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G蛋白偶联受体107的缺失对HaCaT细胞生物学行为的影响
被引量：
1
1
作者
汪璟
赵韦
+3 位作者
徐德苹
廖开楠
臧丹丹
周海胜
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025年第3期385-391,共7页
目的构建稳定敲除G蛋白偶联受体107(GPR107)基因的人类角质形成细胞系(HaCaT),并初步探究GPR107的缺失对HaCaT细胞生物学行为的影响。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建敲除GPR107基因的HaCaT细胞,并通过有限稀释法获得GPR107缺失...
目的构建稳定敲除G蛋白偶联受体107(GPR107)基因的人类角质形成细胞系(HaCaT),并初步探究GPR107的缺失对HaCaT细胞生物学行为的影响。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建敲除GPR107基因的HaCaT细胞,并通过有限稀释法获得GPR107缺失的单克隆细胞;利用Western blot和PCR扩增基因组DNA并测序验证验证敲除GPR107的单细胞克隆。运用流式细胞分析术检测细胞周期变化;利用CCK-8检测细胞增殖;运用流式细胞术检测细胞凋亡水平;运用Western blot检测细胞分化标记分子的变化;运用细胞划痕实验等方法分析细胞迁移能力。结果成功将LentiCas9-Blast与plenti-guide-RNA-GPR107质粒转染进HaCaT细胞,并通过有限稀释法得到了21株单克隆细胞,Western blot显示其中8株细胞GPR107表达显著降低;进一步采用细胞基因组PCR测序,显示获得了C4与2D82株GPR107-/-HaCaT单克隆细胞株。CCK-8检测、流式细胞术检测显示GPR107基因缺失导致HaCaT细胞出现G0G1期阻滞,增殖能力显著减弱,凋亡水平增加;Western blot显示敲除GPR107后HaCaT细胞分化加快;细胞划痕实验结果表明敲除GPR107后HaCaT细胞迁移能力增强。结论成功构建GPR107基因缺失的HaCaT细胞株;GPR107缺失阻滞HaCaT细胞G0G1期从而抑制了HaCaT细胞增殖并促进细胞凋亡,敲除GPR107后HaCaT细胞分化能力与迁移能力均增强。
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关键词
G蛋白偶联受体107
人类角质形成细胞
CRISPR/Cas9
细胞
增殖
细胞
周期
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职称材料
HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素敏感性检测
被引量：
2
2
作者
王蕊
王敬
+3 位作者
陈立新
李卓然
刘原君
刘全忠
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期653-655,共3页
目的:检测体外HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素的敏感性。方法:微量稀释法检测沙眼衣原体E型标准株和34例临床株在HaCaT细胞和McCoy细胞中对红霉素、克拉霉素及阿奇霉素在体外的敏感性。同一抗生素在两种细胞的最低抑菌浓度(M...
目的:检测体外HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素的敏感性。方法:微量稀释法检测沙眼衣原体E型标准株和34例临床株在HaCaT细胞和McCoy细胞中对红霉素、克拉霉素及阿奇霉素在体外的敏感性。同一抗生素在两种细胞的最低抑菌浓度(MIC)值进行配对t检验。结果:沙眼衣原体E型标准株在两种细胞内对红霉素、克拉霉素及阿奇霉素的MIC值一致。在HaCaT细胞和McCoy细胞中测得临床株的MIC最大值,比以往报道的MIC值均有所升高。在两种细胞中红霉素、克拉霉素及阿奇霉素对临床株的MIC值经配对t检验差异有统计学意义,且在HaCaI细胞中MIC值高于McCoy细胞中的MIC值。结论:体外沙眼衣原体对大环内酯类抗生素的敏感性在不同培养细胞HaCaT细胞和McCoy细胞间存在差异。
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关键词
沙眼衣原体
人类角质形成细胞
药敏试验
体外
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职称材料
题名
G蛋白偶联受体107的缺失对HaCaT细胞生物学行为的影响
被引量：
1
1
作者
汪璟
赵韦
徐德苹
廖开楠
臧丹丹
周海胜
机构
安徽医科大学生物化学教研室
安徽医科大学科研实验中心
出处
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025年第3期385-391,共7页
基金
国家自然科学基金项目(编号:82071832)
安徽省高校学科(专业)拔尖人才学术资助项目(编号:gxbjZD2021046)。
文摘
目的构建稳定敲除G蛋白偶联受体107(GPR107)基因的人类角质形成细胞系(HaCaT),并初步探究GPR107的缺失对HaCaT细胞生物学行为的影响。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建敲除GPR107基因的HaCaT细胞,并通过有限稀释法获得GPR107缺失的单克隆细胞;利用Western blot和PCR扩增基因组DNA并测序验证验证敲除GPR107的单细胞克隆。运用流式细胞分析术检测细胞周期变化;利用CCK-8检测细胞增殖;运用流式细胞术检测细胞凋亡水平;运用Western blot检测细胞分化标记分子的变化;运用细胞划痕实验等方法分析细胞迁移能力。结果成功将LentiCas9-Blast与plenti-guide-RNA-GPR107质粒转染进HaCaT细胞,并通过有限稀释法得到了21株单克隆细胞,Western blot显示其中8株细胞GPR107表达显著降低;进一步采用细胞基因组PCR测序,显示获得了C4与2D82株GPR107-/-HaCaT单克隆细胞株。CCK-8检测、流式细胞术检测显示GPR107基因缺失导致HaCaT细胞出现G0G1期阻滞,增殖能力显著减弱,凋亡水平增加;Western blot显示敲除GPR107后HaCaT细胞分化加快;细胞划痕实验结果表明敲除GPR107后HaCaT细胞迁移能力增强。结论成功构建GPR107基因缺失的HaCaT细胞株;GPR107缺失阻滞HaCaT细胞G0G1期从而抑制了HaCaT细胞增殖并促进细胞凋亡,敲除GPR107后HaCaT细胞分化能力与迁移能力均增强。
关键词
G蛋白偶联受体107
人类角质形成细胞
CRISPR/Cas9
细胞
增殖
细胞
周期
Keywords
G protein-coupled receptor 107
HaCaT cells
CRISPR/Cas9
cell proliferation
cell cycle
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素敏感性检测
被引量：
2
2
作者
王蕊
王敬
陈立新
李卓然
刘原君
刘全忠
机构
天津医科大学总医院皮肤科天津性传播疾病研究所
天津医科大学第二医院皮肤科
出处
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第11期653-655,共3页
基金
国家自然科学基金(30872285)资助项目
文摘
目的:检测体外HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素的敏感性。方法:微量稀释法检测沙眼衣原体E型标准株和34例临床株在HaCaT细胞和McCoy细胞中对红霉素、克拉霉素及阿奇霉素在体外的敏感性。同一抗生素在两种细胞的最低抑菌浓度(MIC)值进行配对t检验。结果:沙眼衣原体E型标准株在两种细胞内对红霉素、克拉霉素及阿奇霉素的MIC值一致。在HaCaT细胞和McCoy细胞中测得临床株的MIC最大值,比以往报道的MIC值均有所升高。在两种细胞中红霉素、克拉霉素及阿奇霉素对临床株的MIC值经配对t检验差异有统计学意义,且在HaCaI细胞中MIC值高于McCoy细胞中的MIC值。结论:体外沙眼衣原体对大环内酯类抗生素的敏感性在不同培养细胞HaCaT细胞和McCoy细胞间存在差异。
关键词
沙眼衣原体
人类角质形成细胞
药敏试验
体外
Keywords
Chlamydia trachomatis
HaCaT
susceptibility testing in vitro
分类号
R374 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
G蛋白偶联受体107的缺失对HaCaT细胞生物学行为的影响
汪璟
赵韦
徐德苹
廖开楠
臧丹丹
周海胜
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025
1
在线阅读
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职称材料
2
HaCaT细胞内沙眼衣原体对大环内酯类抗生素敏感性检测
王蕊
王敬
陈立新
李卓然
刘原君
刘全忠
《临床皮肤科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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