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人生长激素释放激素受体剪接变异体1型对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
被引量：
3
1
作者
林玉茵
陈文生
+3 位作者
郭晓兰
谭茵
贺小松
戴建威
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期474-478,共5页
目的:探讨人生长激素释放激素受体剪接变异体1型(GHRHR SV1)对肝癌细胞系HepG2增殖的影响,阐明GHRHR SV1对人肿瘤细胞的促增殖作用。方法:将GHRHR SV1真核表达载体导入HepG2细胞建立HepG2-SV1细胞系。设计对照组(野生型HepG2)、空载质粒...
目的:探讨人生长激素释放激素受体剪接变异体1型(GHRHR SV1)对肝癌细胞系HepG2增殖的影响,阐明GHRHR SV1对人肿瘤细胞的促增殖作用。方法:将GHRHR SV1真核表达载体导入HepG2细胞建立HepG2-SV1细胞系。设计对照组(野生型HepG2)、空载质粒组(HepG2-pCDNA 3.0细胞系)和干扰组(HepG2-SV1细胞系)。采用PCR和Western blotting法鉴定HepG2-SV1细胞系,CCK-8法检测各组细胞的增殖率,克隆形成实验检测各组细胞的单克隆形成率,细胞划痕实验检测细胞的迁移率。结果:PCR与Western blotting法检测,构建的HepG2-SV1细胞系能稳定表达GHRHR SV1;CCK-8法检测,干扰组HepG2-SV1细胞系的增殖率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05);克隆形成实验,干扰组HepG2-SV1细胞系的单克隆形成率约为空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系的3.5倍(P<0.05);细胞划痕实验,所构建的干扰组HepG2-SV1细胞系的迁移率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05)。结论:GHRHR SV1能促进HepG2细胞的增殖。
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关键词
人生长激素释放激素受体剪接变异体1型
HEPG2细胞
细胞增殖
克隆形成率
迁移率
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职称材料
GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达
被引量：
2
2
作者
郭晓兰
谭茵
+2 位作者
陈文生
林玉茵
戴建威
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1237-1242,共6页
目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR...
目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG);诱导1、2、4和6h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果:重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1∶1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论:成功制备pETGHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)、诱导时间为2h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。
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关键词
生长激素
释放
激素
受体
剪接
变
异体
1
重组载体
重组蛋白
抗体
黑色素瘤
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职称材料
题名
人生长激素释放激素受体剪接变异体1型对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
被引量：
3
1
作者
林玉茵
陈文生
郭晓兰
谭茵
贺小松
戴建威
机构
广州医科大学生命科学学院生物技术系
广州医科大学基础学院人体解剖学教研室
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第3期474-478,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(81501014)
广东省科技厅自然科学基金资助课题(2016A030313601)
广东省广州市科技局科技计划项目资助课题(201510010076)
文摘
目的:探讨人生长激素释放激素受体剪接变异体1型(GHRHR SV1)对肝癌细胞系HepG2增殖的影响,阐明GHRHR SV1对人肿瘤细胞的促增殖作用。方法:将GHRHR SV1真核表达载体导入HepG2细胞建立HepG2-SV1细胞系。设计对照组(野生型HepG2)、空载质粒组(HepG2-pCDNA 3.0细胞系)和干扰组(HepG2-SV1细胞系)。采用PCR和Western blotting法鉴定HepG2-SV1细胞系,CCK-8法检测各组细胞的增殖率,克隆形成实验检测各组细胞的单克隆形成率,细胞划痕实验检测细胞的迁移率。结果:PCR与Western blotting法检测,构建的HepG2-SV1细胞系能稳定表达GHRHR SV1;CCK-8法检测,干扰组HepG2-SV1细胞系的增殖率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05);克隆形成实验,干扰组HepG2-SV1细胞系的单克隆形成率约为空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系的3.5倍(P<0.05);细胞划痕实验,所构建的干扰组HepG2-SV1细胞系的迁移率高于空载质粒组HepG2-pcDNA3.0细胞系(P<0.05)。结论:GHRHR SV1能促进HepG2细胞的增殖。
关键词
人生长激素释放激素受体剪接变异体1型
HEPG2细胞
细胞增殖
克隆形成率
迁移率
Keywords
human growth hormone releasing hormone receptor splice variant type
1
~ HepG2 cells~ cellproliferation~ colony formation rater migration rate
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达
被引量：
2
2
作者
郭晓兰
谭茵
陈文生
林玉茵
戴建威
机构
广州医科大学生物学实验中心
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期1237-1242,共6页
基金
国家自然科学基金资助课题(31271476)
广东省广州市科技局科技计划项目资助课题(20150010076)
+1 种基金
广东省教育厅人才项目资助课题(2013KJCX0155)
广东省自然科学基金资助课题(2016A030313601)
文摘
目的:制备生长激素释放激素受体剪接变异体1(GHRHR-SV1)抗体,并检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞中的表达情况,为后续的肿瘤机制研究奠定基础。方法:设计GHRHR-SV1基因序列,将其插入质粒pET-32a(+)中,构建pET-GHRHR-SV1重组载体,经PCR及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,分别加入0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG);诱导1、2、4和6h,并在37℃、30℃和25℃不同温度下进行诱导;观察目的蛋白表达的最佳IPTG浓度、时间和温度。亲和层析纯化重组蛋白,将纯化后的蛋白免疫家兔,制备兔多克隆抗体,ELISA法检测该抗体效价,Western blotting法检测GHRHR-SV1蛋白在黑色素瘤细胞系B16-F10中的表达情况。结果:重组载体pET-GHRHR-SV1构建成功。在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)时目的蛋白的表达量最高;IPTG诱导蛋白表达2h时,蛋白表达量最大;当温度为25℃时,蛋白的表达量最大。诱导表达的蛋白相对分子质量约为24 000,纯化后纯度为80%,GHRHR-SV1抗体效价为1∶1 600 000,B16-F10细胞中有GHRHR-SV1蛋白表达。结论:成功制备pETGHRHR-SV1重组载体。GHRHR-SV1蛋白在IPTG浓度为2.0mmol·L^(-1)、诱导时间为2h和温度为25℃的条件下表达最佳。成功制备了高效价的GHRHR-SV1抗体。黑色素瘤细胞系中有GHRHR-SV1蛋白表达。
关键词
生长激素
释放
激素
受体
剪接
变
异体
1
重组载体
重组蛋白
抗体
黑色素瘤
Keywords
growth hormone-releasing hormone receptor splice variant
1
recombinant vector
recombinant protein
antibody
melanoma
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人生长激素释放激素受体剪接变异体1型对人肝癌细胞HepG2增殖的影响
林玉茵
陈文生
郭晓兰
谭茵
贺小松
戴建威
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
GHRHR-SV1抗体的制备及其蛋白在黑色素瘤细胞中的表达
郭晓兰
谭茵
陈文生
林玉茵
戴建威
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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