人组织激肽释放酶成熟蛋白在大肠杆菌中的高效表达 被引量：7

1

作者 李体远 杜珙 +5 位作者 蔡筱彦 石之磷 黄瑞芳 陈德珩 戴勇 肖德明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期312-316,共5页

将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pET2 8(b)及分泌型表达载体pET2 0 (b)中 ,使其C端融合 6×HisTag序列 .转化不同受体菌 ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析 .... 将编码人组织激肽释放酶成熟蛋白的基因片段扩增并分别克隆到原核表达载体pET2 8(b)及分泌型表达载体pET2 0 (b)中 ,使其C端融合 6×HisTag序列 .转化不同受体菌 ,IPTG诱导表达后利用SDS PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析 .在 6株基因工程菌株中 ,均表达出分子量约30kD的激肽释放酶融合蛋白 ,其中激肽释放酶在pET2 8载体中的表达水平高于pET2 0载体 .pET2 8和pET2 0载体表达的重组激肽释放酶蛋白分别占菌体总蛋白约 2 6 %和 10 % .Western印迹分析表明 ,目的蛋白可与抗人血清KK单克隆抗体发生特异性反应 .未经纯化的激肽释放酶融合蛋白具有一定的水解苯甲酰精胺酸乙酯 (BAEE)的能力 .在大肠杆菌中获得了人组织激肽释放酶的高效表达 ,表达产物具有免疫原性和生物活力 。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶 大肠杆菌 表达 基因 克隆

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人组织激肽释放酶对周围神经系统损伤后的修复效应 被引量：5

2

作者 刘珺 王均炉 +2 位作者 胡祥鹏 厉彩霞 彭玲莉 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第12期1351-1355,共5页

目的:评价人组织激肽释放酶(HTK)促进周围神经系统损伤后的修复作用。方法:取30只体重180～200g的雄性SD大鼠,随机分成3组:假手术组、HTK组(17.5×10-3PNAU/kg)、对照组,每组各10只。术前第0天和术后第1、第3、第5、第7、第9、第11... 目的:评价人组织激肽释放酶(HTK)促进周围神经系统损伤后的修复作用。方法:取30只体重180～200g的雄性SD大鼠,随机分成3组:假手术组、HTK组(17.5×10-3PNAU/kg)、对照组,每组各10只。术前第0天和术后第1、第3、第5、第7、第9、第11、第13天测定坐骨神经功能指数(SFI)以及静止坐骨神经指数(SSI),术后第14天测定坐骨神经干动作电位传导速度(NCV)。结果:SFI、SSI值在假手术组手术前后未见明显改变。HTK组和对照组中,术后第1天SFI、SSI均为-100左右。以后发现HTK组的SFI、SSI恢复的情况要优于对照组,从第5天开始两组SFI、SSI值有统计学差异(P<0.05)。术后第14天HTK组的NCV值要高于对照组,两组间有统计学差异(P<0.05)。结论:HTK具有促进周围神经系统损伤后的修复作用。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶 周围神经损伤 坐骨神经功能指数 静止坐骨神经指数 神经干动作电位传导速度

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人组织激肽释放酶基因转移对血管平滑肌细胞迁移的影响 被引量：2

3

作者 余惠珍 谢良地 +1 位作者 朱鹏立 许昌声 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期746-749,共4页

目的探讨重组腺病毒介导的人激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞(VSMCSHR)迁移的影响。方法自行构建携带目的基因hKLK1和强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双顺反子重... 目的探讨重组腺病毒介导的人激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)的血管平滑肌细胞(VSMCSHR)迁移的影响。方法自行构建携带目的基因hKLK1和强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双顺反子重组腺病毒载体。采用组织贴块法培养SHR胸主动脉血管平滑肌细胞,接种第3～6代VSMCSHR于6孔板,分别加入含hKLK1重组腺病毒和对照病毒干预,3d后加入PDGF-BB诱导24h,采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移,并加入缓激肽受体B2特异性阻断剂Hoe140。RT-PCR法测定缓激肽B1受体、B2受体的mRNA表达。结果hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140干预不产生影响。PDGF-BB诱导的VSMCSHR缓激肽B2受体mRNA表达明显增加(P<0.001),而Hoe140可明显降低其表达(P<0.01)。结论重组腺病毒介导的hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR迁移,这一效应可能不通过B2受体途径介导。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶1 基因转移 血管平滑肌细胞 细胞迁移 缓激肽受体

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卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14的表达 被引量：2

4

作者 史惠蓉 宋芷霜 +1 位作者 张瑞涛 寇歆馨 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期25-28,共4页

目的:检测卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14(KLK14)mRNA和蛋白的表达。方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤和卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA和蛋白的表达,分析其表达与卵巢上皮性癌患者... 目的:检测卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14(KLK14)mRNA和蛋白的表达。方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤和卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA和蛋白的表达,分析其表达与卵巢上皮性癌患者临床病理特征的关系。结果:卵巢上皮性癌组织中KLK14mRNA的相对表达量(1.36±0.24)高于正常卵巢组织(0.63±0.19)(t=8.432,P<0.001);卵巢上皮性癌组织中KLK14蛋白的阳性表达率为61.4%,与正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤和交界性卵巢肿瘤相比,差异有统计学意义(χ2=21.648,P<0.001)。KLK14蛋白的表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期(χ2=5.759,P=0.016)、组织学分级(χ2=4.671,P=0.031)和淋巴结转移(χ2=8.254,P=0.004)相关。结论:KLK14可能参与了卵巢上皮性癌的侵袭和转移。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 上皮性癌 人组织激肽释放酶基因14

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人组织激肽释放酶对大鼠坐骨神经损伤的修复作用 被引量：1

5

作者 耿武军 刘珺 +3 位作者 唐红丽 莫云长 王丹丹 王均炉 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2013年第6期610-613,共4页

目的:观察人组织激肽释放酶(HTK)对大鼠坐骨神经损伤的修复效应。方法:选取36只雄性SD大鼠,重量在180～220g之间,分离坐骨神经,造成坐骨神经挤压伤模型,然后随机均分成3组:对照组,自尾静脉每日注射生理盐水2mL;甲强龙组(SM组),自尾静脉... 目的:观察人组织激肽释放酶(HTK)对大鼠坐骨神经损伤的修复效应。方法:选取36只雄性SD大鼠,重量在180～220g之间,分离坐骨神经,造成坐骨神经挤压伤模型,然后随机均分成3组:对照组,自尾静脉每日注射生理盐水2mL;甲强龙组(SM组),自尾静脉每日注射甲强龙30mg/kg(稀释至2mL);人组织激肽释放酶组(HTK组),自尾静脉每日注射HTK 17.5×10-3PNAU/kg(稀释至2mL)治疗。在术前及术后第1、3、5、7、9、11、13天各时间点测定坐骨神经功能指数(SFI),术后第14天取出坐骨神经干,测定动作电位传导速度(NCV)。结果:三组大鼠SFI值在术后第1、3天均为-100左右。自第3天开始,HTK组和SM组SFI恢复的情况要优于对照组,有统计学意义(P<0.05)。在术后第14天HTK组和激素组的NCV值高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大鼠经尾静脉注射HTK,可促进坐骨神经损伤修复,神经功能恢复快。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶 坐骨神经损伤 激素 修复作用

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含重组人组织激肽释放酶降血压鸡蛋的开发 被引量：1

6

作者 高波 房浩霞 +1 位作者 王安平 孙怀昌 《中国家禽》 北大核心 2008年第18期27-29,共3页

通过将人组织激肽释放酶(human tissue kallikrein,KLK1)cDNA克隆入自行构建的鸡输卵管特异表达载体pOV中,获得重组载体pOVK经脂质体包裹后,经翅静脉等途径注射产蛋鸡,在收集的鸡蛋蛋清中检测到KLK1活性,表达量高达45U/mL蛋清,有效表达... 通过将人组织激肽释放酶(human tissue kallikrein,KLK1)cDNA克隆入自行构建的鸡输卵管特异表达载体pOV中,获得重组载体pOVK经脂质体包裹后,经翅静脉等途径注射产蛋鸡,在收集的鸡蛋蛋清中检测到KLK1活性,表达量高达45U/mL蛋清,有效表达持续7d左右。用含2～4UKLK1的蛋清饲喂高血压大鼠,可使其血压降低70mmHg,5d后回升至饲喂前水平。试验结果表明,在鸡蛋清中表达的重组KLK1口服具有降血压作用,可用于研制降血压保健蛋。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶 鸡输卵管表达 降血压鸡蛋

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人组织激肽释放酶的生物信息学分析及其不同抗原表位的多克隆抗体的制备及纯化

7

作者 冉晓 陈昊 张琴 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期491-494,共4页

目的:利用生物信息学分析人组织激肽释放酶(TK),并制备针对TK不同抗原表位的多克隆抗体。方法:根据生物信息学分析TK的结果为依据,选取针对TK不同表位的2段氨基酸序列合成多肽并与血蓝蛋白(KLH)偶联。免疫家兔,获得多克隆抗体并纯化,分... 目的:利用生物信息学分析人组织激肽释放酶(TK),并制备针对TK不同抗原表位的多克隆抗体。方法:根据生物信息学分析TK的结果为依据,选取针对TK不同表位的2段氨基酸序列合成多肽并与血蓝蛋白(KLH)偶联。免疫家兔,获得多克隆抗体并纯化,分别用ELISA,SDS-PAGE染色及Western blot等方法进行滴度,纯度,特异性及抗原表位分析。结果:制备的抗TK多克隆抗体的纯度均为100%,其效价均在1∶25 600以上,具有较高的特异性并且识别不同的抗原表位。结论:利用生物信息学软件成功地预测出TK的抗原性,并制备了针对其不同表位的多克隆抗体。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶 多肽 表位 多克隆抗体 纯化

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重组人组织激肽释放酶与猪胰腺组织激肽释放酶的理化特性比较

8

作者 高波 孙怀昌 宋成义 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期374-378,共5页

为了研究表达在蛋清中的重组人组织激肽释放酶（rhK1）是否与天然组织激肽释放酶具有相似的理化特性，对鸡输卵管暂态生物反应器表达的rhK1与猪胰腺组织激肽释放酶（pK）的理化特性进行比较鉴定．Western blotting检测结果显示，表达在... 为了研究表达在蛋清中的重组人组织激肽释放酶（rhK1）是否与天然组织激肽释放酶具有相似的理化特性，对鸡输卵管暂态生物反应器表达的rhK1与猪胰腺组织激肽释放酶（pK）的理化特性进行比较鉴定．Western blotting检测结果显示，表达在蛋清中的rhK1能被人组织激肽释放酶（hK1）特异抗体识别，与pK无交叉反应，rhK1酶原和成熟酶的分子量约为43kDa和37kDa．理化鉴定结果显示，rhK1在pH7～10的范围内活性稳定，而pK在pH8～9的范围内活性较稳定；rhK1和pK均能被Cu^2＋、Fe^3＋和Al^3＋完全抑制；rhK1和pK的热稳定性相似，但rhK1在37℃孵育20min后被显著激活、以上试验结果表明，表达在蛋清中的rhK1分子量正确，理化特性与猪的天然酶相似，具有开发利用价值． 展开更多

关键词 鸡输卵管暂态生物反应器 重组人组织激肽释放酶 猪胰腺组织激肽释放酶 理化特性

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人组织激肽释放酶在Pichia pastoris酵母中的表达

9

作者 王安平 姚黎平 孙怀昌 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第6期49-52,共4页

通过将人组织激肽释放酶(hKLK1)原编码序列克隆入Pichiapastoris酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-KLK1。分别用SalⅠ及BglⅡ酶切线性化后电转化酵母菌株GS115,经MD平板及含不同抗性浓度G418的YPD平板上培养筛选,获得... 通过将人组织激肽释放酶(hKLK1)原编码序列克隆入Pichiapastoris酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-KLK1。分别用SalⅠ及BglⅡ酶切线性化后电转化酵母菌株GS115,经MD平板及含不同抗性浓度G418的YPD平板上培养筛选,获得抗3mg/mlG418Mut+型分泌表达hKLK1的重组酵母菌4株,抗1mg/mlG418Muts型分泌表达hKLK1的酵母菌3株。酶活性测定数据表明:高拷贝转化子重组蛋白表达量高于低拷贝转化子;Mut+型转化子重组蛋白表达量高于Muts型转化子;且当甲醇诱导体积分数为2%时,重组蛋白的表达量最高。进一步的Western-blotting分析证明,表达的重组hKLK1分子质量正确,能被特异的抗体识别。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶(hKLK1) PICHIA pastoris酵母 表达 条件 重组菌株

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人组织激肽释放酶基因家族与胃肠道肿瘤检测

10

作者 张军峰 沈志勇 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第18期3448-3449,共2页

激肽释放酶是人体激肽释放酶一激肽系统（kallikreinkinin system）的主要成分，是一种丝氨酸蛋白酶，能够使激肽原释放出激肽，它具有很高的生理学活性．在人体组织中起着十分重要的生理作用。激肽释放酶分为组织激肽释放酶（TK）和血... 激肽释放酶是人体激肽释放酶一激肽系统（kallikreinkinin system）的主要成分，是一种丝氨酸蛋白酶，能够使激肽原释放出激肽，它具有很高的生理学活性．在人体组织中起着十分重要的生理作用。激肽释放酶分为组织激肽释放酶（TK）和血浆激肽释放酶（PK）两大类，这两种酶在分子量、底物特异性、免疫学特征、基因结构和释放出的激肽种类等方面均有显著的不同。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶 肿瘤检测 基因家族 胃肠道 血浆激肽释放酶 丝氨酸蛋白酶 生理学活性 底物特异性

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人组织激肽释放酶11在甲状腺乳头状癌患者血清和组织中的表达及临床意义

11

作者 吴彤 兰正苍 +5 位作者 刘志昌 杨斌 段瑞雪 高笑欣 瞿洪洋 刘宏斌 《医学研究生学报》 北大核心 2021年第9期936-941,共6页

目的人组织激肽释放酶11(KLK11)表达水平对前列腺癌、卵巢癌等内分泌相关癌组织中的诊断价值已有报道。文中探讨甲状腺乳头状癌(PTC)患者血清和组织中KLK11的表达与肿瘤发生发展的关系。方法回顾性分析2019年9月-2021年3月在解放军联勤... 目的人组织激肽释放酶11(KLK11)表达水平对前列腺癌、卵巢癌等内分泌相关癌组织中的诊断价值已有报道。文中探讨甲状腺乳头状癌(PTC)患者血清和组织中KLK11的表达与肿瘤发生发展的关系。方法回顾性分析2019年9月-2021年3月在解放军联勤保障部队第九四〇医院90例行手术治疗,且病理学检查证实为PTC患者,以及40例健康对照者外周血、术后癌组织以及匹配的癌旁正常组织。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中KLK11的表达含量,通过ROC曲线评估血清中KLK11对PTC的诊断价值。采用免疫组化法检测PTC癌组织与癌旁正常组织中KLK11的表达水平,分析其与临床病理资料的关系。结果PTC患者血清中KLK11含量大于健康对照者[(1232.06±133.99)pg/mL vs(1029.45±137.29)pg/mL],差异具有统计学意义(P<0.05)。KLK11对PTC诊断的临界值为1073.37 pg/mL,敏感性为87.78%、特异性为70.00%,ROC曲线下面积为0.854。KLK11主要在表达于细胞质中,PTC癌组织中KLK11的阳性表达率高于匹配癌旁正常组织中(72.22%vs 21.11%),差异有统计学意义(P<0.05)。KLK11的表达水平与PTC患者淋巴结转移、腺外侵犯及TNM分期有关(P<0.05);但与患者的年龄、性别、肿瘤直径及肿瘤位置无关(P>0.05)。结论KLK11在PTC患者血清和组织中的表达增强,可能与PTC的发生、发展过程以及恶性生物学行为有关。 展开更多

关键词 甲状腺乳头状癌 人组织激肽释放酶11 诊断价值 病理特征

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组织激肽释放酶改善大鼠心肌重塑的实验研究 被引量：1

12

作者 余惠珍 朱鹏立 +4 位作者 黄舒洁 向红 潘玮 张枫 林帆 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期830-835,共6页

目的探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(h TK1)基因过表达对大鼠心肌梗死后心肌结构、心肌胶原纤维以及新生血管的影响。方法结扎雄性Sprague-Dawley大鼠的左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型。将含h TK1基因的重组腺病毒(Ad-h ... 目的探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(h TK1)基因过表达对大鼠心肌梗死后心肌结构、心肌胶原纤维以及新生血管的影响。方法结扎雄性Sprague-Dawley大鼠的左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型。将含h TK1基因的重组腺病毒(Ad-h TK1)和对照病毒(1×1010PFU)注射到心肌梗死部位及其周边区域。4周后处死大鼠,取出心脏、称量、切片;通过荧光显微镜观察心肌组织的绿色荧光表达;Western blot测定h TK1蛋白表达;HE染色观察心肌组织结构,天然猩红染色观察胶原含量、分布,免疫组化法检测新生血管密度。结果仅在Ad-h TK1组大鼠的心肌既有绿色荧光,又有h TK1蛋白表达。假手术组大鼠的心脏质量、左室质量、心肌胶原分布显著低于心梗模型组,新生血管密度明显高于模型组。但与对照病毒组相比,Ad-h TK1组大鼠的心脏质量、左室质量、左室质量指数和心肌胶原纤维含量明显降低(P<0.05),心肌结构和新生血管密度明显改善(P<0.05)。结论重组腺病毒介导的组织激肽释放酶基因过表达可改善心肌结构,增加梗死周围心肌的新生血管形成,改善梗死后心肌重构。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶1 重组腺病毒 心肌梗死 心室重构

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人组织型激肽释放酶基因对2型糖尿病大鼠AMP激活的蛋白激酶活性的影响 被引量：1

13

作者 徐西振 凃玲 +2 位作者 赵刚 袁刚 汪道文 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期312-315,共4页

目的研究人组织型激肽释放酶(humantissue kallikrein,HK)基因对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的2型糖尿病(diabete mellitus,DM)大鼠AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)活性的影响。方法48只雄性Wistar大鼠... 目的研究人组织型激肽释放酶(humantissue kallikrein,HK)基因对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的2型糖尿病(diabete mellitus,DM)大鼠AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)活性的影响。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为普通饲料组,即正常对照组(n=16),和高脂高糖饲料组(n=32),高脂高糖饲料组大鼠以小剂量STZ加高脂高糖饮食诱导2型DM,再将其随机分为两组,分别经尾静脉导入重组腺相关病毒(recom-binant adeno-associated viruses,rAAV)介导的HK基因(HK组)以及报告基因beta-半乳糖苷酶(beta-galactosidase,Lacz)(Lacz组),观察12周后处死实验动物,留取心脏、肝脏、肾脏等组织。Western blot法检测HK在各脏器的表达以及AMPK的表达及其磷酸化水平(phospho-AMPK)。结果rAAV介导的HK可在2型DM大鼠的肝脏、肾脏、心脏组织表达,且HK组各脏器中HK蛋白表达显著高于Lacz组(均P<0.05)。Western blot检测发现,在肝脏、肾脏、心脏、骨骼肌、脂肪等脏器中,HK组和Lacz组AMPK的表达与正常对照组比较,差异无显著性意义(均P>0.05),而HK组phospho-AMPK较正常对照组显著上调(P<0.05),Lacz组phospho-AMPK与正常对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论rAAV载体介导的HK基因能够激活2型DM大鼠主要器官AMPK的表达。 展开更多

关键词 人组织型激肽释放酶 AMP激活的蛋白激酶 糖尿病

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KLK11基因在卵巢癌组织中的表达状况及临床意义

14

作者 岳军 胡丽娜 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期433-436,I0001,共5页

目的:探讨人组织激肽释放酶11基因(KLK11基因)在卵巢癌组织中的表达状况。方法:应用免疫组织化学及逆转录PCR方法检测KLK11基因在卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达状况,研究其与肿瘤分期、组织病理学分型等相关预后... 目的:探讨人组织激肽释放酶11基因(KLK11基因)在卵巢癌组织中的表达状况。方法:应用免疫组织化学及逆转录PCR方法检测KLK11基因在卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达状况,研究其与肿瘤分期、组织病理学分型等相关预后因素的关系。结果:KLK11mRNA及其蛋白hK11均在卵巢上皮细胞中表达,在卵巢癌组织中的表达均低于其在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织的表达;hK11蛋白在浆液性卵巢癌组织的表达高于其他类型的卵巢癌组织(P=0.012);早期卵巢癌(Ⅰ/Ⅱ期)组织中hK11蛋白的表达明显高于晚期卵巢癌(Ⅲ/Ⅳ期)(P=0.010);hK11蛋白在卵巢癌组织的表达水平与肿瘤的病理分级无明显关系(P=0.747);高水平的KLK11基因表达与卵巢癌临床分期等预后因素有明显相关性。结论:在卵巢癌组织中存在KLK11基因的表达下调,提示KLK11基因在卵巢癌中表达失调,可能对卵巢癌的诊断有一定价值。 展开更多

关键词 卵巢癌 人组织激肽释放酶11基因 人组织激肽释放酶11 逆转录聚合酶链反应 免疫组化

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人KLK1和EGFP双顺反子重组腺病毒构建及其在血管平滑肌细胞中的表达 被引量：6

15

作者 余惠珍 谢良地 +3 位作者 朱鹏立 许昌声 王华军 李体远 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期411-416,共6页

目的:构建携EGFP为报告基因和人组织激肽释放酶1(hKLK1)基因双顺反子的重组腺病毒(Ad-hKLK1-IRES-EGFP),并观察在自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达变化。方法:通过双酶切质粒pBluescritII KS-hKLK1,将hKLK1基因定向... 目的:构建携EGFP为报告基因和人组织激肽释放酶1(hKLK1)基因双顺反子的重组腺病毒(Ad-hKLK1-IRES-EGFP),并观察在自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达变化。方法:通过双酶切质粒pBluescritII KS-hKLK1,将hKLK1基因定向克隆至带有IRES-EGFP的腺病毒穿梭质粒pDC316中,构建成重组穿梭质粒,将其与腺病毒骨架质粒pBHGloxE1,3Cre共转染293A细胞,经包装并获得重组腺病毒,用PCR、酶切及测序方法对其进行鉴定,测定病毒滴度;用重组腺病毒感染VSMCs,用荧光显微镜下观察到的绿色荧光来测定感染率,用RT-PCR和Western blotting法测定hKLK1基因在VSMCs中的表达。结果:PCR、酶切和测序表明携EGFP的重组穿梭质粒pDC316-hKLK1-IRES-EGFP构建正确,并与骨架质粒在293A细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-hKLK1-IRES-EGFP,其滴度为4.5×1011/L。重组腺病毒感染VSMCs后,在荧光显微镜下观察到明亮绿色荧光蛋白表达,感染率高达90%以上,可检测到hKLK1基因的mRNA及蛋白表达,并与感染时间(1 d-7 d)有显著依赖关系,峰值感染复数为100 MOI。结论:成功构建并包装了携EGFP和hKLK1基因的双顺反子重组腺病毒载体系统Ad-hKLK1-IRES-EGFP;感染VSMCs可检测到基因hKLK1和EGFP的独立共同高表达,该系统为一直观、安全、高效的基因转移系统。 展开更多

关键词 基因 人组织激肽释放酶 重组腺病毒载体 血管平滑肌细胞 绿色荧光蛋白

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KLK14基因沉默对OVCAR-3细胞凋亡和迁移能力的影响 被引量：1

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作者 张瑞涛 史惠蓉 +3 位作者 任芳 陈志敏 贾艳艳 冯巍 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2014年第5期654-657,共4页

目的:观察沉默人组织激肽释放酶14(KLK14)基因对人卵巢癌OVCAR-3细胞凋亡和迁移能力的影响。方法:高表达KLK14的OVCAR-3细胞分为3组,实验组以KLK14 shRNA转染细胞,对照组转染对照shRNA,空白组不处理。分别采用RT-PCR和Western blot检测... 目的:观察沉默人组织激肽释放酶14(KLK14)基因对人卵巢癌OVCAR-3细胞凋亡和迁移能力的影响。方法:高表达KLK14的OVCAR-3细胞分为3组,实验组以KLK14 shRNA转染细胞,对照组转染对照shRNA,空白组不处理。分别采用RT-PCR和Western blot检测3组细胞KLK14 mRNA和蛋白的表达,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测迁移细胞数,Western blot法检测OVCAR-3细胞中Caspase-3、Caspase-9、MMP2和MMP9的表达。结果:与空白组和对照组相比,实验组KLK14 mRNA和蛋白的表达降低(F=187.861和167.374,P均<0.05);OVCAR-3细胞凋亡增加,细胞迁移能力受抑(F=54.313和85.283,P均<0.05);Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达增加(F=139.471和91.308,P均<0.05),MMP2和MMP9蛋白的表达减少(F=48.219和61.941,P均<0.05)。结论:下调KLK14的表达可抑制OVCAR-3细胞的恶性行为;KLK14可作为卵巢癌治疗干预的目标。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶14 RNA干扰 OVCAR-3细胞 凋亡 迁移

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KLK10与TFF3在结直肠癌中的表达及与临床病理的关系

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作者 吕洋 刘博 +1 位作者 李秀娟 王哲 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期1363-1366,共4页

目的:研究人组织激肽释放酶10(kallikrein 10,KLK10)和肠三叶因子(trefoil factorfamily-3,ITF/TFF3)蛋白在结直肠腺癌、腺瘤和正常结直肠黏膜组织中的表达情况及相互作用关系,探讨其在结直肠癌发生发展中的作用及与临床、病理的关系方... 目的:研究人组织激肽释放酶10(kallikrein 10,KLK10)和肠三叶因子(trefoil factorfamily-3,ITF/TFF3)蛋白在结直肠腺癌、腺瘤和正常结直肠黏膜组织中的表达情况及相互作用关系,探讨其在结直肠癌发生发展中的作用及与临床、病理的关系方法:采用SP免疫组织化学染色法检测57例结直肠腺癌、21例结直肠腺瘤及11例正常结直肠黏膜组织KLK10和TFF3的表达情况,并分析KLK10和TFF3的表达与结直肠癌临床病理指标的关系。结果:KLK10和TFF3在结直肠腺癌的阳性率分别为66.7%(38/57)和70.2%(40/57),在结直肠腺瘤的阳性率分别为38.1%(8/21)和47.6%(10/21),在正常结直肠黏膜组织中的阳性率为27.3%(3/11)和90.9%(10/11)。KLK10和TFF3在结直肠腺癌、结直肠腺瘤及正常结直肠黏膜组织中的表达均具有显著性差异(P均<0.05)。KLK10和TFF3的表达均与患者的TNM分期及淋巴结转移情况相关(P均<0.05)。KLK10和TFF3在结直肠癌中的表达呈正相关(r=0.597,P<0.001)。TFF3在KLK10阳性组中的表达明显高于在KLK10阴性组中的表达。结论:KLK10和TFF3参与结直肠癌的发生发展并与结直肠癌的TNM分期及淋巴结转移相关,可作为较为理想的肿瘤标志物辅助判断患者预后并指导临床治疗。 展开更多

关键词 结直肠癌 人组织激肽释放酶10 肠三叶因子

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KLK14与恶性肿瘤转移关系的研究进展

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作者 崔欣 叶联华 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期304-308,共5页

人组织激肽释放酶14(Kallikrein-related peptidase 14,KLK14)是人组织激肽释放酶家族(Kallikrein-related peptidases,KLKs)中的一员,广泛存在于多种组织及生物体液中,发挥着重要的生理作用。目前有研究表明KLK14可以作为多种恶性肿瘤... 人组织激肽释放酶14(Kallikrein-related peptidase 14,KLK14)是人组织激肽释放酶家族(Kallikrein-related peptidases,KLKs)中的一员,广泛存在于多种组织及生物体液中,发挥着重要的生理作用。目前有研究表明KLK14可以作为多种恶性肿瘤诊断和预后的生物标志物,并且参与恶性肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移等多种生物学功能的调控。KLK14作为一种分泌型丝氨酸蛋白酶,可以通过多种途径促进肿瘤细胞转移,而肿瘤转移是导致恶性肿瘤临床治疗失败以及患者死亡的主要原因。因此,本文将基于已有的研究就KLK14在肿瘤转移中的作用和可能机制进行综述,以期为恶性肿瘤的诊断及精准治疗提供新策略与新思路。 展开更多

关键词 人组织激肽释放酶14 肿瘤 转移

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