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重组人白细胞介素-35的真核表达及生物活性 被引量:1
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作者 马娟 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期618-622,共5页
目的构建重组人白细胞介素-35[rhIL-35-IgG1(Fc)]蛋白的真核表达载体并表达纯化该蛋白,研究IL-35与其受体糖蛋白130(gp130)的结合作用。方法构建IL-35真核表达载体pSTEP2-IL35-LFc,转染到HEK293T细胞中,采用亲和色谱分离纯化获得重组IL... 目的构建重组人白细胞介素-35[rhIL-35-IgG1(Fc)]蛋白的真核表达载体并表达纯化该蛋白,研究IL-35与其受体糖蛋白130(gp130)的结合作用。方法构建IL-35真核表达载体pSTEP2-IL35-LFc,转染到HEK293T细胞中,采用亲和色谱分离纯化获得重组IL-35蛋白,SDS-PAGE及Western blot法鉴定蛋白表达,ELISA法检测IL-35-Fc与其受体链gp130的结合作用,并在M1小鼠白血病细胞上研究IL-35对gp130的生物学作用。结果获得高纯度的人IL-35-Fc重组蛋白,ELISA法检测结果发现IL-35-Fc与其受体链gp130具有结合作用,并且IL-35在M1小鼠白血病细胞上对gp130具有中和作用。结论成功制备了具有生物活性的人IL-35-IgG1(Fc)重组蛋白,发现IL-35能够与其受体链gp130的结合,在M1小鼠白血病细胞上对gp130也具有中和作用。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-35 糖蛋白130 M1小鼠白血病细胞
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KIH结构在人白介素-35体外重组表达中的应用 被引量:1
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作者 张凯跃 李宗艳 +4 位作者 曹瑞晴 孟琳琳 胡祥维 顾玉超 王建刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期857-866,共10页
白细胞介素35(interleukin-35,IL-35)是非常重要的免疫抑制性细胞因子,被证实在多种疾病的免疫应答中发挥作用。本研究通过克隆人IL-35基因编码序列,构建单亚基表达载体pXC17.4-p35和pcDNA3.1(+)-EBI3,共转染CHO-K1细胞体外表达IL-35,... 白细胞介素35(interleukin-35,IL-35)是非常重要的免疫抑制性细胞因子,被证实在多种疾病的免疫应答中发挥作用。本研究通过克隆人IL-35基因编码序列,构建单亚基表达载体pXC17.4-p35和pcDNA3.1(+)-EBI3,共转染CHO-K1细胞体外表达IL-35,经检测未发现p35亚基与EBI3亚基的结合。Knobs-into-Holes(KIH)可解决异源抗体重链错配的问题,因此,在原始序列的基础上融合KIH结构构建表达载体pXC17.4-p35-Fch和pcDNA3.1(+)-EBI3-Fck来表达KIH-IL-35重组融合蛋白质;同时交换2个亚基的表达载体来验证不同表达载体对KIH-IL-35表达量的影响。经过多种蛋白质检测方法的分析,显示KIH-IL-35结构的正确表达率明显提高。大量表达后对KIH-IL-35进行亲和纯化,采用ELISA法检测纯化后的KIH-IL-35与糖蛋白130(gp130)分子的结合活性,结果表明,KIH-IL-35与gp130的结合呈浓度依赖性。采用细胞活性检测方法检测KIH-IL-35与M1细胞的间接活性,结果表明,M1细胞的抑制率与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。此外,本研究成功建立了一种利用激活的人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对IL-35进行活性检测的方法,结果显示,激活的PBMCs与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长。总之,本研究利用KIH-IL-35模型,提高了重组人IL-35的正确表达率,并验证其在体外的高活性,为IL-35的研究及类似异源二聚体细胞因子的重组表达提供新思路。 展开更多
关键词 人白细胞介素-35 Knobs-into-Holes 融合蛋白质 多聚体
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