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人源化抗组织因子(TF)抗体的制备及杀伤结肠癌细胞和抑制细胞迁移的机制
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作者 赵亚蕊 赵邑 +4 位作者 赵峰梅 潘薇薇 张全爱 曹鹏程 梁欣欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期168-173,共6页
目的探讨靶向组织因子(TF)的人源化抗体对结肠癌细胞杀伤和迁移作用。方法体外培养人源化TF抗体高表达CHO-5G4.1细胞,经蛋白A(Protein A)和凝胶层析柱纯化,利用毛细管SDS-PAGE检测抗体纯度,采用凝血酶原时间(PT)法测定抗凝血活性,采用... 目的探讨靶向组织因子(TF)的人源化抗体对结肠癌细胞杀伤和迁移作用。方法体外培养人源化TF抗体高表达CHO-5G4.1细胞,经蛋白A(Protein A)和凝胶层析柱纯化,利用毛细管SDS-PAGE检测抗体纯度,采用凝血酶原时间(PT)法测定抗凝血活性,采用抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)分析抗体对SW620和SW480结肠癌细胞的杀伤效应,Transwell^(TM)检测抗体对细胞迁移的影响,明胶酶谱和Western blot法检测人源化TF抗体处理后,迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、黏着斑激酶(FAK)和磷酸化的FAK(p-FAK)蛋白水平的变化。结果通过两步法纯化人源化TF抗体毛细管SDS-PAGE检测纯度可达96.9%,并具有抗凝血活性。人源化TF抗体可通过ADCC杀死结肠癌细胞并明显抑制结肠癌细胞的迁移,抑制率达到99%,并可降低MMP2的表达及p-FAK的表达。结论获得了高纯度的人源化TF抗体,该抗体可通过ADCC杀伤结肠癌细胞,并可抑制FAK信号通路降低MMP2的表达,抑制结肠癌细胞的迁移。 展开更多
关键词 人源化组织因子抗体 结肠癌细胞 抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC) 细胞迁移
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