胞侵袭能力的影响。结果:Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞STAT3 mRNA和蛋白的相对表达量较Lenti-GFP组和对照组显著降低(均P<0.05)。Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞集落形成能力受到抑制,对照组、Lenti-GFP组和Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞凋亡率分别为1.32%、4.92%及11.9%,Lenti-STAT3-siRNA组SW480细胞穿膜细胞数较对照组和Lenti-GFP组显著下降[(178.49±15.42)vs(340.20±41.31)、(320.61±13.30)个,均P<0.05]。Lenti-STAT3-siRNA组Mcl-1 mRNA和蛋白的相对表达量显著降低(均P<0.05),caspase3 mRNA和蛋白的相对表达量显著增加(均P<0.05)。结论:慢病毒Lenti-STAT3-siRNA感染能够有效下调结直肠癌细胞SW480内STAT3基因的表达,促进其凋亡并抑制其侵袭、集落形成能力,其机制可能与降低Mcl-1、提高caspase3的表达有关。展开更多
