大鼠肾小球系膜细胞表达人白细胞介素10 被引量：2

1

作者 李锦华 陈永雄 +1 位作者 刘军 张仕光 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期90-94,共5页

构建表达人白细胞介素１０的逆转录病毒重组体Ｐ（ｈＩＬ－１０）ＳＮ，经ＰＡ３１７细胞包装，Ｇ４１８筛选，用重组逆转录病毒感染大鼠肾小球系膜细胞，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＥＦＩＳＡ... 构建表达人白细胞介素１０的逆转录病毒重组体Ｐ（ｈＩＬ－１０）ＳＮ，经ＰＡ３１７细胞包装，Ｇ４１８筛选，用重组逆转录病毒感染大鼠肾小球系膜细胞，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＥＦＩＳＡ检测ｈＩＬ－１０基因的整合和表达．结果显示外源性ｈＩＬ－１０基因已整合到靶细胞染色体ＤＮＡ并有效地表达，高峰在第３天，为每天每个细胞１．８４３×１０－３ｎｇ。 展开更多

关键词 基因转移 逆转录病毒载体 人白细胞介素10基因 大鼠肾小球系膜细胞

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重组人白细胞介素10基因的克隆及其在真核细胞中的表达 被引量：3

2

作者 卢斌 卢大儒 赵明 《医学研究生学报》 CAS 2007年第8期796-798,805,共4页

目的:克隆编码人白细胞介素10(hIL-10)基因的全长cDNA,构建真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行表达。方法:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出hIL-10 cDNA,将测序正确的hIL-10 cDN... 目的:克隆编码人白细胞介素10(hIL-10)基因的全长cDNA,构建真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中进行表达。方法:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出hIL-10 cDNA,将测序正确的hIL-10 cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3构建重组表达载体。采用磷酸钙法转染CHO细胞,用ELISA法检测hIL-10基因的表达,用单四唑(MTT)检测hIL-10蛋白的活性。结果:RT-PCR产物插入Teasy载体,经序列测定证实hIL-10基因全序列克隆成功。在CHO细胞培养上清中有hIL-10的表达,该产物能抑制淋巴细胞转化。结论:成功构建了真核表达质粒pcDNA3-hIL-10,为进一步研究hIL-10在自身免疫、移植免疫及炎症性疾病中的作用打下了基础。 展开更多

关键词 人白细胞介素10 克隆 基因表达

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重组人白细胞介素10对角朊细胞增殖及产生细胞因子的影响 被引量：1

3

作者 陈飞虎 陈敏珠 +2 位作者 李俊 汪光宝 智强 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第12期1377-1380,共4页

目的 :研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对无血清培养的角朊细胞增殖和产生细胞因子的影响 ,探讨其治疗银屑病的作用机制。方法 :用四甲基偶氮唑蓝比色法 (MTT)测定其对细胞增殖的影响 ;小鼠胸腺细胞增殖法检测白细胞介素 1(IL 1) ;E... 目的 :研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对无血清培养的角朊细胞增殖和产生细胞因子的影响 ,探讨其治疗银屑病的作用机制。方法 :用四甲基偶氮唑蓝比色法 (MTT)测定其对细胞增殖的影响 ;小鼠胸腺细胞增殖法检测白细胞介素 1(IL 1) ;ELISA法检测白细胞介素 6 (IL 6 )、白细胞介素 8(IL 8)。结果 :重组人白细胞介素 10抑制角朊细胞增殖与IL 1、IL 6及IL 8的分泌 ,并呈剂量依赖关系。结论 :重组人白细胞介素 10抑制角朊细胞与细胞因子分泌 ,可能是治疗银屑病的作用机理之一。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素10 角朊细胞 细胞因子 银屑病

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重组人白细胞介素10单克隆抗体的制备 被引量：2

4

作者 陈飞虎 盛晓蓉 +2 位作者 吴亦伦 陈敏珠 智强 《安徽医科大学学报》 CAS 2000年第2期104-106,共3页

目的　制备重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )单克隆抗体。方法　应用鼠 鼠杂交瘤技术建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系 ,ELISA检测杂交瘤细胞培养上清、腹水效价 ,双向免疫扩散试验进行亚类鉴定 ,Giemsa染色镜下计数杂交瘤染色体数目... 目的　制备重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )单克隆抗体。方法　应用鼠 鼠杂交瘤技术建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系 ,ELISA检测杂交瘤细胞培养上清、腹水效价 ,双向免疫扩散试验进行亚类鉴定 ,Giemsa染色镜下计数杂交瘤染色体数目。结果　获得了 2株能分泌抗rhIL 10单克隆抗体的杂交瘤细胞系 (1D3、2A3) ,无血清培养液效价为 1∶5 12、1∶2 5 6 ,腹水效价 1∶10 5、1∶10 4 。单克隆抗体为IgG2 亚类 ,染色体数目 98～ 10 3条。 2株杂交瘤细胞体外传代培养6个月以上 ,ELISA检测抗体滴度无明显降低。结论　制备的 2株单克隆抗体效价高 。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素10 单克隆抗体 杂交瘤

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人白细胞介素10 cDNA重组质粒在细胞和大鼠体内的转染和表达

5

作者 王单松 靳大勇 +4 位作者 吴肇汉 邹卫国 许德华 郑仲承 刘新垣 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期431-433,448,共4页

目的研究人白细胞介素10(hIL-10)cDNA重组质粒的转染和表达,为以后的基因治疗研究奠定基础。方法构建hIL-10 cDNA真核表达重组质粒pcDNA3-hIL-10后进行酶切和测序鉴定。以SA脂质体介导对照质粒pcDNA3及重组质粒pcDNA3-hIL-10转染COS7细... 目的研究人白细胞介素10(hIL-10)cDNA重组质粒的转染和表达,为以后的基因治疗研究奠定基础。方法构建hIL-10 cDNA真核表达重组质粒pcDNA3-hIL-10后进行酶切和测序鉴定。以SA脂质体介导对照质粒pcDNA3及重组质粒pcDNA3-hIL-10转染COS7细胞和SD大鼠,用ELISA方法检测COS7细胞培养液及大鼠胰腺、肺和肝脏组织中hIL-10的含量。结果用pcDNA3-hIL-10质粒转染COS7细胞48 h后,在培养液中检测到hIL-10蛋白浓度为38 000 pg／mL,而对照组仅为55 pg／mL。hIL-10基因转染24 h后大鼠胰腺、肺和肝脏组织hIL-10的产生量达到峰值,以后逐渐下降,至96 h仍显著高于对照组(P<0．05),1周后降至正常水平。结论本研究构建的pcDNA3-hIL-10重组质粒可以在真核细胞及大鼠体内高效表达。 展开更多

关键词 人白细胞介素10 脂质体 重组质粒

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重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

6

作者 井申荣 邹全明 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期125-125,共1页

关键词 重组人白细胞介素10 毕赤酵母 表达 生物学活性 免疫调节细胞因子

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人白细胞介素-10质粒转染抑制RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞

7

作者 郭建斌 马守治 +2 位作者 赵欣 陈江 闫福华 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第7期640-643,647,共5页

目的:探讨人白细胞介素-10(human interlenkin-10,hIL-10)质粒转染后的表达产物对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响。方法:将hIL-10及相应的空载体质粒在脂质体介导下转染293T细胞,获取含hIL-10蛋白的培养液;通过TRAP染色及骨吸收实验观... 目的:探讨人白细胞介素-10(human interlenkin-10,hIL-10)质粒转染后的表达产物对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响。方法:将hIL-10及相应的空载体质粒在脂质体介导下转染293T细胞,获取含hIL-10蛋白的培养液;通过TRAP染色及骨吸收实验观察转染产物对RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞的影响。结果:hIL-10质粒脂质体法瞬时转染293T及RAW264.7细胞获得成功,部分细胞发出绿色荧光,ELISA检测表明目的基因获得表达,RAW264.7细胞在RANKL诱导下可形成破骨细胞样细胞,在该培养体系中加入含hIL-10蛋白的培养液上清,TRAP染色阳性细胞及骨吸收陷窝面积显著减少(P<0.05)。结论:本实验所采用的hIL-10质粒可以成功转染293T及RAW264.7细胞,产生的hIL-10蛋白在体外具有抑制破骨细胞形成和骨吸收的生物学功能。 展开更多

关键词 人白细胞介素-10 转染 破骨细胞 脂质体

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重组人白细胞介素-10对银屑病患者外周血单个核细胞的作用

8

作者 陈英 智强 朱年春 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2000年第4期353-355,共3页

关键词 重组人白细胞介素-10 银屑病 外周血单个核细胞

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rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响 被引量：1

9

作者 欧阳平 孟素荣 +4 位作者 刘彦波 许顶立 赖文岩 彭立胜 徐安龙 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期50-52,共3页

目的观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测... 目的观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果TNF-α对NIH/3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH/3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下,一定剂量的rhIL-10可抑制NIH/3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH/3T3细胞大部分处于G0/G1期。结论rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。 展开更多

关键词 RHIL-10 肿瘤坏死因子-Α 血管外膜 成纤维细胞 重组人白细胞介素-10 细胞增殖

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重组hIL-10在毕赤酵母X-33的表达及其生物活性鉴定 被引量：17

10

作者 陈富超 孙万邦 +4 位作者 封建凯 杜联峰 黄俊琼 罗军敏 宋明英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期691-695,共5页

目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础。方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达... 目的:用毕赤酵母表达hIL-10并探索合适的表达条件,为IL-10生物制品研发及临床应用奠定基础。方法:以0.5%甲醇诱导酵母X-33表达rhIL-10,用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定rhIL-10,比较不同温度、不同pH值和有无PMSF条件下rhIL-10的表达水平。用ELISA法测定培养液rhIL-10含量,用Bradford法测定培养液总蛋白含量,计算rhIL-10占总蛋白的比例。以淋巴细胞转化试验分析rhIL-10的生物学活性。结果:SDS-PAGE后可见42 kD左右蛋白条带;Western blot也检测到42kD左右特异性蛋白质条带。pH值为6.0、温度在28℃并加入抑制剂时rhIL-10表达量最高值为20 mg/L,同时段培养液中总蛋白质含量为50 mg/L,rhIL-10占总蛋白比例为40%。在外周血淋巴细胞转化试验中,rhIL-10抑制了淋巴细胞的增殖。结论:hIL-10能在毕赤酵母高效表达,表达产物有较好生物活性;发酵条件对rhIL-10的表达水平影响大,改善发酵条件能促进rhIL-10的表达。 展开更多

关键词 人白细胞介素10 毕赤酵母 细胞增殖 淋巴细胞转化试验

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重组hIL-10抗家兔皮肤移植反应中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化

11

作者 李佳 孙万邦 +4 位作者 吕岩岩 戴小波 张磊 王胜香 罗军敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1123-1128,共6页

目的:检测家兔皮肤移植经rhIL-10作用后,血清中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化,探讨CC、IL-8/CXCL8趋化因子在rhIL-10抗免疫排斥机制中的作用。方法:皮肤移植家兔分6组:①rhIL-10低剂量,②rhIL-10高剂量,③CsA低剂量,④CsA高剂量,⑤rhIL-... 目的:检测家兔皮肤移植经rhIL-10作用后,血清中CC、IL-8/CXCL8趋化因子的变化,探讨CC、IL-8/CXCL8趋化因子在rhIL-10抗免疫排斥机制中的作用。方法:皮肤移植家兔分6组:①rhIL-10低剂量,②rhIL-10高剂量,③CsA低剂量,④CsA高剂量,⑤rhIL-10+CsA低剂量联合和⑥生理盐水组;每只家兔均于术前1天开始肌注给药,连续注射10天;各组分别于术前1天、术后1、4、7、14、21、28天取外周血,分离血清,以ELISA法检测移植家兔血清CC、IL-8/CXCL8趋化因子水平。结果:(1)术后各组IL-8水平均升高,术后4天、7天⑥组IL-8水平高于各组(P<0.05)。(2)术后各组MCP-1水平明显升高,术后1天、4天,⑥组MCP-1水高于各组(P<0.05),术后7天⑥组MCP-1水平高于①组、⑤组(P<0.05);术后7天、14天CsA抑制组高于联合组(P<0.05)。(3)术后各组MIP-1α明显升高,术后4天⑥组MIP-1α水平高于①、③、⑤组,术后7天⑥组MIP-1α水平高于各组(P<0.05);(4)术后各组MIP-1β水平升高,但同时间段组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CC、IL-8/CXCL8趋化因子在皮肤移植后明显升高,表明在急性排斥反应中发挥了重要作用,随排斥反应加重而进一步增高,皮片排斥后下降,可作为观察和诊断移植排斥的合适标志物。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素10 皮肤移植 趋化因子

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rhIL-10对银屑病动物模型的治疗作用及免疫功能的影响 被引量：7

12

作者 陈飞虎 陈敏珠 +1 位作者 李俊 智强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期333-336,共4页

目的　研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对银屑病动物模型的治疗作用以及免疫功能的影响。方法　用小鼠雌激素期阴道上皮模型、鼠尾鳞片表皮模型观察重组人白细胞介素 10的抗银屑病作用 ,并检测ConA诱导T淋巴细胞增殖、LPS诱导B淋... 目的　研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对银屑病动物模型的治疗作用以及免疫功能的影响。方法　用小鼠雌激素期阴道上皮模型、鼠尾鳞片表皮模型观察重组人白细胞介素 10的抗银屑病作用 ,并检测ConA诱导T淋巴细胞增殖、LPS诱导B淋巴细胞增殖、NK细胞活性及细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 1、TNF α)水平。结果　rhIL 10 (5 ,2 0 ,80μg·kg-1·d-1,sc)对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂有抑制作用 ,促进小鼠尾鳞片颗粒层的形成。对ConA诱导T淋巴细胞增殖反应及IL 2、IFN γ产生有抑制作用 ;对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生IL 1、TNF α具有抑制作用 ;对NK细胞活性有抑制作用 ;对LPS诱导B淋巴细胞增殖有促进作用。结论　rhIL 10可能是通过抑制表皮细胞增殖与促进其分化 。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素-10 银屑病 动物模型 免疫 细胞因子

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hIL-10在大肠杆菌中的表达及其生物学活性鉴定

13

作者 王旻东 孙自勇 +3 位作者 陈俊勇 吴盛 智强 刘建宁 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期62-65,共4页

构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用I... 构建了含有人白细胞介素-hIL-10(Human Interleuk in 10,hIL-10)基因的重组质粒,在大肠杆菌中的高效表达,并对其生物学活性进行了鉴定.用RT-PCR扩增hIL-10 cDNA,并插入原核表达载体PET-32b.将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞,在37℃用IPTG诱导hIL-10表达.表达的重组蛋白经复性纯化后,用夹心ELISA法检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用.重组质粒PET-32b/hIL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列和文献报道的hIL-10 cDNA序列一致.SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18 000.活性测定结果显示,重组蛋白能显著抑制PBMC合成IFN-γ.这表明构建的PET-32b/hIL-10可以在大肠杆菌中高效表达,经复性和纯化后,获得了具有高纯度和活性的hIL-10. 展开更多

关键词 人白细胞介素-10(hIL-10) 克隆 表达 大肠杆菌 生物学活性 夹心ELISA

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