人神经母细胞瘤的磷酸化膜蛋白质组分析 被引量：2

1

作者 侯春彦 马俊锋 +3 位作者 陶定银 张丽华 梁振 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期851-856,共6页

针对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系的磷酸化膜蛋白质组,发展了基于多酶酶解法结合杂化硅胶基质固定化钛离子亲和色谱(Ti 4+-IMAC)整体柱富集的分析策略。该方法通过对细胞裂解液进行超速离心,以及1 mol/LNaCl和0.1 mol/L Na2CO3顺序清洗... 针对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系的磷酸化膜蛋白质组,发展了基于多酶酶解法结合杂化硅胶基质固定化钛离子亲和色谱(Ti 4+-IMAC)整体柱富集的分析策略。该方法通过对细胞裂解液进行超速离心,以及1 mol/LNaCl和0.1 mol/L Na2CO3顺序清洗,获得膜蛋白质组分。所提取的蛋白质分别经胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶平行酶解,产生的肽段经Ti 4+-IMAC整体柱选择性富集磷酸肽后,采用纳升级反相液相色谱分离和质谱鉴定,成功鉴定到43个磷酸化蛋白质,其中有14个定位于膜上。研究结果表明,采用该策略开展SH-SY5Y细胞系磷酸化膜蛋白质组学分析有望加速对该肿瘤的研究和相关潜在标记物的筛选。 展开更多

关键词 人神经母细胞瘤 磷酸化肽富集 膜蛋白质 多酶酶解 固定化钛离子亲和色谱 有机-无机杂化硅胶整体材料

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人神经母细胞瘤NB-1的超微结构和钙ATP酶的观察 被引量：2

2

作者 宋伟峰 关欣 +2 位作者 刘东娟 徐彦平 石玉秀 《电子显微学报》 CAS CSCD 2000年第3期195-196,共2页

关键词 人神经母细胞瘤 NB-1 超微结构 电镜 钙ATP酶

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660 nm红光照射对营养缺乏人神经母细胞瘤细胞活力的调节作用及其机制 被引量：2

3

作者 刘岩松 张洁 卢涛 《山东医药》 CAS 2022年第14期36-40,共5页

目的观察660 nm红光对营养缺乏状态下人神经母细胞瘤细胞活力的调节作用,并探讨其作用机制与线粒体功能的关系。方法取人神经瘤细胞母细胞,培养于低营养培养基(RPMI1640培养基中加入终体积5%FBS和1%青—链霉素溶液),用CCK-8法验证营养... 目的观察660 nm红光对营养缺乏状态下人神经母细胞瘤细胞活力的调节作用,并探讨其作用机制与线粒体功能的关系。方法取人神经瘤细胞母细胞,培养于低营养培养基(RPMI1640培养基中加入终体积5%FBS和1%青—链霉素溶液),用CCK-8法验证营养缺乏模型。使用LED芯片与可调直流稳压电源制作光照装置,对营养缺乏细胞分别给予能量密度为2、4、8、16 J/cm^(2)和功率密度为2、4、8 mW/cm^(2)的660 nm红光照射,采用CCK-8试剂检测细胞活力,以细胞活力最高组对应的功率密度和能量密度作为最佳光照条件。取营养缺乏细胞,随机分为两组,光照组在最佳光照条件下接受红光照射1 h,对照组在相同环境下避光孵育1 h,运用长时程活细胞成像仪器Incucyte监测细胞增殖情况,计算光照后8、16、24 h时各组细胞平均汇合度;使用荧光探针JC-1检测光照后1~6 h线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平。结果在功率密度2 mW/cm^(2)、能量密度8 J/cm^(2)时,光照组细胞活力最高(P均<0.01)。光照组光照后8、16、24 h的细胞汇合度与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。光照组线粒体膜电位水平随光照时间延长逐渐升高,光照后2、3 h时达到高峰(P<0.05或<0.01),此后随着时间增加逐渐回落至光照前水平;ROS水平随光照时间延长逐渐降低,在光照后3 h达到最低(P<0.05),此后随着时间增加又出现上升(P<0.05)。结论在功率密度2 mW/cm^(2)、能量密度8 J/cm^(2)条件下,660 nm红光照射能够增加处于营养缺乏状态下的人神经母细胞瘤细胞活力;其机制可能是通过快速超极化线粒体膜电位、降低ROS生成,从而增强线粒体功能,以提高细胞活力。 展开更多

关键词 人神经母细胞瘤细胞 光生物调节 660 nm红光 细胞活力 线粒体 活性氧

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蛋清溶菌酶淀粉样纤维对人神经母细胞瘤细胞的毒性

4

作者 白瑜 王武 +2 位作者 王碧 李颖 冯自立 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2721-2728,共8页

本研究旨在探讨一定理化条件下形成的蛋清溶菌酶淀粉样纤维对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的毒性作用。采用高温(57±0.1)℃、pH 2.0甘氨酸溶液、振荡条件下孵育100μmol·L^(-1)的蛋清溶菌酶蛋白,使其聚集成为蛋清溶菌酶淀粉... 本研究旨在探讨一定理化条件下形成的蛋清溶菌酶淀粉样纤维对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的毒性作用。采用高温(57±0.1)℃、pH 2.0甘氨酸溶液、振荡条件下孵育100μmol·L^(-1)的蛋清溶菌酶蛋白,使其聚集成为蛋清溶菌酶淀粉样纤维;透射电子显微镜观察蛋清溶菌酶淀粉样纤维的超微结构,ANS荧光法测定纤维的疏水性,圆二色谱法测定并计算纤维的二级结构含量;将此纤维作用于培养的SH-SY5Y神经细胞,MTT法检测细胞活力,核染色法检测细胞凋亡状况。透射电镜结果显示,蛋清溶菌酶在孵育4d后形成了呈短杆状超微结构的淀粉样纤维;与天然蛋清溶菌酶蛋白相比,纤维的疏水性和二级结构β折叠含量均显著提高;且1~3μmol·L^(-1)纤维作用于SH-SY5Y细胞12、24和48h均产生了显著的毒性作用(P<0.01),1、2和3μmol·L^(-1)纤维作用细胞12h时的细胞活力分别为75.16%±15.51%、67.54%±12.13%和67.89%±10.26%,作用24h的细胞活力分别为75.78±13.01%、58.41%±5.55%和61.90%±8.94%,作用48h的细胞活力分别为71.59%±14.75%、55.65%±5.78%和46.45%±6.23%,细胞活力降低呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性,且细胞核染色呈现典型的核凋亡变化。结果提示,蛋清溶菌酶在一定理化条件下可形成具有神经细胞毒性的淀粉样纤维,为解释朊蛋白或其他蛋白质形成淀粉样纤维的机制提供参考。 展开更多

关键词 淀粉样纤维 蛋清溶菌酶 Β折叠 人神经母细胞瘤细胞

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七氟醚通过mTOR信号通路诱导人神经母细胞瘤细胞自噬的发生

5

作者 吕静静 程浩 +2 位作者 刘虎 金孝岠 陈永权 《皖南医学院学报》 CAS 2022年第2期173-176,共4页

目的:探讨七氟醚对人神经母细胞瘤细胞(SHSY-5Y细胞)自噬的影响及mTOR信号通路在其中的作用。方法:将培养的SHSY-5Y细胞随机分为4组,空白对照组(C组)、空白对照+雷帕霉素50 nmol/L组(C+R组)、4.8%七氟醚12 h组(S组)和4.8%七氟醚12 h+雷... 目的:探讨七氟醚对人神经母细胞瘤细胞(SHSY-5Y细胞)自噬的影响及mTOR信号通路在其中的作用。方法:将培养的SHSY-5Y细胞随机分为4组,空白对照组(C组)、空白对照+雷帕霉素50 nmol/L组(C+R组)、4.8%七氟醚12 h组(S组)和4.8%七氟醚12 h+雷帕霉素50 nmol/L组(S+R组)。各组分别于处理结束时采用Western blot法测定各组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Atg5以及p-mTOR、t-mTOR、β-actin的表达水平;利用mRFP-EGFP-LC3质粒转染,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬小体以及自噬溶酶体的数量,从而判断七氟醚对SHSY-5Y细胞自噬流的影响及其具体机制。结果:与C组比较,C+R组、S组和S+R组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Atg5表达水平均增高(P<0.05);与C+R组和S组比较,S+R组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Atg5表达水平也增高(P<0.01)。与C组比较,C+R组、S组和S+R组p-mTOR/t-mTOR比值均降低(P<0.001);与C+R组和S组比较,S+R组p-mTOR/t-mTOR比值也降低(P<0.001)。与C组比较,C+R组、S组和S+R组自噬小体、自噬溶酶体数量均增加(P<0.001);与C+R组和S组比较,S+R组自噬小体、自噬溶酶体数量也增加(P<0.001)。结论:吸入麻醉药七氟醚通过mTOR信号通路诱导SHSY-5Y细胞自噬的发生。 展开更多

关键词 七氟醚 人神经母细胞瘤细胞 细胞自噬 MTOR信号通路

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PTCSC3对谷氨酸诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡的影响

6

作者 苗峥 胡雨 +6 位作者 米山 焦明丽 韩明明 王轶博 胡勇 黄锋 詹合琴 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第9期1222-1235,共14页

目的探讨乳头状甲状腺癌易感性候选基因3(papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3,PTCSC3)对谷氨酸(glutamicacid,Glu)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,谷氨酸损伤SH-SY5... 目的探讨乳头状甲状腺癌易感性候选基因3(papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3,PTCSC3)对谷氨酸(glutamicacid,Glu)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,谷氨酸损伤SH-SY5Y细胞24 h,转染技术对PTCSC3进行抑制及过表达,采用Hoechst 33258染色法、流式细胞技术、AO/EB染色及四甲基偶氮唑盐比色(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测抑制或过表达PTCSC3后对各组细胞凋亡、生存的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测各组细胞中PTCSC3、CCAAT/增强子结合蛋白β(CAAT/enhancer binding protein beta,C/EBP-β)及Cbp/p300结合转化激活因子4(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 4,CITED4)的基因表达情况;Western blot检测各组细胞中C/EBP-β、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)及CITED4、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、原癌基因n-Myc的蛋白表达水平。结果2000μmol·L^(-1)Glu处理24 h对PTCSC3细胞有明显的损伤作用;与模型组比较,PTCSC3抑制剂可有效改善Glu诱导SH-SY5Y细胞凋亡率的增加和细胞存活率的下降;明显降低C/EBP-β基因及蛋白、Bax蛋白的表达,促进BDNF、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达;增加CITED4、Cyclin D1和n-Myc的表达水平。反之,过表达PTCSC3则出现与上述结果相反的结果。结论PTCSC3可能通过调控C/EBP-β,进而调控下游信号通路BDNF/Akt和CITED4/Cyclin D1信号通路,改善Glu诱导SH-SY5Y神经细胞的凋亡和生存状态。 展开更多

关键词 乳头状甲状腺癌易感性候选基因3 人神经母细胞瘤细胞 细胞凋亡 作用 分子机制

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亚甲基蓝对冈田酸所致SK-N-SH细胞分化神经元损伤的保护作用 被引量：2

7

作者 佀营营 袁玉婷 +6 位作者 邱理红 吕欢欢 周慧 许波 李刚 李忌 王振华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第17期195-200,共6页

目的:考察亚甲基蓝(methylene blue,MB)对冈田酸(okadaic acid,OA)所致分化神经元损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法:采用全反式维甲酸诱导SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞分化为成熟神经元细胞;OA诱导分化神经元损伤模拟阿尔茨海默症(A... 目的:考察亚甲基蓝(methylene blue,MB)对冈田酸(okadaic acid,OA)所致分化神经元损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法:采用全反式维甲酸诱导SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞分化为成熟神经元细胞;OA诱导分化神经元损伤模拟阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)神经元损伤;磺酰罗丹明B法检测MB对神经元细胞活性的影响;Giemsa染色法观察细胞形态变化;Western blotting检测突触素蛋白、磷酸化tau蛋白(p-tau)的表达水平。结果:全反式维甲酸可浓度依赖性抑制SK-N-SH细胞增殖,10μmol/L全反式维甲酸处理SK-N-SH细胞7 d后,细胞突触明显伸长,出现典型神经元特征;以40 nmol/L OA构建AD模型;MB可浓度依赖性抑制分化的SK-N-SH细胞活性,与OA组相比,随着MB浓度增加,细胞轴突长度与胞体长度比值增大,细胞突触变长,MB改善了OA所致的细胞突触损伤,突触素蛋白表达量明显升高(P<0.01),p-tau(Ser262)蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:MB对OA所造成的分化SK-N-SH神经元细胞突触损伤有保护作用,可防止AD中tau蛋白的过度磷酸化。 展开更多

关键词 亚甲基蓝 分化SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞 全反式维甲酸 冈田酸 TAU蛋白磷酸化

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脂多糖调节SH-SY5Y细胞线粒体融合在阿尔茨海默病中的作用 被引量：1

8

作者 王睿 尹亚萍 +3 位作者 李国平 马焜 靖雪妍 陈丽丽 《中国实用医药》 2024年第9期172-177,共6页

目的 探讨脂多糖(LPS)调节人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体融合在阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法 选取SH-SY5Y细胞株进行常规培养,于细胞对数生长期以25、50、100μg/ml的LPS处理SH-SY5Y细胞48 h,分别设置为25μg/ml组、50μg/m... 目的 探讨脂多糖(LPS)调节人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体融合在阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法 选取SH-SY5Y细胞株进行常规培养,于细胞对数生长期以25、50、100μg/ml的LPS处理SH-SY5Y细胞48 h,分别设置为25μg/ml组、50μg/ml组、75μg/ml组,同时设置空白对照组。采用细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞存活率;光镜检测细胞内线粒体损伤情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测动力相关蛋白1 (Drp1)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)和视神经萎缩因子1(Opa1)微小核糖核酸(mRNA)表达和蛋白表达水平。分析LPS对SH-SY5Y细胞存活率和β-淀粉样蛋白(Aβ)含量, SH-SY5Y细胞线粒体形态, SH-SY5Y细胞内SOD、MDA、NO和TNF-α, SH-SY5Y细胞内mRNA表达的影响。结果 CCK-8法检测结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞存活率明显下降, Aβ含量显著升高;随着LPS剂量的增加, SH-SY5Y细胞存活率呈剂量依赖性降低, Aβ含量呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05)。光镜结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内线粒体出现明显变大变圆,体积增大,线粒体出现肿胀和线粒体空泡化等改变,并伴有线粒体自噬的发生。ELISA结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内SOD表达分别显著降低24.16%、69.08%和123.78%, MDA表达分别显著增加37.65%、52.13%和101.85%, NO表达分别显著增加54.34%、119.08%和167.78%, TNF-α表达分别显著增加54.34%、119.08%和167.78%,随着LPS剂量的增加, SOD含量变化具有剂量依赖性降低, NO、MDA、TNF-α含量变化呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05)。Real-Time PCR结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内Drp1、Mnf1和Mnf2 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著增加, SH-SY5Y细胞内Opa1 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS可明显加速SH-SY5Y细胞线粒体融合分裂,降低细胞的存活率,在阿尔茨海默病的发病机制中具有重要作用。 展开更多

关键词 脂多糖 人神经母细胞瘤细胞 线粒体 阿尔茨海默病

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健脾通络饮对缺氧再复神经细胞损伤保护作用机制的影响 被引量：1

9

作者 陈枫 刘海兴 《实用中医内科杂志》 2021年第6期102-105,I0010,I0011,共6页

目的观察健脾通络饮对神经细胞(SH-SY5Y)缺氧损伤后是否有保护作用,探讨健脾通络饮防治脑缺血的作用机制。方法制备健脾通络饮含药血清,培养SH-SY5Y,将其分成正常对照组(C)、缺氧再复模型组(IR)、缺氧+健脾通络饮含药血清低浓度组(JL)... 目的观察健脾通络饮对神经细胞(SH-SY5Y)缺氧损伤后是否有保护作用,探讨健脾通络饮防治脑缺血的作用机制。方法制备健脾通络饮含药血清,培养SH-SY5Y,将其分成正常对照组(C)、缺氧再复模型组(IR)、缺氧+健脾通络饮含药血清低浓度组(JL)、缺氧+健脾通络饮含药血清中浓度组(JM)、缺氧+健脾通络饮含药血清高浓度组(JH)、缺氧+银杏叶阳性对照组(GC),用低糖缺氧的DMEM培养基处理SH-SY5Y模拟细胞缺氧,Hoechst染色法检测神经细胞存活率;Western Blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞仪检测分析缺氧2 h处理后SH-SY5Y凋亡情况。结果Hoechst染色结果显示,给予中、高浓度的健脾通络饮含药血清处理的组别与缺氧/复氧损伤处理的模型组相比凋亡数量明显减少。WB结果显示,在含药血清的干预下,与正常对照组相比,模型组中Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值明显下降(P<0.05);中、高浓度组与模型组相比,Bcl-2蛋白表达量升高,Bax下降,两者比值明显升高(P<0.05)。流式细胞仪检测结果,中、高浓度的健脾通络饮含药血清和银杏叶片阳性对照组与模型组相比,凋亡率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论健脾通络饮可能对脑缺血再灌注脑损伤神经具有保护作用,其保护机制可能与其下调凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达有关。 展开更多

关键词 健脾通络饮 人神经母细胞瘤细胞 含药血清 凋亡

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锁阳不同提取物抗氧化活性及对次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶诱导细胞损伤保护作用的比较研究 被引量：11

10

作者 鲁艺 程发峰 +2 位作者 王雪茜 钟相根 王庆国 《安徽中医学院学报》 CAS 2012年第4期57-60,共4页

目的比较不同锁阳提取物体外抗氧化活性及对次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(hypoxanthine/xanthine oxidase,HPX/XO)诱导细胞损伤的保护作用。方法通过建立XO/XTT氧自由基生成体系和XO致尿酸生成反应,以及HPX/XO诱导的细胞氧化损伤模型,分别研... 目的比较不同锁阳提取物体外抗氧化活性及对次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(hypoxanthine/xanthine oxidase,HPX/XO)诱导细胞损伤的保护作用。方法通过建立XO/XTT氧自由基生成体系和XO致尿酸生成反应,以及HPX/XO诱导的细胞氧化损伤模型,分别研究不同锁阳提取物的自由基清除能力,对HPX活性的干预作用,和对氧化损伤细胞的保护作用。结果 100、10、1μg/ml锁阳乙酸乙酯和甲醇提取物均能显著地清除自由基,而各浓度的锁阳二氯甲烷和水提物没有明显的清除自由基能力。锁阳乙酸乙酯和甲醇提取物对细胞氧化损伤模型显示明显的保护作用,可显著提高细胞存活率,但不能明显抑制XO活性。结论锁阳抗氧化有效部位主要富集在乙酸乙酯与甲醇提取相中,具有良好的抗氧化作用,清除氧自由基是其主要机制之一。 展开更多

关键词 锁阳提取物 氧化应激 SK-N-SH人神经母细胞瘤 黄嘌呤氧化酶

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帕金森病细胞模型的构建及氨基酸表达观察

11

作者 李双 李双双 +2 位作者 张晓莹 郭春燕 王治宝 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第15期21-25,共5页

目的建立帕金森病(PD)人神经母细胞瘤细胞模型,并筛选PD细胞中的氨基酸标志物。方法将人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为正常组、溶媒组、鱼藤酮组。鱼藤酮组分别加入0.15、0.25μmol/L的鱼藤酮,溶媒组加入二甲基亚砜(DMSO),正常组不加药... 目的建立帕金森病(PD)人神经母细胞瘤细胞模型,并筛选PD细胞中的氨基酸标志物。方法将人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为正常组、溶媒组、鱼藤酮组。鱼藤酮组分别加入0.15、0.25μmol/L的鱼藤酮,溶媒组加入二甲基亚砜(DMSO),正常组不加药物。分别于给药24、48 h后采用MTT法测算细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,选择对细胞存活、形态影响较小的鱼藤酮作用浓度及作用时间(0.15μmol/L、24 h),采用Western blotting法检测SH-SY5Y细胞中的α-突触核蛋白以验证PD模型。采用高效液相色谱法检测PD细胞中的谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)、组氨酸(His)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys),对鱼藤酮组和溶媒组差异有统计学意义的氨基酸进入偏最小二乘判别分析,选择P<0.05且变量重要性投影值(VIP)>1的氨基酸为PD的标志物。结果鱼藤酮组细胞中α-突触核蛋白相对表达量高于溶媒组(P均<0.05),表明SH-SY5Y细胞PD模型制作成功。给药24 h时,鱼藤酮组细胞中Glu、Ser、Gln、His、Gly、Pro、Phe、Ile、Leu、Lys水平低于溶媒组(P均<0.05);给药48 h时,鱼藤酮组除Gln外,其余11种氨基酸水平均低于溶媒组(P均<0.05)。筛选氨基酸标志物为Glu、Ser、Gly、Pro(给药24 h时VIP值分别为1.016、1.016、1.016、1.009,给药48 h时VIP值均为1.001)。结论利用鱼藤酮诱导成功建立了PD细胞模型,筛选出Glu、Ser、Gly、Pro可能为PD的潜在标志物。 展开更多

关键词 帕金森病 鱼藤酮 人神经母细胞瘤细胞 氨基酸

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氟及7-NI共培养的SH-SY5Y细胞nNOS表达、增殖情况观察 被引量：4

12

作者 邓明芬 朱丹 +1 位作者 桂传枝 官志忠 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第11期22-25,共4页

目的观察氟及神经型一氧化氮合成酶(nNOS)特异性抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)共培养的SH-SY5Y细胞增殖情况和nNOS表达变化。方法将体外培养SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、7-NI组、低氟+7-NI组、高氟+7-NI组,每组6个复孔。低氟组加... 目的观察氟及神经型一氧化氮合成酶(nNOS)特异性抑制剂7-硝基吲唑(7-NI)共培养的SH-SY5Y细胞增殖情况和nNOS表达变化。方法将体外培养SH-SY5Y细胞分为对照组、低氟组、高氟组、7-NI组、低氟+7-NI组、高氟+7-NI组,每组6个复孔。低氟组加入0.2 mmol/L Na F,高氟组加入2.0 mmol/L Na F,7-NI组加入1μmol/L 7-NI,低氟+7-NI组加入0.2 mmol/L Na F和1μmol/L 7-NI,高氟+7-NI组加入2.0 mmol/L Na F和1μmol/L 7-NI,对照组加入等体积培养液,继续培养24 h。采用CCK-8法检测各组SH-SY5Y细胞增殖情况(以OD450表示);采用实时荧光定量PCR法检测各组SH-SY5Y细胞NOS mRNA;采用Western blotting法检测各组SH-SY5Y细胞NOS蛋白。结果低氟组、高氟组细胞OD450均低于对照组(P均<0.05),且高氟组细胞OD450低于低氟组(P<0.05);7-NI组细胞OD450与对照组相比P>0.05;低氟+7-NI组细胞OD450高于低氟组(P<0.05);高氟+7-NI组细胞OD450高于高氟组(P<0.05)。低氟组、高氟组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.05),且高氟组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均高于低氟组(P均<0.05);7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05);低氟+7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于低氟组(P<0.05);高氟+7-NI组细胞nNOS mRNA和蛋白相对表达量均低于高氟组(P<0.05)。结论氟可以抑制SHSY5Y细胞增殖,7-NI共培养可以减轻氟对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用。 展开更多

关键词 氟 氟中毒 人神经母细胞瘤细胞 7-硝基吲唑 神经型一氧化氮合成酶 一氧化氮

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芍药苷对PINK1-Parkin介导的线粒体自噬在H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤中的影响 被引量：12

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作者 余婧萍 贺春香 +3 位作者 李泽 杨苗 成绍武 宋祯彦 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2020年第11期45-51,共7页

目的观察芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞损伤中线粒体自噬的影响,探讨其相关作用机制。方法采用250μmol/L H2O2诱导SH-SY5Y细胞24 h构建细胞损伤模型。实验细胞分为空白组、模型组和芍药苷低、中、高剂... 目的观察芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞损伤中线粒体自噬的影响,探讨其相关作用机制。方法采用250μmol/L H2O2诱导SH-SY5Y细胞24 h构建细胞损伤模型。实验细胞分为空白组、模型组和芍药苷低、中、高剂量组。采用MTT法检测细胞存活率,JC-1线粒体膜电位荧光探针检测线粒体膜电位,TUNEL染色检测细胞凋亡率,Western blot检测PINK1、Parkin、LC3Ⅱ和p62蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组细胞存活率下降,线粒体膜电位下降,细胞凋亡率上升,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达升高,Parkin蛋白表达无明显变化;与模型组比较,芍药苷低、中、高剂量组细胞线粒体膜电位上调,细胞凋亡率下降,PINK1、LC3Ⅱ和p62蛋白表达降低,Parkin蛋白表达升高。结论芍药苷可显著降低H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其机制可能与调控PINK1-Parkin介导的线粒体自噬途径相关。 展开更多

关键词 芍药苷 人神经母细胞瘤细胞 过氧化氢 线粒体自噬 PINK蛋白 Parkin蛋白 信号通路

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富硒蛹虫草子实体多肽对SH-SY5Y细胞及脑缺血/再灌注损伤大鼠保护作用的机制研究

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作者 陈克成 郑毅男 +1 位作者 杨力 李庆杰 《中国现代中药》 CAS 2023年第10期2128-2134,共7页

目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下... 目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下对细胞增殖的影响,以观察SECM对SH-SY5Y细胞的保护修复作用;使用改进的推注线技术制备大鼠I/R损伤模型,24 h后进行神经功能评分,检测各组大鼠脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性,核转录因子(NF)-κB、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达水平。结果:过氧化氢和冈田酸对SH-SY5Y细胞的IC50分别为420、35 nmol·L^(-1),而SECM在IC50过氧化氢和冈田酸作用下对SH-SY5Y细胞具有很好的保护和修复作用;与假手术组比较,模型组大鼠神经功能损伤严重,脑组织中MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均升高,GSH-Px及SOD活性均下降。与模型组比较,SECM高、中剂量组大鼠神经功能评分有所改善;SECM高、中、低剂量组大鼠脑组织中GSH-Px和SOD活性均上升,MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均降低。结论:SECM对预先暴露于损伤因子过氧化氢及冈田酸的SH-SY5Y细胞均具有很好的保护和修复作用,同时对I/R损伤大鼠具有脑保护作用。 展开更多

关键词 富硒蛹虫草子实体多肽 人神经母细胞瘤细胞 细胞增殖 脑缺血/再灌注 作用机制

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