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人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定
被引量：
7
1
作者
王鸿鹤
朱孝峰
+3 位作者
谢冰芬
冯公侃
沈竞康
刘宗潮
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期444-447,共4页
【目的】构建表达人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b(+)上,重组质...
【目的】构建表达人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b(+)上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定表达蛋白。【结果】用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌,Westernblot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体,后两者在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。
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关键词
人细胞周期蛋白d1
细胞周期
蛋白
激酶C
d
K4
HL-60
细胞
肿瘤
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职称材料
人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化
被引量：
1
2
作者
李桂英
邹德生
+1 位作者
周立宏
曹玉华
《吉林大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期839-843,共5页
将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的23%....
将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的23%.包涵体经洗涤和溶解,在变性条件下利用N i2+螯合柱纯化、尿素梯度复性后,得到纯度达98%以上的纯化蛋白.SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 000,W estern-blot分析表明,在相应分子量处有一特异性条带,说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1.
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关键词
人细胞周期蛋白d1
表达
包涵体
融合
蛋白
蛋白
质纯化
大肠杆菌
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职称材料
题名
人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定
被引量：
7
1
作者
王鸿鹤
朱孝峰
谢冰芬
冯公侃
沈竞康
刘宗潮
机构
中山大学肿瘤防治中心实验研究部
中国科学院上海药物研究所
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期444-447,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30100227)
国家863课题资助项目(2001AA234011)
中山医科大学"211工程"肿瘤学重点学科基金资助项目(98069)
文摘
【目的】构建表达人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段,克隆到pGEM-Teasy载体上。测序鉴定后切下相应的片段,连接到表达载体pET-22b(+)上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3),使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定表达蛋白。【结果】用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌,Westernblot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体,后两者在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。
关键词
人细胞周期蛋白d1
细胞周期
蛋白
激酶C
d
K4
HL-60
细胞
肿瘤
Keywords
Cyclin
d
1
C
d
K4
分类号
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化
被引量：
1
2
作者
李桂英
邹德生
周立宏
曹玉华
机构
吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室
出处
《吉林大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期839-843,共5页
基金
国家自然科学基金青年基金(批准号:30200256)
吉林省科技发展计划项目基金(批准号:20050410-3)
文摘
将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的23%.包涵体经洗涤和溶解,在变性条件下利用N i2+螯合柱纯化、尿素梯度复性后,得到纯度达98%以上的纯化蛋白.SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 000,W estern-blot分析表明,在相应分子量处有一特异性条带,说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1.
关键词
人细胞周期蛋白d1
表达
包涵体
融合
蛋白
蛋白
质纯化
大肠杆菌
Keywords
human cyclin
d
1
expression
inclusion bo
d
y
fusion protein
protein purification
E. coli BL2
1
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定
王鸿鹤
朱孝峰
谢冰芬
冯公侃
沈竞康
刘宗潮
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化
李桂英
邹德生
周立宏
曹玉华
《吉林大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
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职称材料
已选择
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