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题名人源结缔组织生长因子单链可变区抗体片段的筛选
被引量：4
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作者
吴国球
刘乃丰
赵桂琴
范小波
张臣
王明虹
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机构
东南大学附属中大医院临床检验中心
东南大学临床医学院心血管研究所
中国药科大学生命科学与技术学院
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出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期464-468,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(No.30070300)~~
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文摘
目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列。方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coliHB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性。MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响。结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.001)。同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖。结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础。
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关键词
结缔组织生长因子
噬菌体展示
人源单链可变区片段
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Keywords
connective tissue growth factor
phage display
humanized single-chain variable fragment
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分类号
R392
[医药卫生—免疫学]
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