人神经生长因子的基因克隆和序列分析 被引量：7

1

作者 马巍 吴玲 +4 位作者 刘淼 任惠民 扬广笑 王全颖 王德利 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期338-341,共4页

目的　克隆人神经生长因子基因编码区。方法　由人末梢血白细胞中提取细胞总DNA ,利用PCR法 ,从DNA中扩增出人神经生长因子编码区基因DNA片段 ;将获得的基因片段插入 pGEM T Easy质粒中 ,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制... 目的　克隆人神经生长因子基因编码区。方法　由人末梢血白细胞中提取细胞总DNA ,利用PCR法 ,从DNA中扩增出人神经生长因子编码区基因DNA片段 ;将获得的基因片段插入 pGEM T Easy质粒中 ,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制性内切酶酶切核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒。结果　经质粒DNA酶切分析及序列测定 ,获得了人神经生长因子DNA片段序列。结论　首次由人白细胞DNA中克隆获得了人神经生长因子基因 ,为神经生长因子的基因治疗提供了前提条件。 展开更多

关键词 人神经生长因子 基因克隆 序列分析 聚合酶链反应

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人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：3

2

作者 刘东海 张更荣 +2 位作者 张乐鸣 张顺 董虹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-489,共4页

目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。 方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C... 目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。 方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C端成熟肽部分 ,并克隆到PG5中 ,转化大肠杆菌BL2 1用异丙基 - β -D -半乳糖苷(IPTG)诱导培养。表达产物提纯、复性后 ,进行活性测定。结果 :NGFβcDNA全序列为 10 4 7bp ,所克隆的蛋白编码部分为 6 36bp ,由 2 12个氨基酸组成 ,序列分析结果与Genebank完全一致 ,成熟肽部分表达后 ,经SDS -PAGE电泳在 14kD左右有 1条明显的新增蛋白带 ,与预期的分子量相符 ,并Western印迹证实 ,rNGF约占菌体蛋白 10 %左右。结论 :通过序列分析证实 ,重组NGFβ在大肠杆菌中获得较高水平的表达 。 展开更多

关键词 人神经生长因子β亚基 CDNA 克隆 大肠杆菌 重组 序列分析 基因表达

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人神经生长因子治疗坐骨神经干性损伤的疗效观察 被引量：6

3

作者 姚朝娅 丁新生 王杏英 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第1期45-46,共2页

为了寻找周围神经损伤后更为理想的疗法，采用人神经生长因子（ＮＧＦ）治疗坐骨神经干性损伤４７例，有效率９４％，康复治疗为主的对照组３０例，有效率６０％。２组治愈率相比具有极显著差异（Ｐ＜０．００５），提示人ＮＧＦ组疗效... 为了寻找周围神经损伤后更为理想的疗法，采用人神经生长因子（ＮＧＦ）治疗坐骨神经干性损伤４７例，有效率９４％，康复治疗为主的对照组３０例，有效率６０％。２组治愈率相比具有极显著差异（Ｐ＜０．００５），提示人ＮＧＦ组疗效优于对照组。人ＮＧＦ的疗效以及运动神经传导速度改善与早期使用和神经损伤程度密切相关。 展开更多

关键词 坐骨神经损伤 干性损伤 人神经生长因子 治疗

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重组人神经生长因子β腺病毒的构建及鉴定 被引量：1

4

作者 冯波 李青旺 +2 位作者 肖波 韩增胜 支旭勃 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第2期457-459,511,共4页

[目的]克隆带有His标签的人神经生长因子β基因(human nerve growth factor beta,hNGF"β),并构建hNGF"β与EGFP基因复制缺陷型腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤的应用研究奠定基础。[方法]用Trizol试剂... [目的]克隆带有His标签的人神经生长因子β基因(human nerve growth factor beta,hNGF"β),并构建hNGF"β与EGFP基因复制缺陷型腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤的应用研究奠定基础。[方法]用Trizol试剂提取人胎肝总RNA,应用RT-PCR方法以自行设计的带有His标签的引物来扩增NGF"β基因;将所扩增的NGF"β基因经酶切、纯化,与IRES-EGFP片段共同插入到Pshuttle-cmv载体中,测序后,利用基因同源重组技术构建hNGF基因的复制缺陷型腺病毒载体AdNGF"β,经鉴定,转染HEK293细胞,观察EGFP表达并检测重组腺病毒的病毒滴度。[结果]克隆的hNGF基因序列与GenBank中的hNGF基因序列完全一致并在3′端携带上His标签;重组腺病毒载体AdNGF-β经PacⅠ酶切得到大于23.0和4.5或2.9kb大小的2个片段,表明同源重组成功。2种重组腺病毒经脂质体介导转染293细胞后,均可观察到绿色荧光蛋白。收获病毒并测定感染滴度分别为1.00×109和0.99×109pfu/ml。[结论]克隆了带有His标签的hNGF"β基因,并成功构建了重组腺病毒载体,为hNGF蛋白的表达、纯化及对其进行神经损伤研究奠定基础。 展开更多

关键词 人神经生长因子β 基因克隆 腺病毒

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人神经生长因子成熟蛋白基因片段在大肠杆菌中的表达和生物活性鉴定 被引量：1

5

作者 马巍 刘淼 +1 位作者 杨广笑 王全颖 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期33-36,42,共5页

目的在大肠杆菌中表达人神经生长因子成熟蛋白基因片段(hNGFβ)并检测其生物活性.方法将NGFβ目的基因亚克隆人表达载体pBV220的BamHI-BamHI位点,连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株通过热诱导表达NGFβ蛋白,利用溶解包涵体和重折叠使表达... 目的在大肠杆菌中表达人神经生长因子成熟蛋白基因片段(hNGFβ)并检测其生物活性.方法将NGFβ目的基因亚克隆人表达载体pBV220的BamHI-BamHI位点,连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株通过热诱导表达NGFβ蛋白,利用溶解包涵体和重折叠使表达产物复性,将复性后的蛋白质加入体外培养的鸡胚背根神经节及PC12细胞BrdU掺入实验,观察表达蛋白的生物学活性.结果成功构建了重组质粒pBV220/NGFβ.使用该质粒转化DH5o宿主菌,使用热诱导方法表达了NGFβ蛋白,SDS-PAGE结果提示表达蛋白主要存在于包涵体中.通过肝素亲和层析可以获得纯度大于90%的NGFβ.每升表达菌可以获得1.8～2.0 mg NGFβ.鸡胚背根神经节突起生长实验和PC12细胞培养生长刺激BrdU掺入实验表明原核表达的NGFβ是具有生物活性的.它的生物活性按生物制品鉴定章程判断为1×105BU/g.结论在大肠杆菌中可以表达出有活性的NGFβ蛋白. 展开更多

关键词 人神经生长因子 分子亚克隆 原核表达 生物活性

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人神经生长因子预防鼠脑损伤的研究

6

作者 潘云曦 谭启富 +3 位作者 印红霞 凌树森 赖仁胜 宓方元 《医学研究生学报》 CAS 1996年第1期54-55,共2页

已有很多实验研究证实，应用从鼠颌下腺提取的神经生长因子能够预防鼠脑隔－海马通路横切后造成的神经元死亡。本文研究了从人胎盘中提取的神经生长因子预防鼠脑隔－海马通路横切后造成神经元死亡的作用。

关键词 人神经生长因子 鼠脑损伤 神经元死亡

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重组人神经生长因子对糖尿病大鼠难愈创面愈合的影响 被引量：7

7

作者 王甜甜 程玉芳 徐江平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期793-796,共4页

目的研究重组人神经生长因子(recombinant human nerve growth factor,rh NGF)对糖尿病大鼠合并难愈创面的治疗效果。方法腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg^(-1))诱导大鼠糖尿病模型,并在大鼠背部造成一圆形烫伤创面,建立糖尿病合并难... 目的研究重组人神经生长因子(recombinant human nerve growth factor,rh NGF)对糖尿病大鼠合并难愈创面的治疗效果。方法腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg^(-1))诱导大鼠糖尿病模型,并在大鼠背部造成一圆形烫伤创面,建立糖尿病合并难愈创面的动物模型。用药组rh NGF(3、6、12μg·kg^(-1))肌肉注射给药,每天1次,连续21 d。测定大鼠伤口面积,HE染色和透射电镜检查创面皮肤组织病理形态学变化。结果 rh NGF明显减小糖尿病大鼠烫伤创伤面积(P <0. 05); HE染色结果表明,rh NGF明显促进糖尿病大鼠烫伤创面纤维细胞和毛细血管再生;透射电镜结果表明,rh NGF对糖尿病大鼠烫伤创面皮肤的上皮细胞结构排列、细胞连接以及上皮下胶原等超微结构有明显改善作用。结论rh NGF对糖尿病大鼠烫伤性难愈创面具有促进愈合的作用。 展开更多

关键词 重组人神经生长因子 链脲佐菌素 糖尿病 大鼠 溃疡 创面愈合

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重组人神经生长因子通过抑制小胶质细胞炎症反应发挥神经保护作用 被引量：1

8

作者 李瑶 陈旖 +7 位作者 朱丹妮 宋小红 张金龙 张哲 赵拯浩 侯利华 吴诗坡 陈薇 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期574-582,共9页

目的探讨重组人神经生长因子(rhNGF)的神经保护作用及其机制。方法BV2小胶质细胞分为细胞对照组、脂多糖(LPS)组及LPS+rhNGF 50和500μg·L^(-1)组。除细胞对照组外,其余3组用LPS 1 mg·L^(-1)刺激BV2细胞24 h诱导BV2细胞炎症反... 目的探讨重组人神经生长因子(rhNGF)的神经保护作用及其机制。方法BV2小胶质细胞分为细胞对照组、脂多糖(LPS)组及LPS+rhNGF 50和500μg·L^(-1)组。除细胞对照组外,其余3组用LPS 1 mg·L^(-1)刺激BV2细胞24 h诱导BV2细胞炎症反应,随后LPS+rhNGF组加rhNGF继续孵育48 h。孵育结束后收集BV2细胞,并收集各组培养上清即条件培养基(MCM),各组BV2细胞和MCM分别与小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a(N2a)共培养12或24 h。CCK-8法检测BV2细胞存活率,实时荧光定量PCR检测BV2细胞中促炎因子白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-1β及抗炎因子IL-4和IL-10 mRNA表达水平,CBA法检测BV2细胞培养上清中IL-6,TNF-α,IL-4和IL-10浓度,免疫荧光法检测BV2细胞M1表型标志物CD16和M2表型标志物CD206表达,NeuN/TUNEL共染法和AnnexinⅤ/7-AAD法检测N2a细胞凋亡率。结果与细胞对照组相比,LPS组BV2细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞变圆且胞体变大;促炎因子IL-1β,IL-6和TNF-α及抗炎因子IL-10 mRNA水平显著升高(P<0.01),抗炎因子IL-4 mRNA水平下降(P<0.01);IL-6和TNF-α蛋白水平显著升高(P<0.01),IL-4蛋白水平无显著差异;CD16和CD206阳性细胞百分比明显升高(P<0.01),CD16阳性细胞升高更加明显;与BV2细胞或其MCM共培养的N2a细胞存活率显著降低且凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01)。与LPS组相比,LPS+rhNGF 50和500μg·L^(-1)组BV2细胞存活率显著提高(P<0.01);IL-1β,IL-6和TNF-αmRNA水平显著降低(P<0.05),IL-4和IL-10 mRNA水平显著提高(P<0.05,P<0.01);IL-6和TNF-α蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-4蛋白水平无显著差异,IL-10浓度低于检测限;CD206阳性细胞百分比显著升高(P<0.01),CD16阳性细胞百分比显著降低(P<0.05)。与LPS处理的BV2细胞或MCM-LPS组相比,与rhNGF 50和500μg·L^(-1)处理的BV2细胞共培养组及与MCM-rhNGF 50和500μg·L^(-1)共培养组N2a细胞存活率显著升高且凋亡率显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论rhNGF可通过抑制BV2细胞炎症反应诱导BV2细胞向M2表型转化,抑制N2a细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。 展开更多

关键词 神经炎症 重组人神经生长因子 小胶质细胞 炎症反应 细胞凋亡

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人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及序列分析 被引量：1

9

作者 毛亚伦 张更荣 +2 位作者 刘东海 董虹 张顺 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第11期1009-1012,共4页

目的：对国人神经生长因子β亚基（βＮＧＦ）ｃＤＮＡ 进行克隆及序列分析，为研究βＮＧＦ 的生理功能及其在临床应用提供基础与手段。方法：从人海马组织分离，纯化总ＲＮＡ，直接进行逆转录，用ＰＣＲ 扩增βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 得... 目的：对国人神经生长因子β亚基（βＮＧＦ）ｃＤＮＡ 进行克隆及序列分析，为研究βＮＧＦ 的生理功能及其在临床应用提供基础与手段。方法：从人海马组织分离，纯化总ＲＮＡ，直接进行逆转录，用ＰＣＲ 扩增βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 得到６５０ｂｐ 的ＤＮＡ 片段，利用Ｔ－ Ａ 克隆载体法，制备重组质粒，克隆βＮＧＦｃＤＮＡ。结果：βＮＧＦ 的ｃＤＮＡ 全序列１０７４ ｂｐ ，其蛋白编码为６３０ ｂｐ ，由２１２ 个氨基酸组成，Ｎ 端为信号肽，中间区为前肽，Ｃ 端为成熟肽。结论：国人βＮＧＦ 序列分析结果与ｇｅｎｅ ｂａｎｋ 中的βＮＧＦ 序列完全一致。 展开更多

关键词 人神经生长因子 基因克隆 序列分析 Β亚基

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DPN大鼠坐骨神经NGF的动态表达及胰岛素和人NGF的干预作用 被引量：3

10

作者 张云云 王坚 +1 位作者 蒋雨平 任惠民 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期205-208,i001,共5页

目的　观察糖尿病多发性神经病 (DPN)大鼠坐骨神经NGF的动态表达以及胰岛素和人神经生长因子(hNGF)的干预作用。方法　以链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病大鼠模型 ,通过RT PCR和免疫组化技术 ,观察造模后 4和 8周大鼠坐骨神经NGFmRNA和蛋白... 目的　观察糖尿病多发性神经病 (DPN)大鼠坐骨神经NGF的动态表达以及胰岛素和人神经生长因子(hNGF)的干预作用。方法　以链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病大鼠模型 ,通过RT PCR和免疫组化技术 ,观察造模后 4和 8周大鼠坐骨神经NGFmRNA和蛋白的表达 ,并观察DPN 4周时用胰岛素或hNGF干预 4周后坐骨神经NGFmRNA和蛋白的表达。结果　NGFmRNA表达在DPN 4周无明显改变 ,8周时明显减少 ;NGF蛋白表达在DPN 4周和 8周均减少。hNGF干预能增加DPN大鼠坐骨神经NGFmRNA和蛋白表达 ,胰岛素则无明显调节作用。结论　DPN大鼠坐骨神经NGF表达减少 ,外源性NGF可弥补这种缺陷。 展开更多

关键词 坐骨神经 干预作用 胰岛素 DPN 链脲佐菌素(STZ) 表达及 人神经生长因子 多发性神经病 免疫组化技术 RT-PCR mRNA表达 外源性NGF 蛋白表达 动态表达 大鼠模型 调节作用 表达减少 糖尿病

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重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定 被引量：5

11

作者 白羊 章永垒 +7 位作者 邹有土 黄奋飞 陈胜亮 阮卡 葛平辉 马燕玲 王明灶 陈星 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期202-207,共6页

旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体... 旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达,表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP）,Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示,pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确,25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签,SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 k D左右,纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF,结果表明,比活约为1×10~6 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF,并具有较高的生物学活性。 展开更多

关键词 人神经生长因子 大肠杆菌 可溶表达 生物学活性

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激素和活性多肽

12

《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第6期61-63,共3页

962161 用一种无细胞系统合成生物学活性的人神经生长因子和脑衍生的神经营养因子[英]/Takeshita,T.//J.Ferment. Bioeng.-1996,81(1).

关键词 生物学活性 人神经生长因子 神经营养因子 黄体酮 启动子 序列分析 无细胞蛋白合成系统 质粒DNA 选择性修饰 生物转化

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