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人细胞色素c基因在大肠杆菌中的克隆和表达及活性测定
被引量：
3
1
作者
申峰
刘明
+3 位作者
吕昌莲
王秀宏
周宏博
周虹
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期475-481,共7页
通过PCR方法 ,从人胎儿心肌基因组DNA中得到precytc基因 (有 1个内含子 ) ,剔除内含子后 ,得到细胞色素c基因的编码序列 .测序结果表明 ,该基因与GenBank中报道的人细胞色素c基因核苷酸顺序完全一致 .将其插入原核表达载体pET3a的NdeⅠ...
通过PCR方法 ,从人胎儿心肌基因组DNA中得到precytc基因 (有 1个内含子 ) ,剔除内含子后 ,得到细胞色素c基因的编码序列 .测序结果表明 ,该基因与GenBank中报道的人细胞色素c基因核苷酸顺序完全一致 .将其插入原核表达载体pET3a的NdeⅠ和HindⅢ位点之间构建pET3a cytc重组质粒 ,并成功转化入E .coliBL2 1(DE3)中 .经IPTG诱导表达后 ,15 %SDS PAGE分析 ,可观察到1条与细胞色素c蛋白分子量相符的电泳条带 .Western印迹结果显示 ,该条带与小鼠抗人cytc单克隆抗体IgG2b发生特异反应 ,证实为人细胞色素c的前体蛋白 .体外使血红素与该前体蛋白结合生成完整的人细胞色素c蛋白 ,其耗氧量在不同浓度具有与反应时间的线性关系 。
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关键词
人细胞色素c基因
大肠杆菌
克隆
表达
活性
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职称材料
狂犬病病毒修饰基因组的构建
2
作者
魏玉荣
易忠
+6 位作者
符子华
马素贞
简子健
胡尔玛西
王海烽
魏婕
朱晶晶
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期1236-1241,共6页
【目的】利用反向遗传学技术在DNA水平上构建了狂犬病病毒修饰基因组。【方法】提取狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)口服疫苗株SRV9基因组总RNA作为RT-PCR的扩增模板,并根据GenBank已发表的SRV9基因组序列设计引物,缺失狂犬病基因组Ψ区并...
【目的】利用反向遗传学技术在DNA水平上构建了狂犬病病毒修饰基因组。【方法】提取狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)口服疫苗株SRV9基因组总RNA作为RT-PCR的扩增模板,并根据GenBank已发表的SRV9基因组序列设计引物,缺失狂犬病基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,再设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。缺失Ψ区及删除CD区时采用基因同源重组的方法进行。在缺失的Ψ区插入人细胞色素C基因时,利用引物引入酶切位点NheI和EcoRI,用PCR扩增出人细胞色素C基因并插入NheI和EcoRI位点。【结果】获得含预期的人细胞色素C基因,同时缺失了CD区与Ψ区的质粒pBSK-LA。【结论】全基因组测序结果表明已成功构建了狂犬病病毒修饰基因组。
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关键词
狂犬病病毒
胞质区
Ψ区
同源重组
人细胞色素c基因
反向遗传学
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职称材料
题名
人细胞色素c基因在大肠杆菌中的克隆和表达及活性测定
被引量：
3
1
作者
申峰
刘明
吕昌莲
王秀宏
周宏博
周虹
机构
哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室
军事医学科学院野战输血研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期475-481,共7页
基金
黑龙江省杰出青年基金资助项目 (2 0 0 1)
黑龙江省教育厅重大科研项目 (10 5 11Z0 11)~~
文摘
通过PCR方法 ,从人胎儿心肌基因组DNA中得到precytc基因 (有 1个内含子 ) ,剔除内含子后 ,得到细胞色素c基因的编码序列 .测序结果表明 ,该基因与GenBank中报道的人细胞色素c基因核苷酸顺序完全一致 .将其插入原核表达载体pET3a的NdeⅠ和HindⅢ位点之间构建pET3a cytc重组质粒 ,并成功转化入E .coliBL2 1(DE3)中 .经IPTG诱导表达后 ,15 %SDS PAGE分析 ,可观察到1条与细胞色素c蛋白分子量相符的电泳条带 .Western印迹结果显示 ,该条带与小鼠抗人cytc单克隆抗体IgG2b发生特异反应 ,证实为人细胞色素c的前体蛋白 .体外使血红素与该前体蛋白结合生成完整的人细胞色素c蛋白 ,其耗氧量在不同浓度具有与反应时间的线性关系 。
关键词
人细胞色素c基因
大肠杆菌
克隆
表达
活性
Keywords
human
c
yto
c
hrome
c
,
c
loning and expresion, Western blotting, a
c
tivity assay
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q559.9 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
狂犬病病毒修饰基因组的构建
2
作者
魏玉荣
易忠
符子华
马素贞
简子健
胡尔玛西
王海烽
魏婕
朱晶晶
机构
新疆畜牧科学院兽医研究所
新疆农业大学动物医学学院
塔里木大学
出处
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期1236-1241,共6页
基金
新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目(200611107)
文摘
【目的】利用反向遗传学技术在DNA水平上构建了狂犬病病毒修饰基因组。【方法】提取狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)口服疫苗株SRV9基因组总RNA作为RT-PCR的扩增模板,并根据GenBank已发表的SRV9基因组序列设计引物,缺失狂犬病基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,再设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区)。缺失Ψ区及删除CD区时采用基因同源重组的方法进行。在缺失的Ψ区插入人细胞色素C基因时,利用引物引入酶切位点NheI和EcoRI,用PCR扩增出人细胞色素C基因并插入NheI和EcoRI位点。【结果】获得含预期的人细胞色素C基因,同时缺失了CD区与Ψ区的质粒pBSK-LA。【结论】全基因组测序结果表明已成功构建了狂犬病病毒修饰基因组。
关键词
狂犬病病毒
胞质区
Ψ区
同源重组
人细胞色素c基因
反向遗传学
Keywords
rabies virus
c
ytoplasmi
c
region
ψ. region
homologous re
c
ombination
human eyto
c
hrome
c
gene
reverse geneti
c
s
分类号
S118 [农业科学—农业基础科学]
S851.655 [农业科学—预防兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人细胞色素c基因在大肠杆菌中的克隆和表达及活性测定
申峰
刘明
吕昌莲
王秀宏
周宏博
周虹
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
狂犬病病毒修饰基因组的构建
魏玉荣
易忠
符子华
马素贞
简子健
胡尔玛西
王海烽
魏婕
朱晶晶
《新疆农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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