人脂肪干细胞和人真皮成纤维细胞来源外泌体对紫外线诱导裸鼠光老化皮肤皱纹的改善作用

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作者 迪丽达尔·地里夏提 贾琳 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期621-631,共11页

目的:探讨人脂肪干细胞(hADSCs)和人真皮成纤维细胞(HDFs)来源的外泌体(Exo)对紫外线诱导裸鼠光老化皮肤皱纹的改善作用,并阐明其作用效果。方法:分别由hADSCs和HDFs中分离Exo,采用Western blotting法鉴定,记为hADSCs-Exo和HDFs-Exo。... 目的:探讨人脂肪干细胞(hADSCs)和人真皮成纤维细胞(HDFs)来源的外泌体(Exo)对紫外线诱导裸鼠光老化皮肤皱纹的改善作用,并阐明其作用效果。方法:分别由hADSCs和HDFs中分离Exo,采用Western blotting法鉴定,记为hADSCs-Exo和HDFs-Exo。将28只裸鼠随机分为对照组、模型组[注射Hank’s平衡盐溶液(HBSS)]、hADSCs-Exo组(注射hADSCs-Exo)和HDFs-Exo组(注射HDFs-Exo),每组7只,除对照组外,其余3组裸鼠建立背部皮肤光老化模型,4周后,观察各组裸鼠背部皮肤大体形态表现并进行皮肤皱纹等级评分,HE染色观察各组裸鼠皮肤组织病理形态表现,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组裸鼠皮肤组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α (TNF-α)水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组裸鼠皮肤组织中胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9和MMP-13mRNA及蛋白表达水平,免疫组织化学染色法观察各组裸鼠皮肤组织中ColⅠ、原弹性蛋白和原纤维蛋白1蛋白表达情况。结果:由hADSCs和HDFs中分离的颗粒物均表现为典型的囊泡状结构,直径为50~100 nm,CD81、CD63、热休克蛋白70 (HSP70)和肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)均呈高表达,表明成功分离hADSCs-Exo和HDFs-Exo。对照组裸鼠背部皮肤光滑,未见松弛或皱纹;模型组裸鼠皮肤皱纹严重,可见表皮粗糙、干燥和色素沉积等损伤情况;与模型组比较,hADSCs-Exo组裸鼠背部皮肤有少量深皱纹和轻度皮肤松弛,HDFs-Exo组裸鼠背部皮肤皱纹深度明显减轻。皮肤皱纹等级评分,与对照组比较,模型组裸鼠皮肤皱纹等级评分明显升高(P<0.05);与模型组比较,hADSCs-Exo组和HDFs-Exo组裸鼠皮肤皱纹等级评分明显降低(P<0.05);与hADSCs-Exo组比较,HDFs-Exo组裸鼠皮肤皱纹等级评分均明显降低(P<0.05)。HE染色观察,对照组裸鼠皮肤组织分层结构清晰,表皮较薄;模型组裸鼠皮肤组织分层紊乱,结构松散,表皮明显增厚;与模型组比较,hADSCs-Exo组和HDFs-Exo组裸鼠皮肤组织病变减轻,且HDFs-Exo组裸鼠皮肤组织表皮变薄,组织分层较为清晰,皮肤结构趋于正常。ELISA法检测,与对照组比较,模型组裸鼠皮肤组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,hADSCs-Exo组和HDFs-Exo组裸鼠皮肤组织中IL-1β、IL-6及TNF-α水平均明显降低(P<0.05);与hADSCs-Exo组比较,HDFs-Exo组裸鼠皮肤组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与对照组比较,模型组裸鼠皮肤组织中ColⅠmRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9和MMP-13 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,hADSCs-Exo组和HDFs-Exo组裸鼠皮肤组织中ColⅠmRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9和MMP-13 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);与hADSCs-Exo组比较,HDFs-Exo组裸鼠皮肤组织中ColⅠmRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05), MMP-1、 MMP-2、 MMP-3、 MMP-9和MMP-13 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。免疫组织化学染色法观察,与对照组比较,模型组裸鼠皮肤组织中原弹性蛋白、原纤维蛋白1和ColⅠ染色强度均明显减弱;与模型组比较,hADSCs-Exo组和HDFs-Exo组裸鼠皮肤组织中原弹性蛋白、原纤维蛋白1和ColⅠ染色强度均明显增强;与hADSCs-Exo组比较,HDFsExo组裸鼠皮肤组织中原弹性蛋白、原纤维蛋白1和ColⅠ染色强度更深。结论:hADSCs和HDFs来源的Exo对紫外线诱导裸鼠光老化皮肤皱纹具有明显的改善作用,且HDFs来源的Exo作用效果要优于hADSCs来源的Exo。 展开更多

关键词 人脂肪干细胞 人真皮成纤维细胞 外泌体 光老化 皮肤皱纹

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富血小板血浆对体外培养条件下人真皮成纤维细胞增殖能力的影响 被引量：7

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作者 王悦 马英智 +2 位作者 朱喆 苏学今 周延民 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期84-88,I0002,共6页

目的:探讨富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hDFbs)在体外培养条件下增殖能力的影响,探讨PRP促进皮肤、黏膜伤口愈合的机制。方法:PRP和hDFbs来源于健康成年人,两次离心法制备PRP,倒置相差显微镜观察0、12.5%、25.0%、50.0%和100.0%... 目的:探讨富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hDFbs)在体外培养条件下增殖能力的影响,探讨PRP促进皮肤、黏膜伤口愈合的机制。方法:PRP和hDFbs来源于健康成年人,两次离心法制备PRP,倒置相差显微镜观察0、12.5%、25.0%、50.0%和100.0%PRP浓度作用下hDFbs的增殖;免疫细胞化学检测50.0%浓度不同剂量PRP作用下细胞血小板源性生长因子(PDGF)的表达;荧光染色技术观察PRP作用下hDFbs在纯钛材料表面的生长;流式细胞术检测PRP培养后不同时间hDFbs细胞周期;CCK-8法检测不同浓度PRP培养条件下细胞增殖活力。结果:倒置相差显微镜下见PRP各浓度组细胞数量均多于对照组,细胞数量增加、折光性增强;免疫细胞化学检测,30μL PRP组PDGF表达量最高且细胞密度最大,但10μL PRP组累积吸光度值(IOD)高于20μL PRP组(836.27±21.15 vs 794.35±30.26,P<0.05);荧光染色技术观察,PRP组材料表面hDFbs细胞密集,数量较对照组高;细胞周期检测,PRP促进细胞进入S期进行DNA复制,PRP作用后第2天PRP组S期细胞百分比高于空白组(34.41%vs 22.00%,P<0.05),第8天PRP组G0/G1期细胞百分比高于空白组(95.07%vs 89.70%,P<0.05);CCK-8测定细胞增殖活性,100.0%PRP组吸光度A450值高于12.5%PRP组(34.41%vs 22.00%,P<0.05)。结论:高浓度的PRP虽然表现较强的促细胞增殖作用,但并不存在浓度、剂量依赖性,适宜浓度的PRP可促进hDFbs的增殖。 展开更多

关键词 人真皮成纤维细胞 富血小板血浆 细胞增殖 培养技术 细胞周期

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NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用 被引量：2

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作者 陈颖 黄昊 +3 位作者 汤红峰 郑秀芬 胡勇 王瑞华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期391-395,共5页

目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法 H_2O_2构建氧化应激模型,将实验分为正常组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂(DPI)组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot分析NA... 目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法 H_2O_2构建氧化应激模型,将实验分为正常组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂(DPI)组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot分析NADPH氧化酶胞膜亚基gp91phox表达变化。结果 H_2O_2对成纤维细胞的氧化损伤呈时间和浓度依赖,H_2O_2700μmol/L处理24 h后细胞活力下降约40%(P<0.05),ROS升高2倍(P<0.05)。而抑制剂组细胞活力较氧化损伤组增加20%(P<0.05),ROS下降至正常水平(P<0.05)。Western blotting结果显示氧化损伤组gp91phox表达随H_2O_2浓度逐渐升高,而抑制剂组表达接近正常水平。结论 H_2O_2可通过影响NADPH氧化酶特别是胞膜亚基gp91phox引发成纤维细胞氧化损伤。 展开更多

关键词 人真皮成纤维细胞 活性氧 氧化应激 NADPH氧化酶 NADPH氧化酶抑制剂

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两种方法提取的人血清对体外培养人真皮成纤维细胞促增殖作用的比较研究 被引量：2

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作者 鲁华 鲁峰 +1 位作者 刘戈 高建华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期61-65,共5页

目的使用两种不同方法提取人血清,研究对比得出最快速、廉价、安全而有效的富含生长因子的人血清提取方法,以促进其在临床上的应用。方法分离并培养人真皮成纤维细胞。分别使用全血凝固后离心法和Anitua法提取人血清。测定各血清样本中P... 目的使用两种不同方法提取人血清,研究对比得出最快速、廉价、安全而有效的富含生长因子的人血清提取方法,以促进其在临床上的应用。方法分离并培养人真皮成纤维细胞。分别使用全血凝固后离心法和Anitua法提取人血清。测定各血清样本中PDGF-AB及TGF-β1的含量。分别使用含有10%胎牛血清(FBS)和10%人血清(HS)的DMEM培养基培养成纤维细胞,比较不同培养基对细胞形态、活力、增殖的影响。结果各组细胞形态正常,增殖活力良好。B组(全血凝固后离心组)细胞的数量及活力均明显高于其他各组(P<0.05),且该法获得的血清中生长因子含量最高(P<0.05),与生长曲线及MTT曲线所示结果一致。结论全血凝固后离心法提取的HS内所含生长因子浓度最高,对细胞生长促进作用最大,提取方法简单、廉价、有效。 展开更多

关键词 人血清 人真皮成纤维细胞 生长因子 提取方法 细胞培养

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三维培养条件下流体剪切力对人真皮成纤维细胞成骨分化的影响 被引量：2

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作者 张维 谭燃景 +6 位作者 唐辉 邱伟明 杨桂红 温旭红 闫洪涛 杨亚东 伍津津 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1416-1421,共6页

目的通过准静态平面流场灌注系统,探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法将人真皮成纤维细胞按2×105/m L密度接种于胶原水凝胶支架中,同时设置低流速处理组(low flow velocity treatment ... 目的通过准静态平面流场灌注系统,探讨不同流体剪切力对三维培养条件下人真皮成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法将人真皮成纤维细胞按2×105/m L密度接种于胶原水凝胶支架中,同时设置低流速处理组(low flow velocity treatment group,LFV组)和高流速处理组(high flow velocity treatment group,HFV组)与三维静态培养的对照组(control group)进行比较。第3、6天和9天对各实验组进行HE染色并计数细胞;全程每隔3天测1次培养基中葡萄糖的消耗量;第21天行茜素红染色观察各组诱导矿化情况,同时采用FQ-PCR定量测定ALP和BMP-2基因的表达。结果 3组细胞均增殖明显,第6、9天LFV组细胞增殖最多,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);实验周期内各组培养基的葡萄糖含量均呈下降趋势,但组间比较差异无统计学意义;第21天茜素红染色3组均呈阳性,矿化结节面积大小统计显示HFV组最大,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);ALP和BMP-2基因表达量分别为LFV组:(1.780±0.233)/(2.788±0.241);HFV组:(2.262±0.306)/(4.576±0.253);对照组:(1.147±0.215)/(0.354±0.063),组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论流体剪切力能促进人真皮成纤维细胞的增殖和成骨分化,且流体剪切力较小时有利于细胞增殖,而较大时会在一定程度抑制细胞增殖。 展开更多

关键词 人真皮成纤维细胞 灌注培养 流体剪切力 三维支架 成骨分化

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丹皮酚对TNF-α诱导真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA及细胞因子表达的影响 被引量：7

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作者 王玫 刘继勇 +2 位作者 韩盈 童晓霞 胡晋红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期458-461,共4页

目的通过研究丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA及细胞因子表达的影响,探讨丹皮酚抗皮肤炎症的可能机制。方法采用RT-PCR法考察正常人真皮成纤维细胞中MMP-9 mRNA表达情况以及丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRN... 目的通过研究丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA及细胞因子表达的影响,探讨丹皮酚抗皮肤炎症的可能机制。方法采用RT-PCR法考察正常人真皮成纤维细胞中MMP-9 mRNA表达情况以及丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞MMP-9 mRNA表达的影响。采用ELISA法测定丹皮酚对TNF-α诱导的真皮成纤维细胞表达IL-1β、IL-6及IL-8的影响。结果MMP-9在正常真皮成纤维细胞上表达极弱,TNF-α可以诱导MMP-9 mRNA的表达,丹皮酚可以抑制TNF-α诱导引起的MMP-9 mRNA表达的上调。成纤维细胞可分泌少量的IL-1β、IL-6及IL-8,TNF-α可以明显增加成纤维细胞IL-1β和IL-8的分泌量,丹皮酚可以抑制TNF-α诱导的IL-1β和IL-8的产生,但对IL-6的分泌无影响。结论丹皮酚可以抑制TNF-α诱导真皮成纤维细胞引起的MMP-9 mRNA及炎症因子IL-1β和IL-8表达水平的上调。 展开更多

关键词 丹皮酚 基质金属蛋白酶9 人真皮成纤维细胞皮 肤炎症 细胞因子

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旋转发生器培养扩增人皮肤成纤维细胞 被引量：1

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作者 晁洋 倪华 +3 位作者 兰青艳 李娟 王卫华 金岩 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期356-360,共5页

目的:研究旋转发生器扩增人皮肤成纤维细胞的可行性。方法:利用组织贴壁法从人皮肤中分离出人真皮成纤维细胞(hDFBs),使用DIO标记细胞后结合微载体在旋转发生器(RCCS)中培养,细胞贴附微载体的状况使用荧光显微镜、扫描电镜观测。并且检... 目的:研究旋转发生器扩增人皮肤成纤维细胞的可行性。方法:利用组织贴壁法从人皮肤中分离出人真皮成纤维细胞(hDFBs),使用DIO标记细胞后结合微载体在旋转发生器(RCCS)中培养,细胞贴附微载体的状况使用荧光显微镜、扫描电镜观测。并且检测细胞周期和分析细胞群体倍增时间,以比较微重力培养与平面培养的体外增殖能力差异。对照组细胞按常规平面培养。结果:在旋转发生器的微重力培养体系中,人成纤维细胞能快速贴附到微载体表面,在培养过程中达到很大的细胞密度,旋转发生器培养的细胞倍增时间为(2.99±0.50)d,对照组为(3.43±0.42)d(P<0.05);旋转发生器培养细胞增殖指数48.2±4.3,对照组35.2±3.4。结论:利用生物反应器和微载体悬浮培养人皮肤成纤维细胞,是大量制备皮肤组织工程种子细胞的一种有效方法。 展开更多

关键词 旋转发生器 微载体 人真皮成纤维细胞

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富血小板血浆对人真皮细胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表达的影响 被引量：3

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作者 王悦 朱喆 +3 位作者 成荣杰 张丽红 马英智 周延民 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期64-69,共6页

目的:研究富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hFbs)增殖、分化及胞质中PDGF、TGF-β和VEGF表达量的影响。方法:2次离心法制备PRP,成骨诱导条件下hFbs培养液中加入不同浓度PRP于第12天、21天钙-钴法染色,第21天茜素红染色;免疫细胞化... 目的:研究富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hFbs)增殖、分化及胞质中PDGF、TGF-β和VEGF表达量的影响。方法:2次离心法制备PRP,成骨诱导条件下hFbs培养液中加入不同浓度PRP于第12天、21天钙-钴法染色,第21天茜素红染色;免疫细胞化学法检测加不同浓度PRP后第4天细胞PDGF、TGF-β和VEGF的表达;碱性磷酸酶染色(ALP)检测细胞活性;CCK-8法检测有和无成骨诱导条件下不同浓度PRP对细胞增殖的影响。结果:茜素红染色显示,2.8%PRP组钙结节形成最明显;钙-钴法染色显示,2.8%PRP组矿化作用最强;免疫细胞化学结果表明PDGF表达存在剂量依赖性,TGF-β和VEGF表达虽无剂量依赖性,但有适宜浓度的要求;ALP染色表明3%PRP组细胞增殖明显,活性最强。CCK-8检测表明各浓度PRP对hFbs均有促增殖作用,PRP加成骨诱导组比单纯PRP组表现出更明显的促增殖作用,其中4.8%PRP促增殖作用最强。结论:适宜浓度的PRP可促进hFbs增殖,但相关因子的表达存在适宜浓度的要求,PRP通过促进细胞增殖,增加相关因子表达促进创伤愈合。 展开更多

关键词 富血小板血浆 人真皮成纤维细胞 血小板衍化生长因子 血管内皮细胞生长因子 转化生长因子 增殖 分化

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冰川水和五脉绿绒蒿提取物的美容功效研究 被引量：4

9

作者 陈迪 章漳 +2 位作者 蒋耀权 方兆华 丛峰松 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期207-211,共5页

研究了冰川水和五脉绿绒蒿提取物对人真皮成纤维细胞(HDF-a)的作用。采用MTT法检测了冰川水和五脉绿绒蒿提取物对HDF-a增殖活性的影响,利用荧光试剂盒检测了二者对HDF-a内ATP水平的影响,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测了二者对HDF-... 研究了冰川水和五脉绿绒蒿提取物对人真皮成纤维细胞(HDF-a)的作用。采用MTT法检测了冰川水和五脉绿绒蒿提取物对HDF-a增殖活性的影响,利用荧光试剂盒检测了二者对HDF-a内ATP水平的影响,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测了二者对HDF-a细胞外基质中透明质酸含量的影响,利用Western Blot法研究了二者对HDF-a细胞外基质中Ⅰ型胶原蛋白和弹性蛋白表达的影响。实验结果表明,与对照组相比,冰川水处理后HDF-a增殖速度加快、代谢水平提高、透明质酸含量上升、弹性蛋白表达上调,且差异有统计学意义。五脉绿绒蒿提取物对HDF-a的作用在上述方面更为明显,同时可以促进Ⅰ型胶原蛋白的表达。二者共同作用时效果更为显著。 展开更多

关键词 化妆品添加剂 冰川水 五脉绿绒蒿提取物 人真皮成纤维细胞 抗衰老 保湿

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灵芝孢子粉提取物延缓皮肤衰老作用研究 被引量：4

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作者 刘春媛 刘振华 +5 位作者 陈云霞 何婕 薛圣然 张心怡 郑君 苏宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期59-65,共7页

寻找天然有效成分以延缓皮肤衰老是近年来人们关注与研究的热点。为研究灵芝孢子粉提取物(Ganoderma lucidum spore extract,GLSE)对新生儿人真皮成纤维细胞(human dermal fibroblasts neonatal,HDFn)氧化损伤保护作用及其抗衰老作用,... 寻找天然有效成分以延缓皮肤衰老是近年来人们关注与研究的热点。为研究灵芝孢子粉提取物(Ganoderma lucidum spore extract,GLSE)对新生儿人真皮成纤维细胞(human dermal fibroblasts neonatal,HDFn)氧化损伤保护作用及其抗衰老作用,构建叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,TBHP)诱导HDFn氧化损伤衰老模型,测定GLSE对衰老模型的保护作用以及细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平、线粒体膜电位变化;同时测定衰老相关β-半乳糖苷酶活性以及抗氧化应激相关Nrf2/HO-1通路表达情况。结果显示,GLSE预处理后对TBHP诱导的衰老模型具有保护作用;GLSE作用HDFn后,能够降低MDA含量,提高细胞SOD和GSH-Px活性,稳定细胞线粒体膜电位,并且可以抑制细胞β-半乳糖苷酶活性,激活通路Nrf2/HO-1 mRNA表达。因此,GLSE作用于HDFn后,可以有效地减弱TBHP诱导的氧化损伤,从而达到延缓皮肤衰老的作用。 展开更多

关键词 灵芝孢子粉 延缓衰老 抗氧化 叔丁基过氧化氢(TBHP) 新生儿人真皮成纤维细胞(HDFn)

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紫茉莉花提取物促进胶原蛋白功能化的功效研究 被引量：4

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作者 李慧 蒋丹丹 +2 位作者 DOS SANTOS Morgan 章漳 蒋耀权 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期526-530,共5页

采用人真皮成纤维细胞体外培养,利用酶联免疫吸附测定方法,结合细胞活性检测,测定对胶原蛋白功能化有重要作用的前胶原C端蛋白酶(BMP-1)在成纤维细胞培养过程中的分泌量,通过考察较佳测定时间、选择稳定的阳性对照品,建立和优化BMP-1的... 采用人真皮成纤维细胞体外培养,利用酶联免疫吸附测定方法,结合细胞活性检测,测定对胶原蛋白功能化有重要作用的前胶原C端蛋白酶(BMP-1)在成纤维细胞培养过程中的分泌量,通过考察较佳测定时间、选择稳定的阳性对照品,建立和优化BMP-1的细胞测试模型。结果显示,紫茉莉花提取物质量浓度为0.05 g/L时,BMP-1含量是对照组的150.4%±8.5%(P<0.001)。紫茉莉花提取物可以显著促进BMP-1的产生,具有促进胶原蛋白功能化的护肤功效。 展开更多

关键词 护肤 前胶原C端蛋白酶 胶原蛋白功能化 人真皮成纤维细胞 紫茉莉

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