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癌胚抗原重组痘病毒治疗CEA阳性肿瘤的机制及其CEA基因表达的研究
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作者 赵青 陶沙 +1 位作者 杨洁 罗超权 《广州医学院学报》 2002年第2期1-4,共4页
目的 :探讨癌胚抗原重组痘病毒 (carcinoembryonicantigenrecombinantvacciniavirus,CEA -rV)治疗CEA阳性肿瘤的作用部位及其CEA基因表达的情况。方法 :采用PCR法探测CEA rV的作用部位 ,RT -PCR检测接种CEA -rV鼠腹腔MΦ 内CEA的基因表... 目的 :探讨癌胚抗原重组痘病毒 (carcinoembryonicantigenrecombinantvacciniavirus,CEA -rV)治疗CEA阳性肿瘤的作用部位及其CEA基因表达的情况。方法 :采用PCR法探测CEA rV的作用部位 ,RT -PCR检测接种CEA -rV鼠腹腔MΦ 内CEA的基因表达 ,免疫组化法检测各组小鼠腹腔MΦCEA的蛋白表达。结果 :腹腔接种的CEA -rV主要感染腹腔MΦ;皮下接种的CEA -rV主要感染皮肤局部组织。CEA -rV腹腔接种小鼠 ,其腹腔MΦ有CEAmRNA表达及CEA蛋白表达。结论 :推测无论通过腹腔接种还是通过皮肤局部接种 ,GEA -rV一般多在注射局部表达。CEA -rV不仅可以进入MΦ,而且其CEA基因可以有效地表达 ,并可使MΦ 表面分子MHC -Ⅱ与B7- 2表达增强 ,然后递呈CEA给Th淋巴细胞 ,使之分泌足够的IL - 2 ,激活Tc细胞分化为CTL 。 展开更多
关键词 癌胚抗原 重组痘苗病毒 作用部位 基因表达 治疗
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重组痘苗病毒载体研究进展 被引量:6
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作者 张仁舟 杨松涛 夏咸柱 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第1期57-61,共5页
通过同源重组将外源基因插入到痘苗病毒基因组内,以痘苗病毒为载体使外源基因在动物细胞内表达以获得目的蛋白,从而达到免疫接种的目的。痘苗病毒有宿主范围广、允许插入外源基因片段长、可通过多种途径进行接种、能诱导体液和细胞免疫... 通过同源重组将外源基因插入到痘苗病毒基因组内,以痘苗病毒为载体使外源基因在动物细胞内表达以获得目的蛋白,从而达到免疫接种的目的。痘苗病毒有宿主范围广、允许插入外源基因片段长、可通过多种途径进行接种、能诱导体液和细胞免疫反应及易于增殖生产等优点,在疫苗研制中得到了广泛的应用。以痘苗病毒作为载体表达狂犬病病毒糖蛋白研制成的狂犬病疫苗已经在野生动物狂犬病控制中发挥了巨大的作用,用痘苗病毒研制的艾滋病病毒疫苗也已经进入了临床试验。 展开更多
关键词 重组痘苗病毒 活载体疫苗 应用
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巨细胞病毒嵌合癌胚抗原介导单纯疱疹病毒胸苷激酶联合丙氧鸟苷自杀基因体系靶向性治疗结肠癌的效果 被引量:1
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作者 王成兴 曾山崎 +4 位作者 杨平 张通 魏建昌 陈华翠 曹杰 《中国医药导报》 CAS 2015年第17期13-15,23,共4页
目的观察巨细胞病毒(CMV)嵌合以癌胚抗原为启动子,以腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因重组构建体Ad-CMV-CEA-HSV/TK联合丙氧鸟苷(GCV)体内抗结肠癌的疗效。方法构建人结肠癌裸鼠移植瘤模型,按不同浓度梯度Ad-CMV-CEA-HSV/TK(1.0&... 目的观察巨细胞病毒(CMV)嵌合以癌胚抗原为启动子,以腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因重组构建体Ad-CMV-CEA-HSV/TK联合丙氧鸟苷(GCV)体内抗结肠癌的疗效。方法构建人结肠癌裸鼠移植瘤模型,按不同浓度梯度Ad-CMV-CEA-HSV/TK(1.0×109/kg、5.0×109/kg、10.0×109/kg)经尾静脉注射带瘤小鼠后,腹腔注射相同浓度GCV(50 mg/kg),并设空白对照组及不同浓度的Ad-CEA-HSV/TK/GCV对照(1.0×109/kg、5.0×109/kg、10.0×109/kg),共设A^G 7组,每组各10只小鼠。观察肿瘤体积、重量、肿瘤体积-时间曲线、肿瘤抑制率及生存期。结果 Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV及Ad-CEA-HSV/TK/GCV对人结肠癌裸鼠移植瘤生长均具有抑制作用,对移植瘤的体积及重量抑制呈作用物浓度依赖性;且Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV抑制能力较Ad-CEAHSV/TK/GCV显著,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ad-CMV-CEA-HSV/TK/GCV体系对结肠癌具有明确的实验性治疗作用,为人结肠癌及结肠癌远处转移灶的Ⅰ期临床治疗试验提供科学实验依据,具有广阔的临床应用前景。 展开更多
关键词 结肠癌 基因治疗 巨细胞病毒 重组病毒 癌胚抗原
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HIV-2 env 基因在重组痘苗病毒中的表达
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作者 田梅 金宁一 +4 位作者 王秀清 郭志儒 方厚华 范洪学 殷震 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第4期48-52,共5页
以痘苗病毒复制非必需区血凝素(HA)基因为侧翼,将人Ⅱ型免疫缺陷病毒gp120和gp36基因分别置于不同类型的自然型痘苗病毒复合启动子下游,构建了4种表达质粒,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选,获得了4株重组痘苗病毒,... 以痘苗病毒复制非必需区血凝素(HA)基因为侧翼,将人Ⅱ型免疫缺陷病毒gp120和gp36基因分别置于不同类型的自然型痘苗病毒复合启动子下游,构建了4种表达质粒,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选,获得了4株重组痘苗病毒,经免疫荧光试验和Westernblot检测证明,4株重组病毒均能表达目的蛋白。在重组病毒感染早期、晚期,不同株表达量略有不同,表达产物分子量分别约为57kDa和42kDa,具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 HIV-2 ENV基因 重组痘苗病毒 表达
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汉滩病毒S基因-重组痘苗病毒的制备和表达鉴定
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作者 王平忠 白雪帆 +1 位作者 张颖 陈红梅 《医学研究生学报》 CAS 2004年第1期18-20,24,共4页
目的 :制备和鉴定汉滩病毒 (HTNV)S基因 重组痘苗病毒 ,为进一步建立肾综合征出血热 (HFRS)患者HTNV核衣壳蛋白特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)的靶细胞奠定基础。 方法 :用野生型痘苗病毒和HTNVS基因 重组痘苗病毒分别感染Vero细胞 ,进... 目的 :制备和鉴定汉滩病毒 (HTNV)S基因 重组痘苗病毒 ,为进一步建立肾综合征出血热 (HFRS)患者HTNV核衣壳蛋白特异性细胞毒T淋巴细胞 (CTL)的靶细胞奠定基础。 方法 :用野生型痘苗病毒和HTNVS基因 重组痘苗病毒分别感染Vero细胞 ,进行病毒扩增和滴度测定。用PCR和斑点杂交鉴定重组痘苗病毒基因组中的HTNVS基因 ,用间接免疫荧光和westernblot检测核衣壳蛋白的表达。 结果 :制备了含HTNVS基因的重组痘苗病毒 ,滴度为 4 .0 2× 10 7。该重组痘苗病毒基因组中存在HTNVS基因 ,它在Vero细胞中能有效地表达核衣壳蛋白。 结论 :制备了较高滴度、能有效表达HTNV核衣壳蛋白的重组痘苗病毒。 展开更多
关键词 汉滩病毒 S基因 核衣壳蛋白 重组痘苗病毒 肾综合征出血热
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两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗对Lovo细胞的体外杀伤作用 被引量:2
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作者 刘季芳 祁岩超 +3 位作者 杨波 卢敏莹 潘东晓 申鸿卓 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第7期78-79,共2页
目的比较重组痘苗病毒负载人癌胚抗原(CEA)基因转染方式与Lovo细胞裂解物诱导方式对产生DC疫苗的影响。方法分别采用重组痘苗病毒负载CEA基因转染方式及Lovo肿瘤细胞裂解物转染方式转染未成熟DC,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。体... 目的比较重组痘苗病毒负载人癌胚抗原(CEA)基因转染方式与Lovo细胞裂解物诱导方式对产生DC疫苗的影响。方法分别采用重组痘苗病毒负载CEA基因转染方式及Lovo肿瘤细胞裂解物转染方式转染未成熟DC,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。体外培养CTL并检测其活性;MTT法检测两组CTL对Lovo细胞的杀伤作用。结果两种方式致敏DC均可诱导激活CTL并分泌INF-γ,而重组痘苗病毒转染DC组CTL诱导率高于细胞裂解物组;重组痘苗病毒转染组诱导的CTL对Lovo细胞的特异性杀伤活性显著高于细胞裂解物组。结论两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗均能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性,而使用重组痘苗病毒转染CEA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,为DC疫苗用于结肠癌的免疫治疗奠定基础。 展开更多
关键词 树突状细胞 人癌胚抗原重组痘苗病毒 细胞毒性T淋巴细胞
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CEA-rV对巨噬细胞抗原提呈功能的影响 被引量:2
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作者 赵青 苑利伟 +2 位作者 陶莎 杨洁 罗超权 《广州医学院学报》 2002年第1期4-7,共4页
目的:探讨 CEA-rV对巨噬细胞抗原提呈功能的影响。方法:采用混合淋巴细胞反应(MLR)检测 Mφ的抗原提呈功能,采用流式细胞仪(FCM)检测Mφ表面分子MHC-Ⅰ(H-2Kb)、MHC-Ⅱ(Ⅰ-Ab)及B7(B7-2)的表达,采... 目的:探讨 CEA-rV对巨噬细胞抗原提呈功能的影响。方法:采用混合淋巴细胞反应(MLR)检测 Mφ的抗原提呈功能,采用流式细胞仪(FCM)检测Mφ表面分子MHC-Ⅰ(H-2Kb)、MHC-Ⅱ(Ⅰ-Ab)及B7(B7-2)的表达,采用荧光抗体直接染色法检测肿瘤细胞表面H-2Kb、Ⅰ-Ab的表达。结果:CEA-rV接种小鼠腹腔Mφ组(CEA-rVMφ组)T细胞分泌IL-2的水平较W-VV及VS组显著增强(P<0.01),小鼠腹腔Mφ自身表达的Ⅰ-Ab和B7-2分子较低(分别为41.7%,13.7%),接种W-VV后其Ⅰ-Ab及B7-2分子表达改变不明显(分别为44.3%,15.l%),而接种 CEA-rV后其Ⅰ-Ab及 B7-2分子表达明显增强(分别为 87.2%,39.5%)。各组CEA阳性肿瘤细胞表面分子MHC-Ⅰ强表达,却没有 MHC-Ⅱ表达。结论:CEA-rV腹腔接种 Mφ可使 Mφ抗原提呈功能显著增强,Mφ的表面分子MHC-Ⅱ与B7-2表达增强可能是其抗原提呈功能增强的主要原因。提示MHC-Ⅱ与B7-2可能在CEA-rV抗瘤中发挥重要作用。 展开更多
关键词 癌胚抗原 重组痘苗病毒 巨噬细胞 抗原提呈功能 CEA-RV 肿瘤细胞
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表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选 被引量:1
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作者 黄彩云 赵志荀 +5 位作者 朱学亮 王战红 吴香草 吴国华 张志东 张强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2079-2087,共9页
为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重... 为了构建及筛选表达绿色荧光蛋白(GFP)的改良型痘苗病毒安卡拉(MVA)重组毒株,并对其进行鉴定,本研究基于同源重组原理设计引物,通过PCR扩增获取含有MVA两侧同源臂的外源基因GFP片段,将GFP基因片段转染到感染了MVA的CEF细胞中使之同源重组到MVA ORF086-087位点(基因组中70303-70304 bp之间),利用倒置荧光显微镜观察并标记表达GFP的单个噬斑,筛选获取重组毒株,应用倒置荧光技术、PCR及Western blotting对该重组毒株进行鉴定。结果显示,经过3轮噬斑筛选,在倒置荧光显微镜下可观察到大量表达GFP的单个噬斑,PCR扩增检测结果表明目的基因已成功整合到重组毒株MVA-GFP中。Western blotting结果表明,GFP在感染的细胞内成功表达。本研究利用基因工程技术成功获得表达GFP的重组毒株MVA-GFP,可为进一步将其他抗原基因插入GFP位点中筛选无标记的重组毒株及疫苗研究提供材料。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 痘苗病毒MVA株 重组毒株
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