人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴动物模型的建立 被引量：2

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作者 单廷 张景斌 +3 位作者 曲林林 李秋荣 李宁 黎介寿 《肠外与肠内营养》 CAS 北大核心 2011年第2期102-105,共4页

目的:建立人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴的动物模型。方法:使用流式细胞仪筛选出红细胞表面不表达CD52抗原的食蟹猴,并观察给药后不同时间血中淋巴细胞数量变化情况。结果:食蟹猴血中淋巴细胞呈现出快速被清除及恢复的过程。CD20+B淋... 目的:建立人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴的动物模型。方法:使用流式细胞仪筛选出红细胞表面不表达CD52抗原的食蟹猴,并观察给药后不同时间血中淋巴细胞数量变化情况。结果:食蟹猴血中淋巴细胞呈现出快速被清除及恢复的过程。CD20+B淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞分别在给药后213、5和56 d恢复至给药前水平。结论:食蟹猴外周血中淋巴细胞清除效果略低于临床病人,恢复速度较快。本实验模型可用于临床人源化CD52单克隆抗体器官移植前的实验研究。 展开更多

关键词 人源化cd52单克隆抗体 食蟹猴 淋巴细胞

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儿童肝移植受者围手术期CD25人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导的疗效探讨

2

作者 习剑鑫 陈玉国 +2 位作者 耿笑辰 邱伟 吕国悦 《临床小儿外科杂志》 北大核心 2025年第3期207-214,共8页

目的观察重组抗白细胞分化抗原25(cluster of differentiation 25, CD25)人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导方案预防儿童肝移植受者急性排斥反应(acute rejection, AR)的效果。方法回顾性分析2015年7月至2024年8月于吉林大学第一医... 目的观察重组抗白细胞分化抗原25(cluster of differentiation 25, CD25)人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导方案预防儿童肝移植受者急性排斥反应(acute rejection, AR)的效果。方法回顾性分析2015年7月至2024年8月于吉林大学第一医院接受肝移植的79例儿童受者资料, 根据围手术期免疫诱导方案分为全量激素组60例、CD25单抗联合半量激素组19例。全量激素组围手术期采用全量激素诱导, 术后采用他克莫司联合激素免疫抑制;CD25单抗联合半量激素组围手术期采用重组抗CD25人源化单克隆抗体联合半量激素诱导, 术后单用他克莫司免疫抑制。对比两组术后AR、感染及激素相关并发症等主要结局, 以及重症监护室(intensive care unit, ICU)停留时间、移植物存活率、患者存活率、住院时间及住院花费等次要结局的差异。结果 CD25单抗联合半量激素组与全量激素组相比, 术后AR发生率(4/19比16/60)、感染发生率(12/19比40/60)、激素相关并发症发生率(11/19比24/60)、排斥反应发生时间[(9.00±6.78)d比(8.50±7.19)d]差异无统计学意义(P>0.05), ICU停留时间[7.5(3.0, 11.0)d比3.5(0.0, 12.0)d]、住院花费[18.99(13.13, 41.45)万元比19.54(15.22±29.32)万元]、移植物存活率(18/19比59/60)、患者存活率(19/19比54/60)差异无统计学意义(P>0.05), 但两组住院时间[24.0(17.0, 34.0)d比35.0(27.0, 46.5)d]差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组抗CD25人源化单克隆抗体联合激素减量免疫诱导方案安全有效, 能够在减少激素用量的同时实现相似的免疫抑制效果, 但与全量激素诱导相比, 并不能降低AR、感染及激素相关并发症的发生率。 展开更多

关键词 肝移植 重组抗cd25人源化单克隆抗体 急性排斥反应 糖皮质激素 外科手术 儿童

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抗periostin人源化单克隆抗体的制备及鉴定

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作者 李雪娇 赵航 +6 位作者 张朔 康慧颖 周艳楠 贾爽 路旭 赵洪礼 海洋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2628-2633,共6页

目的:制备抗periostin人源化单克隆抗体,建立稳定的细胞株。方法:以本实验室自主研发的抗periostin鼠单抗为基础,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增VH和VL基因测序获得可变区序列,将小鼠抗体CDR区域移植到人源抗体框架受体区域,基因合成后亚... 目的:制备抗periostin人源化单克隆抗体,建立稳定的细胞株。方法:以本实验室自主研发的抗periostin鼠单抗为基础,提取细胞总RNA,经RT-PCR扩增VH和VL基因测序获得可变区序列,将小鼠抗体CDR区域移植到人源抗体框架受体区域,基因合成后亚克隆到表达载体PATX-GS2,稳定转染CHO细胞,经MSX加压筛选、有限稀释获得单克隆细胞株。结果:经RT-PCR扩增V_(H)和V_(L)基因,确定轻重链可变区序列,通过CDR移植方法,成功对鼠源单抗进行人源化改造,并构建了真核质粒载体,经转染至CHO细胞表达,成功获得人源化抗periostin抗体,ELISA和Western blot结果证明,制备的人源化抗体具有良好的活性和亲和力。结论:本研究成功制备了抗periostin人源化单克隆抗体,且该人源化抗体可以与体内periostin蛋白特异性结合,具有生物学活性,为精准治疗视网膜纤维化病变、组织器官纤维化病变及恶性肿瘤提供了科学数据。 展开更多

关键词 PERIOSTIN 人源化单克隆抗体 视网膜纤维化

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重组抗CD25人源化单克隆抗体治疗激素耐药急性移植物抗宿主病的临床研究 被引量：3

4

作者 李晓红 高春记 +9 位作者 达万明 曹永彬 徐丽昕 吴亚妹 刘蓓 刘周阳 闫蓓 李松威 杨雪良 吴晓雄 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1535-1540,共6页

本研究探讨重组抗CD25人源化单克隆抗体在异基因造血干细胞移植后激素耐药的急性移植物抗宿主病(aGVHD)防治中的作用。对21例异基因造血干细胞移植后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者于第1、4、8 d给予重组抗CD25人源化单克隆抗体1 mg/(k... 本研究探讨重组抗CD25人源化单克隆抗体在异基因造血干细胞移植后激素耐药的急性移植物抗宿主病(aGVHD)防治中的作用。对21例异基因造血干细胞移植后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者于第1、4、8 d给予重组抗CD25人源化单克隆抗体1 mg/(kg·d)静脉输注,未达到疗效的病人间隔1周后重复本治疗。结果表明,所有患者中完全有效13例(61.9%),其中4例无病生存,8例生存伴轻度慢性移植物抗宿主病(cGVHD),1例死于白血病髓外复发;6例部分有效(28.57%),其中3例生存伴轻度cGVHD,3例死于肺部感染;2例无效(9.52%)死亡;总有效率90.5%,总生存率71.48%,尤其在单倍体造血衰竭性疾病的6例患者中,有效率高达100%。该药应用安全,未发现输注相关的毒副作用。结论:重组抗CD25人源化单克隆抗体对异基因造血干细胞移植后激素耐药的Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)有较好的疗效,且应用安全。 展开更多

关键词 重组抗cd25人源化单克隆抗体 异基因造血干细胞移植 急性移植物抗宿主病

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人源化CD25单克隆抗体对外周血T淋巴细胞活化和增殖的影响 被引量：1

5

作者 刘微 任汉云 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期134-137,共4页

本研究探讨人源化重组CD25单克隆抗体(rhCD25MAb)对外周血T淋巴细胞活化、增殖的影响。应用植物血凝素(PHA)刺激外周血单个核细胞,不加或同时加rhCD25MAb或环孢菌素A(CsA)进行体外培养,或先用PHA刺激T细胞活化后再加入rhCD25MAb继续进... 本研究探讨人源化重组CD25单克隆抗体(rhCD25MAb)对外周血T淋巴细胞活化、增殖的影响。应用植物血凝素(PHA)刺激外周血单个核细胞,不加或同时加rhCD25MAb或环孢菌素A(CsA)进行体外培养,或先用PHA刺激T细胞活化后再加入rhCD25MAb继续进行培养。用MTT法检测淋巴细胞增殖率;流式细胞术检测T淋巴细胞表面抗原CD3、CD25的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中可溶性IL-2R(sIL-2R)水平。结果显示:rh-CD25MAb和CsA均能有效抑制PHA活化的T细胞的增殖,且随浓度的升高而增强,总体比较,CsA对T细胞的增殖抑制作用更强。虽然CsA和rhCD25MAb均能降低细胞培养上清中的sIL-2R的水平及CD25+/CD3+的比例,但rhCD25MAb的作用明显强于CsA。rhCD25MAb无论是在T细胞活化前还是活化后均能抑制T细胞表达CD25抗原和分泌sIL-2R。结论:rhCD25MAb具有很强的免疫抑制作用,它能抑制T细胞活化及抑制活化的T细胞增殖,临床上它不仅可用于治疗急性移植物抗宿主病(aGVHD),还可用于预防aGVHD。 展开更多

关键词 人源化抗cd25单克隆抗体 T淋巴细胞 可溶性白介素2受体 细胞表面抗原

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抗人Ⅰ型干扰素受体亚基1人源化单克隆抗体的制备和鉴定

6

作者 裘霁宛 孔永 +4 位作者 陈卫 徐蕾 曹纯洁 陈涛 吴亦亮 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期404-411,共8页

Ⅰ型干扰素在系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用,采用抗体阻断其信号转导通路具有潜在的治疗作用。本研究以人Ⅰ型干扰素受体亚基1(IFNAR1)重组蛋白为抗原免疫新西兰白兔,采用B细胞克隆技术筛选兔抗人IFNAR... Ⅰ型干扰素在系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病的发病机制中发挥重要作用,采用抗体阻断其信号转导通路具有潜在的治疗作用。本研究以人Ⅰ型干扰素受体亚基1(IFNAR1)重组蛋白为抗原免疫新西兰白兔,采用B细胞克隆技术筛选兔抗人IFNAR1单克隆抗体,经过人源化改造获得QX006N。体外研究结果显示,QX006N能特异性地结合人IFNAR1,亲和力约108 pmol/L,可阻断Ⅰ型干扰素信号通路及其介导的生物学效应。本研究为开发靶向干预Ⅰ型干扰素信号途径用于治疗SLE的抗体药物提供了坚实的基础。 展开更多

关键词 B细胞克隆 人源化 兔单克隆抗体 IFNAR1 Ⅰ型干扰素 系统性红斑狼疮

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抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性评价方法的建立 被引量：2

7

作者 钱卫珠 侯盛 +4 位作者 李博华 杨扬 王晓芸 王荣福 王皓 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期484-487,共4页

目的建立抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的评价方法。方法利用HER2表达阳性的人乳腺癌细胞系BT474建立抗HER2单抗体内外活性评价方法,对上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗的体外生物学活性、抗体依赖的细胞介导... 目的建立抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的评价方法。方法利用HER2表达阳性的人乳腺癌细胞系BT474建立抗HER2单抗体内外活性评价方法,对上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗的体外生物学活性、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性、对BT474荷瘤裸鼠的治疗作用及荷瘤裸鼠瘤体组织H E染色及免疫组化检测rh HER2mAb的分布与Herceptin进行了比较研究。结果建立了完整的该人源化单抗的体内外活性评价方法,测评结果显示,上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗在体外有效抑制BT474细胞增殖,与Herceptin体外生物学活性相似,EC50分别为148.3和145.9ng/ml;可通过ADCC效应杀伤BT474细胞,与Herceptin的EC50值一致,分别为185.0和183.9ng/ml;抑制BT474裸鼠异种移植模型肿瘤的生长,与无关抗体治疗组或PBS治疗组相比具有统计学差别(P<0.05),与Herceptin抑制能力接近,4mg/kg剂量组相比没有统计学差别;免疫组织化学检测显示抗体集中分布于肿瘤组织。结论建立的评价方法可对抗HER2单抗的抗肿瘤活性进行客观准确的评价,国内研制的抗HER2人源化单克隆抗体与进口同种抗体相比具有相同的体内外活性。 展开更多

关键词 HER2 人源化单克隆抗体 乳腺肿瘤 抗肿瘤活性

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鼠单克隆抗体人源化 被引量：3

8

作者 袁清安 俞炜源 黄翠芬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期68-72,共5页

鼠源性单克隆抗体应用于临床由于ＨＡＭＡ反应的存在而受到阻碍。以ＣＤＲ移植为核心，以同源分析及分子模建为辅助设计的人源化方案，已成为克服ＨＡＭＡ反应的主要手段。

关键词 人源化 cdR移植 HAMA 单克隆抗体

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鼠源单克隆抗体人源化研究进展 被引量：4

9

作者 王臣 温文彦 张春杰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第11期2336-2337,2343,共3页

杂交瘤技术诞生以来,鼠源单克隆抗体为人类疾病的研究起到了重大的推动作用,而鼠源单克隆抗体用于疾病的治疗时却有严重的不足,单克隆抗体人源化已是当前研究的热点。对单克隆抗体人源化的有关实验研究进展进行了综述。

关键词 单克隆抗体 抗体人源化 基因工程

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重组抗HER2人源化单克隆抗体大规模制备及活性鉴定方法学建立 被引量：1

10

作者 陈观平 汪一帆 应栩华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期884-888,共5页

目的建立大规模表达重组人源化HER2单克隆抗体(Anti-her2)并测定重组抗体活性的方法。方法利用Anti-her2重链、轻链真核表达载体质粒共同转化CHO细胞,筛选稳定表达株,然后放大培养,并利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPL... 目的建立大规模表达重组人源化HER2单克隆抗体(Anti-her2)并测定重组抗体活性的方法。方法利用Anti-her2重链、轻链真核表达载体质粒共同转化CHO细胞,筛选稳定表达株,然后放大培养,并利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物纯度,Western blot检测产物特异性,同时比较重组抗体的活性。结果筛选得到1株稳定表达的细胞株,收液后蛋白BCA定量为135.9 mg·L-1。纯化后获得的目的蛋白相对分子质量约为185 kD,蛋白纯度在99%以上,与商品化的“赫赛汀”一致;活性检测显示其活性与“赫赛汀”相当,细胞实验揭示其能显著抑制BT-474细胞增殖及胞内HER2的表达。结论该方法筛选获得的重组蛋白,与商品化药物性质基本一致,这为重组抗体药物的大规模悬浮培养放大和工业化生产奠定了基础。 展开更多

关键词 重组 HER2 人源化 单克隆抗体 中国仓鼠卵巢细胞 纯化

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人源化治疗性单克隆抗体的研究进展 被引量：4

11

作者 彭如意 王捷 《实用医学杂志》 CAS 2007年第5期753-754,共2页

治疗性单克隆抗体结合了免疫学和药理学的原理，应用于疾病治疗已有几十年。单克隆抗体在治疗中的运用要特别考虑到生物药效率、耐受性、变化性和适用性。抗体的临床应用结果反映出了单克隆抗体药物存在的一些问题：（1）鼠源性单抗容... 治疗性单克隆抗体结合了免疫学和药理学的原理，应用于疾病治疗已有几十年。单克隆抗体在治疗中的运用要特别考虑到生物药效率、耐受性、变化性和适用性。抗体的临床应用结果反映出了单克隆抗体药物存在的一些问题：（1）鼠源性单抗容易产生人抗鼠抗体（HAMA），从而削弱其治疗的有效性：（2）由于鼠单抗是异源蛋白，在体内很快就被清除掉，并对清除抗体的器官产生损害；（3）抗体的分子量相对较大，所以抗体分子到达靶部位不足；（4）鼠源性单抗在人体中常不能有效地活化补体和Fc受体相关的效应功能，因此其应用受到了较大的限制．这些就推动了人源性单抗的产生。 展开更多

关键词 治疗性单克隆抗体 人源化 鼠源性单抗 单克隆抗体药物 人抗鼠抗体 疾病治疗 生物药效 临床应用

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抗CD3人源化抗体恒定区突变体的制备及其生物学活性 被引量：1

12

作者 李博华 王皓 +7 位作者 杨扬 陆斌 王华菁 张大鹏 钱卫珠 季军捷 李晓东 郭亚军 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期28-33,共6页

为了降低抗CD3人源化抗体hu12F6对T细胞的激活作用以克服首剂效应 ,构建了恒定区特定位点突变的hu12F6重链表达载体 ,将其与hu12F6的轻链表达载体共转染CHO细胞 .ELISA和RT PCR证实 ,恒定区特定位点突变的人源化抗体hu12F6m在CHO细胞中... 为了降低抗CD3人源化抗体hu12F6对T细胞的激活作用以克服首剂效应 ,构建了恒定区特定位点突变的hu12F6重链表达载体 ,将其与hu12F6的轻链表达载体共转染CHO细胞 .ELISA和RT PCR证实 ,恒定区特定位点突变的人源化抗体hu12F6m在CHO细胞中获得了表达 .竞争抑制实验证实hu12F6m具有与原鼠源抗体及hu12F6相似的特异性和亲和力 .增殖实验表明hu12F6m对T细胞的刺激作用明显弱于hu12F6 .实验结果为深入探讨hu12F6m的生物学特性奠定了基础 . 展开更多

关键词 cd3 人源化抗体 定点突变 首剂效应 恒定区

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人源化抗CD3单链抗体在大肠杆菌中的表达

13

作者 罗良生 王爱东 黄强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期303-305,共3页

关键词 单链抗体 人源化 cd3 大肠杆菌

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CDR3导向抗体库法人源化抗膀胱癌Fab的鉴定

14

作者 周丽君 王欲晓 王琰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期384-386,共3页

目的:对通过CDR3导向抗体库法筛选到的3株人源化膀胱癌噬菌体抗体进行进一步分析鉴定。方法:用ELISA方法对筛选特异性克隆进行特异性鉴定、抗原表位的核实;采用硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力;选用活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免... 目的:对通过CDR3导向抗体库法筛选到的3株人源化膀胱癌噬菌体抗体进行进一步分析鉴定。方法:用ELISA方法对筛选特异性克隆进行特异性鉴定、抗原表位的核实;采用硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力;选用活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验。结果:3株阳性克隆可溶性表达后能够与膀胱癌EJ细胞特异性结合;与鼠源噬菌体抗体(BDI)相比,2株克隆的亲和指数比较低,均为0.25mol/L,1株克隆的亲和指数为0.7mol/L,略低于鼠源的亲和指数(0.9mol/L)的水平。选择活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验,显示该克隆能够与癌组织特异性结合。结论:用CDR3导向库法获得的人源抗体片段基本保持了原鼠源单克隆抗体(mAb)BDI的特性。 展开更多

关键词 抗膀胱癌单克隆抗体 噬菌体抗体库 鼠单克隆抗体人源化

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CD52单抗通过清除活化T细胞对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用 被引量：1

15

作者 刘建辉 朱维铭 《肠外与肠内营养》 北大核心 2018年第4期243-247,共5页

目的:观察CD52单抗对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用并探究其干预作用的可能机制。方法:给予CD52单抗治疗后,计算疾病活动度指数,检测结肠病理学评分,外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中T淋巴细胞的清除情况,结肠组织炎性因子水... 目的:观察CD52单抗对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用并探究其干预作用的可能机制。方法:给予CD52单抗治疗后,计算疾病活动度指数,检测结肠病理学评分,外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中T淋巴细胞的清除情况,结肠组织炎性因子水平及相关细胞因子的m RNA转录水平的变化。结果:CD52单抗能有效降低疾病活动度评分、结肠病理学评分,能显著地清除模型小鼠外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中CD3+T细胞,明显降低结肠组织中IFN-γ、IL-17的表达水平,同时增加了IL-5和IL-13的表达,并相应下调TNF-α、IFN-γ、IL-17和IL-6及炎症调控因子IL-12和IL-23的m RNA表达水平。结论:抗CD52单抗能有效地治疗IL-10基因敲除小鼠的结肠炎,其干预效果与活化T细胞的直接清除相关,此外,其对IL-12/23通路的下调及Th2反应的诱导作用亦可能与干预作用相关。 展开更多

关键词 抗cd52单克隆抗体 IL-10基因敲除小鼠 T细胞清除 T细胞相关炎症

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人源化抗体中和2009年甲型H1N1流感病毒的研究

16

作者 Shembekar N 董晓云 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期172-172,共1页

2009年甲型H1N1流感病毒(猪源流感病毒)流行在全世界引起较高的发病率和死亡率。除疫苗和抗病毒药物治疗外,使用流感病毒中和性单克隆抗体(MAb)来治疗也是一种可行的选择。前期的研究分离了具有高亲和力的抗2009年甲型H1N1流感病毒的鼠... 2009年甲型H1N1流感病毒(猪源流感病毒)流行在全世界引起较高的发病率和死亡率。除疫苗和抗病毒药物治疗外,使用流感病毒中和性单克隆抗体(MAb)来治疗也是一种可行的选择。前期的研究分离了具有高亲和力的抗2009年甲型H1N1流感病毒的鼠单克隆抗体MA2077,本试验研究了MA2077的人源化及其在哺乳动物细胞中的表达。MA2077的6个互补决定区(CDR)被移植到人类种系可变区,同时在重链和轻链的框架中分别有6和8个回复突变,与微调区和链间包装残基一起促进CDR优势构象及抗原结合。表达于CHO-K1细胞的全长人源化抗体2077Hu2,对血凝素蛋白(KD=0.75nm±0.32nm)表现出较高的亲和力,与H1N1流感病毒(IC50=0.17μg/mL)有强效的中和活性,与MA2077(0.08μg/mL)相比IC50略高。此外,2077Hu2还保留了针对HA流感"Sa"的特异性抗原表位。据悉,这是对甲型H1N1流感病毒的人源化中和抗体的首次报告。 展开更多

关键词 2009年甲型H1N1流感 抗体人源化 cdR移植 表位作图 中和性单克隆抗体

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人源化AGR2单抗在不同宿主细胞中表达的比较 被引量：1

17

作者 谢秋玲 汤杰 +2 位作者 黄嘉慧 卢加 刘晨雪璇 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第6期142-148,共7页

Anterior gradient-2(AGR2)基因是一种与肿瘤生长、转移、浸润及耐药性密切相关的基因,以AGR2为靶点的人源化单克隆抗体rhAGR2-mAb有望成为一种新型的抗肿瘤药物.本研究为了进行该抗体的成药性评价,通过瞬时转染的方法分别用HEK293F细胞... Anterior gradient-2(AGR2)基因是一种与肿瘤生长、转移、浸润及耐药性密切相关的基因,以AGR2为靶点的人源化单克隆抗体rhAGR2-mAb有望成为一种新型的抗肿瘤药物.本研究为了进行该抗体的成药性评价,通过瞬时转染的方法分别用HEK293F细胞与CHO细胞这两种最常用的表达系统表达rhAGR2-mAb,获得了纯度为95%的抗体蛋白,同时比较了不同宿主细胞生产的蛋白在分子量、等电点、糖型等方面的差异,发现在分子量、等电点和糖基化的糖型种类方面,两种宿主细胞表达的rhAGR2-mAb并无明显差异,但两者表达的产物在糖型比例上有较大不同,这也导致了两种表达系统所表达的蛋白与抗原AGR2的亲和力略有不同,为rhAGR2-mAb将来选择合适的蛋白瞬时表达系统和稳定生产系统提供依据. 展开更多

关键词 人源化 AGR2单克隆抗体 瞬时基因表达 CHO细胞 HEK细胞

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抗EV71病毒人源抗体Fab段表达基因的构建及序列分析 被引量：1

18

作者 余艳琼 翁育伟 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期234-238,共5页

目的从成人外周血淋巴细胞中扩增抗体可变区并构建人源抗体Fab段表达基因,为构建抗EV71病毒人源化单克隆抗体库奠定基础。方法从EV71病毒中和抗体阳性且免疫功能健全的成人全血中,分离淋巴细胞并提取总RNA,经反转录获得cDNA。用一组人Ig... 目的从成人外周血淋巴细胞中扩增抗体可变区并构建人源抗体Fab段表达基因,为构建抗EV71病毒人源化单克隆抗体库奠定基础。方法从EV71病毒中和抗体阳性且免疫功能健全的成人全血中,分离淋巴细胞并提取总RNA,经反转录获得cDNA。用一组人IgG Fab基因特异性引物,从合成的cDNA中分别扩增抗体轻、重链可变区,应用重叠PCR技术构建Fab段表达基因,测序分析抗体基因的多样性。结果成功扩增人抗体可变区基因并组装Fab段表达盒,表达盒的长度约为1 500bp,测序分析结果表明,Fab段的多样性可达94.12%。结论成功构建人源抗体Fab段基因,为抗EV71病毒人源性单克隆抗体库的制备奠定了基础。 展开更多

关键词 肠道病毒71型 人源化 单克隆抗体 FAB

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FGF2人源化单抗E12及其联合顺铂/紫杉醇体外抑制乳腺癌细胞增殖作用的研究 被引量：3

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作者 张宇 黄建芳 +2 位作者 徐萌 王宏 向军俭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1187-1194,共8页

目的:研究人源化FGF2单抗体E12体外联合化疗药物抑制乳腺癌肿瘤细胞增殖的作用。方法:分析人源化FGF2单抗可变区人源氨基酸序列比率;SDS-PAGE和HPLC检测单抗纯度;ELISA测定单抗效价;BSA法检测单抗浓度;CCK-8法检测单抗联合化疗药物对乳... 目的:研究人源化FGF2单抗体E12体外联合化疗药物抑制乳腺癌肿瘤细胞增殖的作用。方法:分析人源化FGF2单抗可变区人源氨基酸序列比率;SDS-PAGE和HPLC检测单抗纯度;ELISA测定单抗效价;BSA法检测单抗浓度;CCK-8法检测单抗联合化疗药物对乳腺癌肿瘤细胞株的细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测FGF2单抗联合化疗药物对乳腺癌细胞株的促凋亡作用;使用Discovery Studio 4.5软件对单抗的表位进行分析。结果:单抗可变区人源氨基酸序列比率重链为98.89%,轻链为100.00%;单抗纯度为99.02%;单抗ELISA效价为1/243 000;单抗浓度为8.74 mg/ml;CCK-8结果表明顺铂为10、5、2.5、0.625μg/ml时,单抗+顺铂组比顺铂组对MCF-7细胞抑制率提高了14.5%、10.4%、1.5%、0.5%;对MDAMB453细胞抑制率提高了15.5%、14.8%、13.0%、6.8%,紫杉醇为1.0、0.1、0.01μg/ml时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MCF-7细胞抑制率提高了14.5%、11.1%、9.3%,紫杉醇为0.1、0.01、0.001μg/ml时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MDAMB453细胞的抑制率提高了18.6%、19.9%、6.8%;流式结果表明,单抗、紫杉醇及单抗+紫杉醇组的MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区所占比例提高了6.13%、7.36%和12.83%,同理MDA-MB453细胞所占比例提高了4.86%、7.1%和14.1%,单抗、顺铂及单抗+顺铂组MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区所占比例提高了6.39%、9.46%和17.76%,同理MDA-MB453细胞所占比例提高了5.38%、9.06%和19.39%;表位分析结果表明FGF2单抗有效封闭FGF2与受体结合的部分位点。结论:FGF2人源单抗E12人源化程度较高;FGF2人源化单抗联合化疗药物相对单药组可较明显地提高肿瘤细胞增殖抑制作用以及促细胞凋亡作用;本研究为FGF2抗体药物研发提供了前期基础。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 人源化单克隆抗体 E12 MCF-7 MDA-MB453 顺铂 紫杉醇 联合用药

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贝伐单抗结膜下注射对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化的抑制作用 被引量：11

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作者 梁沛 杨瑾 林锦镛 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期591-596,共6页

背景青光眼滤过手术术后滤过道的瘢痕化是导致手术失败的主要原因。传统的抑制滤过道瘢痕化的方法是丝裂霉素C的应用，但存在较多的并发症。研究表明贝伐单抗具有抑制新生血管和纤维增生的作用，其对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化是否有... 背景青光眼滤过手术术后滤过道的瘢痕化是导致手术失败的主要原因。传统的抑制滤过道瘢痕化的方法是丝裂霉素C的应用，但存在较多的并发症。研究表明贝伐单抗具有抑制新生血管和纤维增生的作用，其对青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化是否有抑制作用受到关注。目的观察贝伐单抗结膜下注射对兔眼小梁切除术后滤过泡纤维瘢痕形成的抑制效果。方法按随机数字表法将7～9周龄新西兰大白兔40只随机分为4个组，各组兔右眼均行常规小梁网切除术。贝伐单抗单次注射组兔眼术毕结膜下注射贝伐单抗0．05ml（25mg／m1），贝伐单抗多次注射组兔眼分别于术毕及术后3、7d注射贝伐单抗，每次均注射0．05ml，丝裂霉素c组兔眼术毕局部涂用丝裂霉素c，生理盐水组兔眼术毕以同样的方法注射0．05ml生理盐水。所有兔眼术后每隔1日用Sehiotz眼压计测量眼压，行裂隙灯显微镜检查以观察滤过泡形态及其表面的血管分布，并用卡尺测量和计算滤过泡面积。分别于术后14d和28d摘取实验眼行滤过泡组织病理学检查，采用免疫组织化学法检测滤过道组织中血管内皮细胞标志物CD31的表达以计算微血管数目。结果各组兔眼术后眼压值的总体比较差异无统计学意义（F=0．88，P=0．47）。与贝伐单抗单次注射组、丝裂霉素c组和生理盐水组兔眼滤过泡的形态比较，术后7d贝伐单抗多次注射组兔眼滤过泡高度隆起且弥散，表面血管稀疏。贝伐单抗多次注射组兔眼滤过泡生存时间为27d，而贝伐单抗单次注射组、丝裂霉素C组均为19d，生理盐水组为13d。术后14d各组兔眼滤过道胶原纤维百分比分别为（49．18±1．54）％、（26．41±1．23）％、（50．68±1．87）％和（70．63±1．81）％，贝伐单抗单次注射组、贝伐单抗多次注射组、丝裂霉素c组滤过道胶原纤维百分比均低于生理盐水组，贝伐单抗多次注射组低于贝伐单抗单次注射组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；术后28d贝伐单抗多次注射组胶原纤维百分比为（66．82±1．53）％，其他3个组出现瘢痕化。术后14d贝伐单抗多次注射组兔眼滤过道组织中微血管数目明显低于贝伐单抗单次注射组、丝裂霉素C组和生理盐水组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。术后28d贝伐单抗多次注射组兔眼滤过道组织中微血管数且为3．51±O．31，均高于贝伐单抗注射组、丝裂霉素组和生理盐水组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论青光眼滤过术后结膜下注射贝伐单抗有助于维持功能滤过泡的形态，抑制滤过道瘢痕化，提高手术的成功率。 展开更多

关键词 人源化单克隆抗体 贝伐单抗 结膜/病理 动物模型 纤维化/预防&控制 青光眼/手 术 小梁切除术 伤口愈合/药物作用

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