目的探讨人源性激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,KS)对椎间盘髓核细胞的作用及可能机制。方法在正常和退变髓核中检测KS的表达;过氧化氢/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS及H_(2)O_(2)+KS4组,检测各组细胞凋亡和细胞外基质(extr...目的探讨人源性激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,KS)对椎间盘髓核细胞的作用及可能机制。方法在正常和退变髓核中检测KS的表达;过氧化氢/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS及H_(2)O_(2)+KS4组,检测各组细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的变化;利用沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silencing information regulator 2 related enzymeⅠ,SIRT1)小干扰RNA(siRNA-SIRT1)/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC及KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT15组,检测各组髓核细胞凋亡及ECM的表达。结果退变椎间盘髓核中KS的mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常髓核(P<0.05);相比于H_(2)O_(2)组,KS组及H_(2)O_(2)+KS组髓核细胞凋亡率明显降低(P<0.05),凋亡基因Caspase3、Caspase9和Bax mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05),抗凋亡基因Bcl2表达量明显增加(P<0.05);GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan表达显著提高(P<0.05)。当siRNASIRT1敲降髓核细胞SIRT1表达后,相比于Control、KS+H_(2)O_(2)和KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC组,KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT1组凋亡率显著增加,GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan蛋白表达也显著降低(P<0.05)。结论KS可通过诱导SIRT1表达抑制H_(2)O_(2)诱导的人髓核细胞凋亡和ECM降解。展开更多
文摘目的探讨人源性激肽释放酶结合蛋白(kallistatin,KS)对椎间盘髓核细胞的作用及可能机制。方法在正常和退变髓核中检测KS的表达;过氧化氢/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS及H_(2)O_(2)+KS4组,检测各组细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的变化;利用沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silencing information regulator 2 related enzymeⅠ,SIRT1)小干扰RNA(siRNA-SIRT1)/KS处理细胞后分为Control、H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)、KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC及KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT15组,检测各组髓核细胞凋亡及ECM的表达。结果退变椎间盘髓核中KS的mRNA和蛋白的表达水平明显低于正常髓核(P<0.05);相比于H_(2)O_(2)组,KS组及H_(2)O_(2)+KS组髓核细胞凋亡率明显降低(P<0.05),凋亡基因Caspase3、Caspase9和Bax mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.05),抗凋亡基因Bcl2表达量明显增加(P<0.05);GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan表达显著提高(P<0.05)。当siRNASIRT1敲降髓核细胞SIRT1表达后,相比于Control、KS+H_(2)O_(2)和KS+H_(2)O_(2)+siRNA-NC组,KS+H_(2)O_(2)+siRNA-SIRT1组凋亡率显著增加,GAG含量、CollagenⅡ和Aggrecan蛋白表达也显著降低(P<0.05)。结论KS可通过诱导SIRT1表达抑制H_(2)O_(2)诱导的人髓核细胞凋亡和ECM降解。
