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人源抗癌胚抗原单克隆抗体的获得与鉴定
1
作者
赵刚
范健
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1157-1159,共3页
目的:获得抗癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体(mAb)。方法:采用特殊的5轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的人源CEA抗原淘筛本室构建的人源特异性噬菌体抗体库。获得有特异结合活性的CEA噬菌体抗体,酶切鉴定插入的抗体基因...
目的:获得抗癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体(mAb)。方法:采用特殊的5轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的人源CEA抗原淘筛本室构建的人源特异性噬菌体抗体库。获得有特异结合活性的CEA噬菌体抗体,酶切鉴定插入的抗体基因。切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因,构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗CEA抗体Fab段,ELISA、Western blot检测抗体免疫学活性,测序分析抗体基因。结果:筛选出4株与CEA抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体。切去gⅢ基因,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中无统计学意义。可溶性抗体与人CEA抗原有特异结合活性,与BSA、HBsAg无交叉结合反应。Western blot显示在略大于相对分子质量(Mr)45000处有一明显条带,与Mr48000的Fab大小一致。DNA测序分析表明Fab段VH属于IgGVH3基因家族,VL属于Vκ1基因家族。结论:抗CEA噬菌体抗体库的构建和人源抗CEAmAb的制备,为CEA阳性表达肿瘤的靶向治疗奠定基础。
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关键词
噬菌体
抗体
库
癌胚抗原
人源性单克隆抗体
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职称材料
人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1的建立及其在人单克隆抗体制备中的应用
被引量：
3
2
作者
樊代明
张学庸
+2 位作者
陈希陶
乔太东
陈保军
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1989年第1期10-14,共5页
本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单克隆抗体（以下简称人单抗）的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抵抗性,对HAT培基敏感。细胞倍增时间为24～36小时,无人I<sub>?</sub>或其轻重...
本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单克隆抗体（以下简称人单抗）的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抵抗性,对HAT培基敏感。细胞倍增时间为24～36小时,无人I<sub>?</sub>或其轻重链的合成及分泌。目前已传代至136代,细胞中的人染色体稳定。经与人胃痛周围淋巴结的淋巴细胞再次杂交,获得两株人鼠人杂交瘤即HGO<sub>3</sub>和HMG<sub>7</sub>,在体外传代已6个月,抗体分泌稳定。其中HGO<sub>3</sub>分泌抗胃癌的人单抗。HMG<sub>7</sub>是经体外致敏人淋巴细胞与FMC-1融合获得的一株杂交瘤,能分泌针对鼠抗人胃癌单抗MG<sub>7</sub>的人单抗。两株杂交瘤1×10<sup>6</sup>细胞在24小时内的抗体分泌量达25μg～50μg/ml.初步认为FMC-1是一值得推荐用于人单抗制备的种间骨髓瘤细胞系。
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关键词
种间骨髓瘤
细胞系
人源性单克隆抗体
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职称材料
人源性噬菌体抗体库的构建及抗amylin抗体的初步筛选
被引量：
1
3
作者
公倩
李常颖
+1 位作者
畅继武
朱铁虹
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期618-622,共5页
目的:构建人源性噬菌体抗体库,从中筛选胰淀素(amylin)单克隆抗体(mAb),测定其特异性及抗原结合活性。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人免疫球蛋白Fd段和轻链基因,构建噬菌体抗体库。酶切和PCR鉴定后,...
目的:构建人源性噬菌体抗体库,从中筛选胰淀素(amylin)单克隆抗体(mAb),测定其特异性及抗原结合活性。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人免疫球蛋白Fd段和轻链基因,构建噬菌体抗体库。酶切和PCR鉴定后,阳性克隆进行DNA测序分析。用人amylin抗原对抗体库进行筛选富集,将得到的阳性克隆进行Phage-ELISA鉴定,结果进行统计学分析。结果:最终构建的抗体库库容约为0.8×108,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率为70%。阳性克隆进行DNA测序证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因。以amylin抗原进行3轮筛选,抗体库得到特异性富集。阳性克隆进行Phage-ELISA检测证实有良好的抗胰淀素抗原的特异性。结论:成功构建了一个人源性噬菌体抗体库,为从中获得人源抗amylin的mAb奠定了实验基础。
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关键词
噬菌体
抗体
库
胰淀素
人源性单克隆抗体
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职称材料
题名
人源抗癌胚抗原单克隆抗体的获得与鉴定
1
作者
赵刚
范健
机构
东南大学附属中大医院普外科
扬州大学医学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第12期1157-1159,共3页
基金
江苏省应用基础基金资助项目(BK2001008)
文摘
目的:获得抗癌胚抗原(CEA)的单克隆抗体(mAb)。方法:采用特殊的5轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的人源CEA抗原淘筛本室构建的人源特异性噬菌体抗体库。获得有特异结合活性的CEA噬菌体抗体,酶切鉴定插入的抗体基因。切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因,构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗CEA抗体Fab段,ELISA、Western blot检测抗体免疫学活性,测序分析抗体基因。结果:筛选出4株与CEA抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体。切去gⅢ基因,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中无统计学意义。可溶性抗体与人CEA抗原有特异结合活性,与BSA、HBsAg无交叉结合反应。Western blot显示在略大于相对分子质量(Mr)45000处有一明显条带,与Mr48000的Fab大小一致。DNA测序分析表明Fab段VH属于IgGVH3基因家族,VL属于Vκ1基因家族。结论:抗CEA噬菌体抗体库的构建和人源抗CEAmAb的制备,为CEA阳性表达肿瘤的靶向治疗奠定基础。
关键词
噬菌体
抗体
库
癌胚抗原
人源性单克隆抗体
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1的建立及其在人单克隆抗体制备中的应用
被引量：
3
2
作者
樊代明
张学庸
陈希陶
乔太东
陈保军
机构
第四军医大学西京医院消化病研究室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1989年第1期10-14,共5页
文摘
本文报告在国内首次建立的一株能用于制备人源性单克隆抗体（以下简称人单抗）的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1。FMC-1对8-偶氮鸟嘌呤及鸟本苷具有抵抗性,对HAT培基敏感。细胞倍增时间为24～36小时,无人I<sub>?</sub>或其轻重链的合成及分泌。目前已传代至136代,细胞中的人染色体稳定。经与人胃痛周围淋巴结的淋巴细胞再次杂交,获得两株人鼠人杂交瘤即HGO<sub>3</sub>和HMG<sub>7</sub>,在体外传代已6个月,抗体分泌稳定。其中HGO<sub>3</sub>分泌抗胃癌的人单抗。HMG<sub>7</sub>是经体外致敏人淋巴细胞与FMC-1融合获得的一株杂交瘤,能分泌针对鼠抗人胃癌单抗MG<sub>7</sub>的人单抗。两株杂交瘤1×10<sup>6</sup>细胞在24小时内的抗体分泌量达25μg～50μg/ml.初步认为FMC-1是一值得推荐用于人单抗制备的种间骨髓瘤细胞系。
关键词
种间骨髓瘤
细胞系
人源性单克隆抗体
分类号
R371.22 [医药卫生—病原生物学]
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题名
人源性噬菌体抗体库的构建及抗amylin抗体的初步筛选
被引量：
1
3
作者
公倩
李常颖
畅继武
朱铁虹
机构
天津医科大学总医院内分泌科
山东医学高等专科学校内科学教研室
天津医科大学第二医院
天津市泌尿外科研究所肿瘤免疫室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期618-622,共5页
基金
天津市自然科学基金资助项目(05YFMGCO04000)
文摘
目的:构建人源性噬菌体抗体库,从中筛选胰淀素(amylin)单克隆抗体(mAb),测定其特异性及抗原结合活性。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人免疫球蛋白Fd段和轻链基因,构建噬菌体抗体库。酶切和PCR鉴定后,阳性克隆进行DNA测序分析。用人amylin抗原对抗体库进行筛选富集,将得到的阳性克隆进行Phage-ELISA鉴定,结果进行统计学分析。结果:最终构建的抗体库库容约为0.8×108,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率为70%。阳性克隆进行DNA测序证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因。以amylin抗原进行3轮筛选,抗体库得到特异性富集。阳性克隆进行Phage-ELISA检测证实有良好的抗胰淀素抗原的特异性。结论:成功构建了一个人源性噬菌体抗体库,为从中获得人源抗amylin的mAb奠定了实验基础。
关键词
噬菌体
抗体
库
胰淀素
人源性单克隆抗体
Keywords
phage antibody library
amylin
humanmonoclonal antibody
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
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被引量
操作
1
人源抗癌胚抗原单克隆抗体的获得与鉴定
赵刚
范健
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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下载PDF
职称材料
2
人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1的建立及其在人单克隆抗体制备中的应用
樊代明
张学庸
陈希陶
乔太东
陈保军
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
1989
3
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职称材料
3
人源性噬菌体抗体库的构建及抗amylin抗体的初步筛选
公倩
李常颖
畅继武
朱铁虹
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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