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人线粒体DNA聚合酶γ表达纯化及活性分析
1
作者 盛彦敏 肖丽娟 +4 位作者 杨亚兰 刘禹佳 齐英 沈鑫 李庆奇 《长春中医药大学学报》 2024年第12期1342-1346,共5页
目的表达纯化人线粒体DNA聚合酶γ(Polγ),并分析其活性,以应用于核苷(酸)类抗病毒药的毒副作用检测与筛选。方法以质粒PCMV-SPORT6-POLG为模板,PCR扩增人线粒体DNA聚合酶γ基因(POLG),并克隆至pPIC9K载体中,构建高效表达载体pPIC9K-PO... 目的表达纯化人线粒体DNA聚合酶γ(Polγ),并分析其活性,以应用于核苷(酸)类抗病毒药的毒副作用检测与筛选。方法以质粒PCMV-SPORT6-POLG为模板,PCR扩增人线粒体DNA聚合酶γ基因(POLG),并克隆至pPIC9K载体中,构建高效表达载体pPIC9K-POLG,重组表达载体经酶切线性化后采用电击转化法转化GS115毕赤酵母细胞,30℃1%甲醇诱导表达。表达蛋白经SDS-PAGE和Western Blot鉴定和纯化,并利用掺入法对比商品Polγ酶分析其活性。结果PCR扩增的POLG基因大小约3.7 kb,测序分析结果与Gen Bank中公布的序列一致,表达的Polγ重组蛋白为可溶性蛋白,其分子量约为138 KD,重组Polγ酶具有比商品酶略低的活性。结论构建了重组高效表达载体pPIC9K-POLG,成功在酵母细胞中表达了重组Polγ酶,建立了Polγ酶的体外真核表达体系。重组酶活力约为8U·µL-1,可应用于核苷(酸)类抗病毒药物的筛选和检测。 展开更多
关键词 人线粒体dna聚合酶γ GS115毕赤酵母 表达纯化 活性分析
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Taq DNA聚合酶的分子改造及其在探针法qPCR直扩体系中的应用
2
作者 胡松青 袁家惠 +1 位作者 刘光毅 侯轶 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期8-16,共9页
Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DN... Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DNA结合蛋白Sso7d或Sto7d融合在野生型Taq DNA聚合酶的N端或C端,构建了4个均可溶表达的改造体,再经过耐受性测试筛选较优的改造体,结果显示:改造体Taq-Sto的耐受性最高,其热稳定性不受影响,且在1 s/kbp的延伸条件下能成功扩增靶标,表明Taq-Sto具有增强的延伸性能,在TaqMan探针法qPCR体系中对腐殖酸、单宁酸、全血等抑制剂同样表现出良好的耐受性。EMSA实验发现:Taq-Sto对DNA模板的结合亲和力有所提高,有利于增强Taq-Sto对模板的竞争力;将Taq-Sto应用于非洲猪瘟病毒(ASFV)的TaqMan探针法qPCR检测,与商品化试剂相比,Taq-Sto具有更低的ASFV检出限,且在体积分数为2%~6%的猪粪便样本或猪肉样本中的检测灵敏度分别为100.0%和85.4%,说明Taq-Sto在直扩qPCR检测领域更具有优势。 展开更多
关键词 Taq dna聚合酶 双链dna结合蛋白 耐受性 聚合酶链式反应
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DNA聚合酶η小分子抑制剂筛选 被引量：1
3
作者 曹佳佳 叶舒迈 赵烨 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-41,共7页
DNA损伤修复以及基因组稳定性维持对于动植物正常生长和防御逆境至关重要。针对DNA聚合酶错误掺入导致的基因组不稳定性,本研究以DNA聚合酶η为研究对象,通过计算分子模拟对接的方式,对其可能的小分子抑制剂进行筛选,并对其酶动力学参... DNA损伤修复以及基因组稳定性维持对于动植物正常生长和防御逆境至关重要。针对DNA聚合酶错误掺入导致的基因组不稳定性,本研究以DNA聚合酶η为研究对象,通过计算分子模拟对接的方式,对其可能的小分子抑制剂进行筛选,并对其酶动力学参数进行测定。结果显示:脱氧腺苷三磷酸(deoxyadenosine triphosphate,d ATP)对DNA聚合酶η的活性具有抑制效果,使其延伸的相对效率为36%~42%。分子模拟对接和体外实验结果表明,相较于dATP(亲和力为-26.7 kJ/mol),环鸟苷酸-腺苷酸(cyclic GMP-AMP,cGAMP)与DNA聚合酶η具有更低的结合能(亲和力为-35.1 kJ/mol)。酶动力学参数测定结果也表明,相较于dATP,cGAMP具有更强的抑制能力且在浓度为0.5 mmol/L时达到最强(相对延伸效率为13%)。因此,本研究筛选获得了针对DNA聚合酶η的一种潜在的小分子抑制剂。同时,鉴于该蛋白质高表达导致细胞对抗肿瘤药物(DNA损伤剂)的耐受性,这为新型药物的开发提供了依据。 展开更多
关键词 dna损伤修复 dna聚合酶 酶动力学 计算生物学 环鸟苷酸-腺苷酸
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草鱼线粒体DNA限制性内切酶分析 被引量：7
4
作者 晏勇 张兴忠 龙华 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 1994年第3期30-31,共2页
本文报道了用ＢａｍＨⅠ，ＢｇｌⅠ，ＢｇｌⅡ，ＣｌａＩ，ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＰｖｕⅡ，ＳａｃⅠ，ＸｂａⅠ，ＸｈｏⅠ等十种限制性内切酶酶切草鱼线粒体ＤＮＡ，计算出各酶切片段长度及草鱼ｍｔＤＮＡ大小。其中六种酶有多个切... 本文报道了用ＢａｍＨⅠ，ＢｇｌⅠ，ＢｇｌⅡ，ＣｌａＩ，ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＰｖｕⅡ，ＳａｃⅠ，ＸｂａⅠ，ＸｈｏⅠ等十种限制性内切酶酶切草鱼线粒体ＤＮＡ，计算出各酶切片段长度及草鱼ｍｔＤＮＡ大小。其中六种酶有多个切点，在所检测的样品中未发现碱基替换。 展开更多
关键词 草鱼 线粒体 dna 限制性内切酶
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DNA聚合酶β在受照H_(22)肝癌细胞核DNA修复中的作用 被引量：5
5
作者 蒋逸风 郑秀龙 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期150-154,144,共6页
本文采用DNA聚合酶α或/和β酶专一性抑制剂(NEM或/和d_2TTP),观察了小鼠腹水型H_(22)肝癌细胞核DNA聚合酶α、β在40Gy γ线照后DNA修复合成中的作用。结果表明:在α酶被完全抑制条件下,照射组在37℃保温60、120min后DNA修复合成均明... 本文采用DNA聚合酶α或/和β酶专一性抑制剂(NEM或/和d_2TTP),观察了小鼠腹水型H_(22)肝癌细胞核DNA聚合酶α、β在40Gy γ线照后DNA修复合成中的作用。结果表明:在α酶被完全抑制条件下,照射组在37℃保温60、120min后DNA修复合成均明显高于未受照组(P<0.05、P<0.01);当β酶被完全抑制条件下,照射组与未受照组在37℃保温30、60和120min后DNA修复合成无明显差别(P>0.05);当α及β酶均被抑制时,照射组与未受照组DNA修复合成亦无明显差别(P>0.05)。上述结果证明了在本实验条件下,β酶参与了受γ线照射后肝癌细胞核DNA的修复作用,而α酶则不参与。作者并对上述结果进行了讨论。 展开更多
关键词 dna 聚合酶 修复 肝癌
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聚合酶β在肝癌细胞DNA辐射损伤修复中的作用 被引量：2
6
作者 蔡建明 郑秀龙 +5 位作者 高建国 李百龙 杨立锡 杨如俊 罗成基 程天民 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期96-100,共5页
利用第二军医大学裸鼠移植性肝癌细胞（ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ）和不同的ＤＮＡ聚合酶选择性抑制剂ＮＥＭ与ｄ２ＴＴＰ，探讨了肿瘤细胞核中ＤＮＡ聚合酶Ｂ参与γ射线辐射损伤ＤＮＡ修复的作用特点。结果表明，该酶参与真核细胞｝射线辐照... 利用第二军医大学裸鼠移植性肝癌细胞（ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ）和不同的ＤＮＡ聚合酶选择性抑制剂ＮＥＭ与ｄ２ＴＴＰ，探讨了肿瘤细胞核中ＤＮＡ聚合酶Ｂ参与γ射线辐射损伤ＤＮＡ修复的作用特点。结果表明，该酶参与真核细胞｝射线辐照损伤的ＤＮＡ修复合成，是一种重要的ＤＮＡ修复酶；与正常肝细胞相比，ＳＭＭＣ－ＬＴＮＭ肝癌细胞ＤＮＡ聚合酶β的ＤＮＡ修复合成反应速度快，修复能力强。提示某些肿瘤细胞中该酶的ＤＮＡ辐射损伤修复合成功能比正常细胞的大。 展开更多
关键词 聚合酶β 肝癌 Γ射线 辐射损伤 dna修复
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重组TaqDNA聚合酶在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量：7
7
作者 汪靖超 李荣贵 《青岛大学学报（工程技术版）》 CAS 2004年第1期93-96,共4页
从嗜热菌Thermusaquaticus中分离出的TaqDNA聚合酶由于其热稳定性,在聚合酶链式反应(PCR)中得到广泛的应用,我们根据编码TaqDNA聚合酶的基因序列,设计出一对引物,通过PCR扩增出TaqDNA聚合酶基因,并将其克隆到表达载体pET-15b中,转化大... 从嗜热菌Thermusaquaticus中分离出的TaqDNA聚合酶由于其热稳定性,在聚合酶链式反应(PCR)中得到广泛的应用,我们根据编码TaqDNA聚合酶的基因序列,设计出一对引物,通过PCR扩增出TaqDNA聚合酶基因,并将其克隆到表达载体pET-15b中,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导后,重组TaqDNA聚合酶在大肠杆菌中实现了大量表达。经过热变性、亲和层析、阳离子交换层析获得了电泳纯的重组TaqDNA聚合酶。本研究的生产程序可作为TaqDNA聚合酶生产的一种新方法。 展开更多
关键词 重组Taq dna聚合酶 表达 纯化 大肠杆菌 嗜热菌
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云南龙陵黄山羊线粒体DNA限制性酶切分析 被引量：2
8
作者 叶绍辉 彭和禄 +1 位作者 王文 刘爱华 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 1999年第1期54-57,共4页
采用碱性变性法提取来自于龙陵县不同地区的１８只黄山羊个体的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ），并用ＡｐａⅠ，ＡｖａⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＢｃｌⅠ，ＢｇｌⅠ，ＢｇｌⅡ，ＣｌａⅠ，ＤｒａⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＨａｅⅠ，Ｈｉｎｄ... 采用碱性变性法提取来自于龙陵县不同地区的１８只黄山羊个体的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ），并用ＡｐａⅠ，ＡｖａⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＢｃｌⅠ，ＢｇｌⅠ，ＢｇｌⅡ，ＣｌａⅠ，ＤｒａⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＨａｅⅠ，ＨｉｎｄⅢ，ＫｐｎⅠ，ＰｓｔⅠ，ＰｖｕⅡ，ＳａｃⅠ，ＳａｌⅠ，ＳｍａⅠ，ＳｔｕⅠ和ＸｈｏⅠ等２０种限制性内切酶进行酶切分析．结果发现龙陵黄山羊线粒体ＤＮＡ的分子量大小约为１５８Ｋｂ；不同酶的酶切位点分别为：ＤｒａⅠ有７个酶切位点，ＡｖａⅡ有６个酶切位点，ＥｃｏＲⅤ和ＳｔｕⅠ共有５个酶切位点，ＨｉｎｄⅢ和ＨｅａⅡ有４个酶切位点，ＢａｍＨⅠ，ＢｇｌⅡ，ＰｓｔⅠ和ＰｖｕⅡ有３个酶切位点，ＡｐａⅠ，ＣｌａⅠ有２个酶切位点，其余有１个酶切位点． 展开更多
关键词 龙陵黄山羊 线粒体dna 限制性酶切类型 山羊
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乌鳢线粒体DNA限制性内切酶酶切分析 被引量：4
9
作者 张四明 龙华 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 1991年第4期38-39,共2页
用BamHⅠ,EcoRⅠ,HindⅡ,HinfⅠ,MspⅠ,PstⅠ,SmalⅠ,XhoⅠ,DraⅠ,SalⅠ等十种限制内切酶对纯化后的乌鳢(Ophiocephalus argus)线粒体DNA(mtDNA)进行酶切,然后用电泳技术分离酶切片段。结果表明,十种限制性内切酶只有DraⅠ,SalⅠ两种限... 用BamHⅠ,EcoRⅠ,HindⅡ,HinfⅠ,MspⅠ,PstⅠ,SmalⅠ,XhoⅠ,DraⅠ,SalⅠ等十种限制内切酶对纯化后的乌鳢(Ophiocephalus argus)线粒体DNA(mtDNA)进行酶切,然后用电泳技术分离酶切片段。结果表明,十种限制性内切酶只有DraⅠ,SalⅠ两种限制性内切酶有多个酶切位点,且计算出乌鳢mtDNA大小约由17200个碱基对组成。 展开更多
关键词 乌鳢 线粒体 dna 限制性 内切酶
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T4 DNA聚合酶在大肠杆菌中高效表达、纯化及部分生物学活性分析 被引量：2
10
作者 付大伟 陈启蒙 +1 位作者 孙莹莹 徐伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第16期214-220,共7页
T4 DNA聚合酶(T4 DNA polymerase,T4 DP)是基因工程等相关领域中不可缺少的工具酶。为获得大量高纯度并具有生物活性的可溶性T4 DP,通过从T4噬菌体基因组中克隆出T4 dp基因,将其克隆到pET-22b(+)质粒中构建重组表达载体pET-22b(+)-T4 dp... T4 DNA聚合酶(T4 DNA polymerase,T4 DP)是基因工程等相关领域中不可缺少的工具酶。为获得大量高纯度并具有生物活性的可溶性T4 DP,通过从T4噬菌体基因组中克隆出T4 dp基因,将其克隆到pET-22b(+)质粒中构建重组表达载体pET-22b(+)-T4 dp,经DNA测序检测成功后,转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中进行自诱导表达,通过磁珠法高效准确检测T4 DP的可溶性表达情况,并对自诱导的温度和时间进行优化,确定最佳诱导条件为30℃诱导培养10 h,分别利用超声波法、超声波-溶菌酶法及化学裂解法对自诱导表达的重组菌体进行破碎,确定最佳破碎方法为化学裂解法,分别利用Ni Sepharose^(TM) 6 Fast Flow亲和层析柱和MagNi磁珠纯化重组菌体裂解后上清液中的T4 DP,MagNi磁珠能高效地纯化出高纯度的T4 DP,其质量浓度为3 073.960 μg/mL,成功获得了高纯度高质量浓度的可溶性T4 DP,并使其成功应用于克隆载体的构建,证明其具有较好的末端平滑化活性。 展开更多
关键词 T4dna聚合酶 自诱导 磁珠法 低背景克隆载体 末端平滑化
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大黄鱼线粒体DNA的限制性内切酶图谱 被引量：2
11
作者 李明云 朱俊杰 +2 位作者 邬勇 张春丹 黄福勇 《科技通报》 2006年第4期456-461,共6页
从大黄鱼（Pseudosciaena crocea）肝脏中提取线粒体DNA（mtDNA）。用限制性核酸内切酶酶切后，得到酶切图谱。以1 kb ladder作为相对分子量标准。以电泳迁移率为纵坐标，分子量的对数值为横坐标作标准图，利用电泳迁移率与分子量的对... 从大黄鱼（Pseudosciaena crocea）肝脏中提取线粒体DNA（mtDNA）。用限制性核酸内切酶酶切后，得到酶切图谱。以1 kb ladder作为相对分子量标准。以电泳迁移率为纵坐标，分子量的对数值为横坐标作标准图，利用电泳迁移率与分子量的对数值的线性关系，计算出各酶切片段的分子量，并推算出大黄鱼mtDNA分子量为27．33×10^6D，大小为16．891kb左右。根据单酶切和双酶切的数据，以及mtDNA是环状分子等特征，建立了大黄鱼的mtDNA酶切图谱。 展开更多
关键词 石首鱼科 大黄鱼 线粒体dna 限制性内切酶 酶切图谱
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DNA 聚合酶 β 在 DNA 修复作用中的分子机制 被引量：2
12
作者 郑秀龙 蔡建明 《辐射研究与辐射工艺学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第3期168-170,174,共4页
利用肝癌与正常肝细胞ＤＮＡｐｏｌβ（β酶）活力存在的差别，观察到γ射线照射对β酶活力无明显影响，肝癌细胞的β酶活力仍明显高于正常肝细胞，表明肝癌对照射ＤＮＡ损伤修复合成能力比正常强，其修复作用机制，经用免疫组化和胞浆... 利用肝癌与正常肝细胞ＤＮＡｐｏｌβ（β酶）活力存在的差别，观察到γ射线照射对β酶活力无明显影响，肝癌细胞的β酶活力仍明显高于正常肝细胞，表明肝癌对照射ＤＮＡ损伤修复合成能力比正常强，其修复作用机制，经用免疫组化和胞浆斑点杂交法研究，显示肝癌细胞β酶活力的增高是由于基因过度表达及其转录（ｍＲＮＡ）水平的增强有关。 展开更多
关键词 dna修复 基因表达 MRNA 聚合酶β 肝癌 放射治疗
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耐热Taq DNA聚合酶的酸酐修饰及其在降低PCR非特异性扩增中的应用评价 被引量：1
13
作者 周晓薇 朱雪蛟 +1 位作者 田玲 曹林 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期500-505,共6页
酸酐能与聚合酶上的赖氨酸结合形成聚合物,试验通过选用合适的酸酐,修饰TaqDNA聚合酶。在常温下,酶活性被封闭,升温过程中不表现酶活,从而减少非特异性扩增和引物二聚体的形成;而在较高的温度下一段时间后,一般为94℃、15 min,酸酐脱落... 酸酐能与聚合酶上的赖氨酸结合形成聚合物,试验通过选用合适的酸酐,修饰TaqDNA聚合酶。在常温下,酶活性被封闭,升温过程中不表现酶活,从而减少非特异性扩增和引物二聚体的形成;而在较高的温度下一段时间后,一般为94℃、15 min,酸酐脱落,聚合酶得以恢复正常的扩增活性,从而实现PCR反应的热启动。由此建立的热启动PCR体系灵敏度高,可以检测到10个拷贝的DNA分子,较普通PCR体系提高了2个数量级。此方法较其他方法操作简单成本低廉,且所得的热启动TaqDNA聚合酶稳定性好,便于保存,其灵敏性与特异性也更高。这种通过化学修饰形成的复合物达到热启动PCR目的的方法的建立,具有着重要的意义,是提高PCR灵敏度和特异性的重要方法之一。 展开更多
关键词 热启动PCR TAQ dna聚合酶 化学修饰
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食管癌点突变型DNA聚合酶β与绿色荧光蛋白重组表达载体的构建 被引量：1
14
作者 赵军 黄幼田 +3 位作者 路静 杨洪艳 赵国强 董子明 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第7期13-15,共3页
目的　构建携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组真核绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-C3- polβ。方法　运用PCR方法,从质粒pc DNA3.1- polβ中扩增出点突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,T- A克隆至p GEM- TEasy载体,再定向克隆至... 目的　构建携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组真核绿色荧光蛋白表达载体p EGFP-C3- polβ。方法　运用PCR方法,从质粒pc DNA3.1- polβ中扩增出点突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,T- A克隆至p GEM- TEasy载体,再定向克隆至p EGFP- C3真核绿色荧光蛋白表达载体,重组质粒p EGFP- C3- polβ用限制性内切酶酶切和通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。结果　DNA序列分析证实了重组载体中的DNA聚合酶β序列与已知的点突变型DNA聚合酶β基因序列相符。结论　成功构建了携带食管癌点突变型DNA聚合酶β基因的重组的荧光蛋白表达载体p EGFP- C3- polβ,为DNA聚合酶β基因的体内外表达及蛋白定位提供了理想的标记。 展开更多
关键词 dna聚合酶Β 绿色荧光蛋白 点突变型 PCR扩增 食管癌 表达载体
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结核杆菌DNA聚合酶链反应中Mg^（2＋）浓度的优化 被引量：2
15
作者 王俊霞 孙树汉 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期203-203,共1页
结核杆菌ＤＮＡ聚合酶链反应中Ｍｇ^（２＋）浓度的优化王俊霞，孙树汉（河北医科大学分子生物学研究室，石家庄０５００１７）关键词结核杆菌，聚合酶链反应，镁离子在结核杆菌的多聚酶链反应（ＰＣＲ）中，通常影响扩增效果的是反应... 结核杆菌ＤＮＡ聚合酶链反应中Ｍｇ^（２＋）浓度的优化王俊霞，孙树汉（河北医科大学分子生物学研究室，石家庄０５００１７）关键词结核杆菌，聚合酶链反应，镁离子在结核杆菌的多聚酶链反应（ＰＣＲ）中，通常影响扩增效果的是反应缓冲液中Ｍｇ２＋浓度，Ｍｇ２＋浓度?.. 展开更多
关键词 结核杆菌 聚合酶链反应 镁离子 dna
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RNA斑点印迹法检测人食管癌DNA聚合酶β的基因表达 被引量：2
16
作者 金戈 张婷 +3 位作者 赵勤 赵继敏 吴景兰 董子明 《河南医学研究》 CAS 2003年第4期304-306,共3页
目的 :探讨人食管癌组织DNA聚合酶 β(polβ)RNA水平的表达。 方法 :提取 5 1例食管癌患者的手术标本组织 ,包括 :17例癌灶组织 ,17例癌旁组织 ,17例“正常”组织细胞总RNA ,以生物素标记的polβcDNA探针进行RNA斑点印迹。结果 :DNApol... 目的 :探讨人食管癌组织DNA聚合酶 β(polβ)RNA水平的表达。 方法 :提取 5 1例食管癌患者的手术标本组织 ,包括 :17例癌灶组织 ,17例癌旁组织 ,17例“正常”组织细胞总RNA ,以生物素标记的polβcDNA探针进行RNA斑点印迹。结果 :DNApolβRNA水平的表达癌组织高于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,癌旁组织高于“正常”组织 (P <0 .0 5 ) ,癌组织高于“正常”组织 (P <0 .0 1)。结论 :人食管癌组织及癌旁组织的DNApolβ基因RNA水平表达显著高于“正常”组织 ,提示DNApolβ的过表达可能在食管癌的发生、发展中起 作用。 展开更多
关键词 RNA斑点印迹法 食管癌 dna聚合酶Β 基因表达 肿瘤发生
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高温DNA聚合酶I的Klenow片段在乙醇中变性的AFM研究 被引量：1
17
作者 陈圣福 徐磊 +3 位作者 欧阳振乾 张益 李民乾 洪国藩 《电子显微学报》 CAS CSCD 1997年第6期703-705,共3页
本文利用原子力显微镜（ＡＦＭ），对高温ＤＮＡ聚合酶Ｉ和普通Ｅ．ｃｏｌｉ的ＤＮＡ聚合酶Ｉ的Ｋｌｅｎｏｗ片段在乙醇中变性的对比研究，发现在两种ＤＮＡ聚合酶中都存在结构较紧密的“核”。通过对吸附在云母上的两种酶进行１—１０... 本文利用原子力显微镜（ＡＦＭ），对高温ＤＮＡ聚合酶Ｉ和普通Ｅ．ｃｏｌｉ的ＤＮＡ聚合酶Ｉ的Ｋｌｅｎｏｗ片段在乙醇中变性的对比研究，发现在两种ＤＮＡ聚合酶中都存在结构较紧密的“核”。通过对吸附在云母上的两种酶进行１—１０个小时的处理发现高温聚合酶大多由３块“核”组成，而普通的ＤＮＡ聚合酶由２块“核”组成。这些“核”可能与蛋白的折叠过程中存在的相对稳定的结构区域有关，这对直观了解蛋白折叠过程有一定意义。 展开更多
关键词 AFM 乙醇 蛋白变性 dna聚合酶I Klenow片断
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拉米夫定与苦味叶下珠联用对HBV DNA聚合酶的影响 被引量：2
18
作者 王磊 陈正爱 《山东医药》 CAS 北大核心 2007年第34期32-33,共2页
取30、3、0.3、0μg/ml浓度的苦味叶下珠分别与相同浓度的拉米夫定联用于被内生聚合酶反应液悬浮的HBV DNA中,根据延长链中同位素放射强度不同,检测二者联用对HBV DNA聚合酶的影响。结果显示,单用30μg/ml拉米夫定及单用30μg/ml苦味叶... 取30、3、0.3、0μg/ml浓度的苦味叶下珠分别与相同浓度的拉米夫定联用于被内生聚合酶反应液悬浮的HBV DNA中,根据延长链中同位素放射强度不同,检测二者联用对HBV DNA聚合酶的影响。结果显示,单用30μg/ml拉米夫定及单用30μg/ml苦味叶下珠的HBV DNA聚合酶抑制率分别为43.0%和1.0%,二者联用时HBV DNA聚合酶抑制率高达71.0%。提示苦味叶下珠对拉米夫定抑制HBV DNA聚合酶有协同作用。 展开更多
关键词 苦味叶下珠 拉米夫定 正嗜肝dna病毒属dna聚合酶
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DNA聚合酶适配子6-10提高定量PCR的特异性 被引量：1
19
作者 刘峰涛 柴立辉 马远方 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期164-166,共3页
目的利用DNA聚合酶适配子6-10进行热启动定量PCR,提高定量PCR的检测灵敏度。方法适配子6-10组、抗体对照组和非热启动对照组分别进行定量PCR,制作标准曲线,以复相关系数(r2)大于0.99为线性范围,比较其线性范围下限。结果非热启动定量PC... 目的利用DNA聚合酶适配子6-10进行热启动定量PCR,提高定量PCR的检测灵敏度。方法适配子6-10组、抗体对照组和非热启动对照组分别进行定量PCR,制作标准曲线,以复相关系数(r2)大于0.99为线性范围,比较其线性范围下限。结果非热启动定量PCR对人死亡受体5(death receptor 5,DR5)的检测线性范围下限为105拷贝/μl,而适配子6-10(200nmol/L)与抗DNA聚合酶抗体方法对DR5的检测线性范围下限为103拷贝/μl。熔解曲线分析表明,在扩增高浓度靶分子(105拷贝/μl)时,各种方法非特异扩增均不明显,没有形成非特异峰;在扩增低浓度靶分子(103拷贝/μl)时,非热启动对照组的非特异扩增明显,产生明显的非特异峰,而DNA聚合酶适配子6-10可以明显消除非特异扩增形成的非特异峰。结论DNA聚合酶适配子6-10可以提高定量PCR的检测灵敏度。 展开更多
关键词 适配子 dna聚合酶 热启动PCR 定量PCR
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DNA聚合酶β在DNA修复合成中的作用及其分子基础 被引量：1
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作者 郑秀龙 蔡建民 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第5期48-50,共3页
用3H－TTP掺入法研究了肝癌与肝细胞内日酶在DNA修复合成中的作用，发现肝癌细胞内β酶活力明显高于正常肝细胞，在接种肝癌生长过程中，这种差别仍持续存在。γ线照射后对酶活力无明显影响，表明肝癌组织受照DNA损伤修复合成能力比正... 用3H－TTP掺入法研究了肝癌与肝细胞内日酶在DNA修复合成中的作用，发现肝癌细胞内β酶活力明显高于正常肝细胞，在接种肝癌生长过程中，这种差别仍持续存在。γ线照射后对酶活力无明显影响，表明肝癌组织受照DNA损伤修复合成能力比正常肝组织的强。免疫组化分析结果表明，肝癌细胞β酶活力之所以高，与其基因过度表达直接有关；进一步用胞浆mRNA斑点杂交揭示了β酶含量的增多是由其基因转录活性增高所造成。此发现对阐明某些癌的抗放作用有重要意义。 展开更多
关键词 polβ 肿瘤细胞 放射损伤 dna修复 dna聚合酶Β
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