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黄连素通过Nrf2/HO-1通路对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞-B3损伤的影响
1
作者 梁圆圆 杨彬 +2 位作者 于亚东 胡馨 赵博 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期153-158,共6页
目的:探讨黄连素通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路对过氧化氢造成的人晶状体上皮细胞-B3(HLE-B3)损伤的影响。方法:取对数生长期HLE-B3细胞分为对照组,氧化损伤组,低、中和高剂量黄连素组,各剂量黄连素组细胞... 目的:探讨黄连素通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路对过氧化氢造成的人晶状体上皮细胞-B3(HLE-B3)损伤的影响。方法:取对数生长期HLE-B3细胞分为对照组,氧化损伤组,低、中和高剂量黄连素组,各剂量黄连素组细胞分别用含50、100和200μmol/L黄连素的培养基100μL培养24 h,之后换用含300μmol/L过氧化氢的培养基100μL培养24 h,氧化损伤组用仅含300μmol/L过氧化氢的培养基、对照组仅更换新鲜培养基培养24 h。MTT法检测细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,ELISA法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,免疫荧光法检测活性氧(ROS)水平,qRT-PCR法和Western blot法检测Nrf2、HO-1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,氧化损伤组细胞增殖活性,SOD和GSH-Px活性,Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白相对表达量降低;细胞凋亡率,MDA含量,ROS水平,iNOS、COX-2 mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05)。与氧化损伤组比较,低、中和高剂量黄连素组细胞增殖活性,SOD和GSH-Px活性,Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白相对表达量升高;细胞凋亡率,MDA含量,ROS水平,iNOS、COX-2 mRNA和蛋白相对表达量降低,且高剂量黄连素作用最强(P<0.05)。结论:黄连素可抑制过氧化氢造成的HLE-B3细胞凋亡,促进增殖活性,降低氧化应激反应,其可能是通过激活Nrf2/HO-1通路发挥作用。 展开更多
关键词 过氧化氢 人晶状体上皮细胞-B3 黄连素 Nrf2/HO-1通路
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榅桲总黄酮对高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响及作用机制 被引量：1
2
作者 罗元元 曹静洁 +3 位作者 王海营 封传 唐陶富 胡洁 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第10期774-779,共6页
目的探讨榅桲总黄酮对高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型。取人晶状体上皮细胞加入含有30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理24 h,记为高糖组。用含有5.5 mmol... 目的探讨榅桲总黄酮对高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型。取人晶状体上皮细胞加入含有30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理24 h,记为高糖组。用含有5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理24 h记为对照组。取人晶状体上皮细胞按照每孔5×10^(3)个接种于96孔板,分别加入含有10 mmol·L^(-1)、20 mmol·L^(-1)、40 mmol·L^(-1)榅桲总黄酮与30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理24 h,记为高糖+低榅桲总黄酮组、高糖+中榅桲总黄酮组、高糖+高榅桲总黄酮组。用Lipofectamine2000转染试剂向人晶状体上皮细胞分别转染anti-miR-NC、anti-miR-370,随后加30 mmol·L^(-1)葡萄糖处理24 h,命名为高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-370组。分别向人晶状体上皮细胞转染miR-NC、miR-370 mimics,加30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基及40 mmol·L^(-1)榅桲总黄酮处理24 h,记为高糖+榅桲总黄酮+miR-NC组、高糖+榅桲总黄酮+miR-370组。采用ELISA法监测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,qRT-PCR检测miR-370表达量,Western blot检测凋亡蛋白表达情况。结果与对照组相比,高糖组人晶状体上皮细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与高糖组相比,高糖+低、中、高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞SOD和CAT的活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,高糖组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与高糖组相比,高糖+低、中、高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组、高糖组、高糖+低榅桲总黄酮组、高糖+中榅桲总黄酮组、高糖+高榅桲总黄酮组人晶状体上皮细胞miR-370表达量分别为1.00±0.00、4.04±0.36、3.22±0.24、2.42±0.23和1.62±0.14,5组比较差异有统计学意义(F=256.138,P<0.05)。与高糖+anti-miR-NC组相比,高糖+anti-miR-370组人晶状体上皮细胞miR-370表达量降低,SOD和CAT活性升高,MDA含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与高糖+anti-miR-NC组相比,高糖+anti-miR-370组人晶状体上皮细胞凋亡率,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与高糖+榅桲总黄酮+miR-NC组相比,高糖+榅桲总黄酮+miR-370组人晶状体上皮细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量、细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。结论高糖诱导的人晶状体上皮细胞中miR-370的表达升高,榅桲总黄酮可抑制高糖诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,其作用机制可能与其能降低miR-370表达有关。 展开更多
关键词 榅桲总黄酮 微小RNA-370 氧化应激 细胞凋亡 人晶状体上皮细胞
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紫外线对人晶状体上皮细胞凋亡的诱导及Bcl-2,Bax基因的影响 被引量：11
3
作者 贾松柏 石晶明 +1 位作者 陈翾 唐罗生 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期730-736,共7页
目的:研究紫外线照射体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)对凋亡的诱导、凋亡调控基因(Bax,Bcl-2)表达的变化,探讨紫外线诱导HLEC凋亡的机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一紫外线光源对HLE... 目的:研究紫外线照射体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)对凋亡的诱导、凋亡调控基因(Bax,Bcl-2)表达的变化,探讨紫外线诱导HLEC凋亡的机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一紫外线光源对HLEC进行照射。按紫外线照射时间将HLEC分为0,5,10,15及30 min组。采用Annexin V+PI双染流式细胞计数对HLEC凋亡进行检测,用原位杂交的方法检测各组Bax,Bcl-2 mRNA的表达。结果:随紫外线照射时间的延长HLEC凋亡率增加,Bcl-2阳性细胞率逐渐降低;而Bax阳性细胞率逐渐增加。HLEC凋亡率与Bcl-2和Bax的比率呈负相关(r=-0.874,P<0.05)。结论:紫外线照射可诱导HLEC凋亡,Bax和Bcl-2可能参与了紫外线诱导的HLEC凋亡的基因调控过程。 展开更多
关键词 紫外线 人晶状体上皮细胞 白内障 凋亡 BAX BCL-2
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雷帕霉素对转化生长因子-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间叶样转化的抑制作用及其机制 被引量：7
4
作者 林婷婷 王思敏 +2 位作者 刘加勇 冯浩 宁宏 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期347-351,共5页
背景转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）上皮细胞-肌成纤维细胞转化（EMT）过程是后发性白内障（PCO）的主要发病机制，因此寻求有效抑制这一作用的药物对于防治PCO有重要意义。目的观察雷帕霉素（RAPA）对人L... 背景转化生长因子-β2（TGF-β2）诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）上皮细胞-肌成纤维细胞转化（EMT）过程是后发性白内障（PCO）的主要发病机制，因此寻求有效抑制这一作用的药物对于防治PCO有重要意义。目的观察雷帕霉素（RAPA）对人LECs增生和TGF-β2诱导的EMT的抑制作用。方法采用含质量分数10％胎牛血清的DMEM高糖细胞培养液对人LECs系SRA01／04进行体外培养，换以无血清培养液培养后分别用TGF-β2（5mg／L）、TGF-β2＋10nlg／LRAPA、TGF-β2＋100mg／LRAPA、TGF-β2＋1000mg／LRAPA、TGF-β2＋10000mg／LRAPA共培养SRA01／0472h，仅用无血清培养液培养的SRA01／04作为对照组。采用MTT法检测各组SRAOI／04的吸光度（A490）值以评估SRA01／04的增生情况，并计算RAPA对细胞生长的抑制率。各组细胞作用48h后，采用逆转录PCR（RT-PCR）法和Westernblot法分别检测LECsETM的标志物-α平滑肌肌动蛋白（d-SMA）和上皮性钙黏附蛋白（E-cad）的表达。选取TGF-β2＋400mg／LRAPA分别作用于培养的SRA01／0424、48、72h，采用Westernblot法检测SRA01／04中α-SMA、E-cad的表达水平。结果MTT法检测结果显示，对照组、TGF-β2组、TGF-β2＋10ing／LRAPA组、TGF-β2＋100mg／LRAPA组、TGF-β2＋1000ing／LRAPA组和TGF-β2＋10000mg／LRAPA组SRA01／04的A490值分别为0．680＋0．020、0．550±0．013、0．480＋0．014、0．400＋0．011和0．200＋0．019，表明随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04增生值降低，差异有统计学意义（F=101．920，P=0．000），且RAPA的抑制率逐渐增加。RT-PCR和Westernblot检测结果表明，阴性对照组SRAOI／04中α-SMAmRNA（α-SMAmRNA／β-actinmRNA）及其蛋白（α-SMA／β-actin）仅有少量表达，TGF．B，组可见SRAOI／04中01．SMAmRNA及其蛋白表达量明显增加，但不同质量浓度的RAPA作用于SRA01／04后，随着RAPA质量浓度的增加，SRAOI／04中α-SMAmRNA及蛋白的表达量均逐渐减少，但E-cadmRNA及其蛋白表达逐渐增多，各组间的总体差异均有统计学意义（α-SMAmRNA：F=294．660，P=0．000；α-SMA蛋白：F=346．950，P=0．000；E-cad mRNA：F=264．250，P=0．000；E-cad蛋白：F=317．327，P=0．000）。400mg／LRAPA作用于SRA01／04后，随着作用时间的延长，α-SMA蛋白的表达量逐渐下降，而E-cad蛋白的表达量逐渐增加，差异均有统计学意义（α-SMA：F=693．864，P=0．000；E-cad：F=369．286，P=0．000）。结论RAPA可抑制体外培养的SRA01／04增生，其作用呈剂量依赖性，此外RAPA具有抑制TGF-β2诱导的LECsETM作用，其作用呈剂量和时间依赖性。 展开更多
关键词 雷帕霉素 转化生长因子-Β2 人晶状体上皮细胞 上皮细胞一肌成纤维细胞转化
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异补骨脂素对人晶状体上皮细胞雌激素受体表达的上调作用 被引量：6
5
作者 黄秀榕 祁明信 +1 位作者 张可丽 郭娜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1844-1848,共5页
目的:研究人晶状体上皮细胞(HLECs)雌激素受体(ER)表达的情况及中药植物雌激素异补骨脂素(ISR)对ER表达的影响,为中药植物雌激素防治老年性白内障提供实验依据。方法:本研究将ISR与HLEC共同孵育,以雌二醇(E2)作为阳性对照,再用H2O2对HL... 目的:研究人晶状体上皮细胞(HLECs)雌激素受体(ER)表达的情况及中药植物雌激素异补骨脂素(ISR)对ER表达的影响,为中药植物雌激素防治老年性白内障提供实验依据。方法:本研究将ISR与HLEC共同孵育,以雌二醇(E2)作为阳性对照,再用H2O2对HLECs造成氧化损伤后,采用流式细胞术检测不同浓度的ISR对ER蛋白表达的影响。结果:正常HLECs存在ERα、β的表达;H2O2组HLECsERα、β表达明显下降,与空白组比较差异显著(P<0.01);E2和ISR高、中、低浓度组HLECs的ERα、β表达明显升高,与H2O2组比较差异显著(P<0.01);且随ISR浓度的增高ERα、β表达逐渐升高,呈明显的浓度依赖关系。结论:E2、ISR能上调经H2O2处理的HLECs的ERα、ERβ表达,并呈明显的浓度依赖关系,其抗氧化损伤作用,可能是通过上调ERα、ERβ表达实现的。 展开更多
关键词 人晶状体上皮细胞 受体 雌激素 异补骨脂素 氧化性损伤 白内障
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地塞米松对人晶状体上皮细胞核转录因子κB及其抑制蛋白α的表达和细胞凋亡的影响 被引量：3
6
作者 王钧蔚 王林 +1 位作者 葛红岩 刘平 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期145-150,共6页
背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κB（NF—κB）／NF—κB抑制蛋白κ（IκBκ）表达的影响及LECs凋亡的发... 背景长期全身或眼局部应用糖皮质激素可诱导皮质类固醇性白内障，但其作用机制尚不明确。目的研究地塞米松作用于人晶状体上皮细胞（LECs）后对LECs中核转录因子κB（NF—κB）／NF—κB抑制蛋白κ（IκBκ）表达的影响及LECs凋亡的发生情况，了解皮质类固醇性白内障的发病机制。方法取人LECs系（HLE283）在含质量分数20％胎牛血清的DMEM中进行培养和传代。将不同浓度的地塞米松（0．01、0．1、1、10、100μmol／L）分别加入DMSO无血清DMEM培养液中作为不同浓度地塞米松组，不含地塞米松的DMSO无血清DMEM培养液培养的LECs作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blot、流式细胞术等方法，分别在基因水平、蛋白水平检测LECs中NF—κB／IκB α浓度的改变及LECs凋亡率的变化。结果扩增的基因片段与所设计片段大小一致。地塞米松作用后NF—α核蛋白在LECs中的表达量随着地塞米松浓度的增加而下降，差异有统计学意义（F=36．077，P=0．004）；IκBα蛋白的表达随着地塞米松浓度的增加而上升，差异有统计学意义（F=35．741，P=0．002）。在同浓度地塞米松组，NF—κB核蛋白在LECs中的表达量随作用时间的不同差异有统计学意义（F=16．606，P=0．01），与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48h时的NF—κB核蛋白表达量明显下降，差异有统计学意义（P=0．002；P=0．01）。与地塞米松作用24h时的表达量比较，36h和48hIκBα蛋白在LECs中的表达量明显增加，差异均有统计学意义（P=0．014；P=0．002）。流式细胞仪检测显示LECs的凋亡率随着地塞米松浓度的增加明显上升，与空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论地塞米松通过上调IκBα的表达而过度抑制了NF—κB的活性，并导致LECs凋亡，其作用呈浓度依赖性，这可能是皮质类固醇性白内障发生发展的细胞学和分子生物学机制之一。 展开更多
关键词 皮质类固醇性白内障 地塞米松 核转录因子ΚB 核转录因子κB抑制蛋白α 凋亡 人晶状体上皮细胞
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SUMO蛋白在体外培养的人晶状体上皮细胞内的表达及对氧化应激的调控作用 被引量：2
7
作者 韩笑 王欣玲 +2 位作者 吴迪 张劲松 阎启昌 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期193-198,共6页
目的：观察小泛素相关修饰物（SUMO）在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系（SRA01/04）内的表达以及由高糖诱导的氧化应激条件下SUMO的变化，探讨其对氧化应激的调控作用。方法通过免疫细胞化学染色法，检测SUMO1，2/3，4蛋白在正常培养... 目的：观察小泛素相关修饰物（SUMO）在体外正常培养的人晶状体上皮细胞系（SRA01/04）内的表达以及由高糖诱导的氧化应激条件下SUMO的变化，探讨其对氧化应激的调控作用。方法通过免疫细胞化学染色法，检测SUMO1，2/3，4蛋白在正常培养的SRA01/04内的表达及分布；通过RT-PCR法，观察不同浓度和时间高糖处理时SUMO 1-4 mRNA的表达变化。按浓度实验分组：葡萄糖浓度分别为5.5、12.5、25、50 mmol/L作用24 h。按时间实验分组：葡萄糖浓度50 mmol/L作用0、6、12、24 h。将GFP-SUMO2质粒转入细胞后通过CCK8检测法和AV/PI双染流式细胞仪检测高糖（50 mmol/L）处理后，转染与非转染组的细胞存活率和细胞凋亡率。结果免疫细胞化学染色结果，SUMO 1-4蛋白在SRA01/04细胞内主要分布于细胞核，SUMO 2/3同时少量分布于胞质；RT-PCR结果可见，与低糖组比较，高糖组随着糖浓度增加SUMO1-SUMO4 mRNA表达增加（P〈0.05）；与50 mmol/L高糖处理0 h比较，随着处理时间增加SUMO1-SUMO4 mRNA表达增加（P〈0.05）。与非转染组比较，转染GFP-SUMO2的SRA01/04经高糖处理后存活率增加，凋亡率降低（P〈0.05）。结论 SUMO蛋白在SRA01/04内阳性表达，一定程度高糖诱导的氧化应激影响SUMO mRNA表达。 展开更多
关键词 小泛素相关修饰物 人晶状体上皮细胞 白内障 高糖 氧化应激
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小白菊内酯对氧化应激诱导人晶状体上皮细胞凋亡的防护作用 被引量：3
8
作者 汤霞靖 姚克 +1 位作者 叶盼盼 姚航平 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2007年第11期854-857,共4页
目的探讨植物成分小白菊内酯对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的保护作用及其作用机制。方法人LECs(SRA01-04)用50μmol/L的H2O2诱导凋亡,同时加入不同浓度(0、10、20、50μmol/L)的小白菊内酯观察细胞形态变化;用流... 目的探讨植物成分小白菊内酯对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的保护作用及其作用机制。方法人LECs(SRA01-04)用50μmol/L的H2O2诱导凋亡,同时加入不同浓度(0、10、20、50μmol/L)的小白菊内酯观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞凋亡,用实时定量反转录PCR以及Westernblot检测caspase-3和caspase-9的表达。结果H2O2能明显诱导人LECs凋亡,促进caspase-3和caspase-9在转录水平和蛋白水平的表达;小白菊内酯能明显抑制H2O2诱导的人LECs凋亡,抑制caspase-3和caspase-9的表达,而作用呈浓度依从性。结论小白菊内酯对氧化应激诱导的人LECs凋亡具有保护作用,提示可能对白内障的发生具有潜在的防治作用。 展开更多
关键词 小白菊内酯 人晶状体上皮细胞 过氧化氢 凋亡 白内障
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干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因19表达与紫外线诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的关系 被引量：2
9
作者 王思敏 冯浩 +2 位作者 林婷婷 刘加勇 宁宏 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期358-361,共4页
背景长期暴露于紫外线照射的环境中可通过破坏细胞线粒体的跨膜电位等机制促进相应组织中的细胞凋亡，包括人晶状体上皮细胞（LECs）。干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）位于线粒体呼吸链Ⅰ上，与紫外线照射诱导的LECs... 背景长期暴露于紫外线照射的环境中可通过破坏细胞线粒体的跨膜电位等机制促进相应组织中的细胞凋亡，包括人晶状体上皮细胞（LECs）。干扰素／维甲酸诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）位于线粒体呼吸链Ⅰ上，与紫外线照射诱导的LECs凋亡过程是否有关尚不明确。目的探讨GRIM-19与长波紫外线照射诱导的人LECs损伤的关系。方法将人LECs系SRA01／04用常规培养方法在含质量分数10％胎牛血清的α-MEM培养液中进行培养，当细胞生长至对数生长期并达到80％融合时用长波紫外线照射，时间分别为5、10、15、20、25min，长波紫外线剂量分别为30、60、90、120、150mJ／cm^2，照射后继续培养1h，对照组细胞与实验组培养方法相同，但不用长波紫外线照射。采用流式细胞技术测定各组培养的凋亡率，应用Westernblot法检测各组培养上清液中GRIM-19蛋白的表达强度和相对表达量，采用单因素方差分析法对不同组间LECs凋亡率和GRIM-19蛋白相对表达量的差异进行比较，用Pearson积矩线性相关分析法评估LECs凋亡率与GRIM-19蛋白相对表达量的关系。结果不同剂量的紫外线照射培养的LECs后各组细胞凋亡率的总体比较差异有统计学意义（F=149．32，P〈0．01），其中60、90、120及150mJ／em。紫外线照射组与对照组比较，细胞凋亡率均明显增加，差异均有统计学意义（q=-17．02、-25．20、-29．41、-8．61，P〈0．01）。不同剂量的紫外线照射培养的LECs后细胞上清液中GRIM·19的表达明显增强，各组LECs上清液中GRIM-19的相对表达量（GRIM-19／β-actin）的总体差异有统计学意义（F=6．87，P〈0．05），其中60、90、120、150mJ／cm。紫外线照射组细胞上清液中GRIM-19的相对表达量分别为2．01±O．76、2．98±1．80、3．97±1．61和2．42±1．28，均明显高于对照组的0．56±0．23，差异均有统计学意义（q=-4．12、-5．04、-7．09、-3．85，P〈0．01）。Pearson积矩线性相关分析结果表明，LECs上清液中GRIM-19蛋白的相对表达量与LECs凋亡率呈正相关（r=0．7I，P〈0．01）。结论正常人LECs中可见GRIM-19的表达，但紫外线引起的人LECs凋亡过程与细胞中GRIM-19的表达上调-致；GRIM-19蛋白相对表达量与长波紫外线照射呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 干扰素 维甲酸诱导细胞凋亡相关基因19 人晶状体上皮细胞 长波紫外线 细胞凋亡
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紫外线照射对人晶状体上皮细胞内ALDH1蛋白表达的影响 被引量：2
10
作者 石晶明 贾松柏 +1 位作者 陈翾 唐罗生 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期572-577,共6页
目的:通过对紫外线(ultraviolet,UV)照射后人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)ALDH1蛋白表达变化的观察,探讨UV诱导HLEC凋亡的可能机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一UV光源对HLEC进行照射。按UV... 目的:通过对紫外线(ultraviolet,UV)照射后人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)ALDH1蛋白表达变化的观察,探讨UV诱导HLEC凋亡的可能机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一UV光源对HLEC进行照射。按UV照射时间将HLEC分为0,5,10,15及30 min组,用AO/EB染色法检测细胞凋亡,用免疫组织化学的方法观察ALDH1在各组的表达,用Western印迹对其蛋白含量进行测定。结果:ALDH1免疫组织化学染色阳性细胞率随着UV照射时间延长而降低(P<0.05),与HLEC凋亡率间呈负相关(r=–0.92,P<0.05);Western印迹灰度值随UV照射时间延长逐渐下降(P<0.05)。结论:HLEC内ALDH1含量随UV照射时间及剂量增加而下降,这可能与UV导致的HLEC凋亡相关。 展开更多
关键词 紫外线 人晶状体上皮细胞 醛脱氢酶1 凋亡 白内障
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紫外线B照射对人晶状体上皮细胞质膜钙ATP酶3表达的影响 被引量：3
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作者 吴秋欣 郭大东 +1 位作者 毕宏生 王道光 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期485-491,共7页
背景 细胞质膜钙ATP酶3（PMCA3）参与维持晶状体上皮细胞（LECs） Ca2＋的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B（UVB）是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的 研究UVB对人LECs系B-3（HLE B-3） P... 背景 细胞质膜钙ATP酶3（PMCA3）参与维持晶状体上皮细胞（LECs） Ca2＋的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B（UVB）是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的 研究UVB对人LECs系B-3（HLE B-3） PMCA3表达的影响. 方法 对HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时分别暴露于用不同剂量（0、5、10、20 mJ·s/cm2）的UVB分别照射0、20、40和80 s,然后继续培养24、48和72 h,用MTT法检测不同剂量UVB照射后细胞的生存率;用JC-1染色法检测UVB照射后细胞线粒体膜电位（△ψm）的变化;以DCFH-DA染色法检测UVB照射后细胞内活性氧簇（ROS）的变化;采用annexin V-FITC/PI染色法检测UVB照射后细胞的凋亡情况;用Fluo-3/AM染色法检测细胞内Ca2＋浓度的变化;分别采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）法和Western blot法检测UVB照射后细胞中PMCA3 mRNA及PMCA蛋白的表达变化. 结果 随着UVB照射剂量的增加和照射时间的延长,细胞生存率均明显下降,差异均有统计学意义（F分组=72.411,P=0.000; F时间=36.588,P=0.000）,其中10 mJ·s/cm2、20 mJ·s/cm2 UVB照射后24 h HLE B-3细胞的生存率分别为（75.3±2.2）％和（48.7±4.5）％,明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.001、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后48 h细胞的生存率分别为（84.9±1.2）％、（69.3±17.4）％和（32.8±4.5）％,均明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.047、0.000、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后72 h细胞的生存率分别为（55.1±3.0）％、（42.1±1.9）％和（26.1±4.7）％,与对照组的（100.0±0.0）％相比生存率明显降低,差异均有统计学意义（均P=0.000）.JC-1染色法检测表明,对照组细胞内可见红色荧光,5mJ·s/cm2 UVB照射后细胞内出现绿色荧光,10 mJ·s/cm2及20 mJ·s/cm2 UVB照射组出现绿色荧光增强,红色荧光减弱.5、10、20 mJ· s/cm2 UVB照射后细胞内的ROS由0.4％分别增加至35.8％、51.9％和76.7％.0 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞比例为2.0％,5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞率分别为4.2％、7.6％和15.1％.10 mJ·s/cm2和20 mJ·s/cm2 UVB照射组细胞内Ca2＋水平分别为0 mJ·s/cm2照射组的（1.2±0.1）倍和（1.3±0.1）倍,差异均有统计学意义（P=0.039、0.004）.5、10和20 mJ·s/cm2 UVB照射组HLE B-3细胞PMCA3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.001、0.004、0.000）,各组细胞中的PMCA蛋白相对表达量也均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.000、0.000、0.001）. 结论 UVB照射可导致白内障发生的机制可能与人LECs中PMCA3表达量下降和诱导LECs凋亡有关,UVB的作用呈剂量和时间依赖性. 展开更多
关键词 紫外线B 钙稳态 质膜钙ATP酶3 细胞凋亡 人晶状体上皮细胞
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去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株凋亡的影响 被引量：3
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作者 张鸿侃 谭少健 +2 位作者 梁皓 李霞 陈迎迎 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第9期667-670,共4页
目的探讨去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04用于实验。分别用含有不同浓度(80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1)kistrin的完全培养基孵育8h、16h、32h,然后... 目的探讨去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04用于实验。分别用含有不同浓度(80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1)kistrin的完全培养基孵育8h、16h、32h,然后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并与阴性对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。用含kistrin的终浓度为160μg.L-1的培养基孵育细胞,于24h、32h后进行吖啶橙染色,倒置相差荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化,并与对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。结果kistrin作用8h时,阴性对照组与80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1kistrin孵育细胞组细胞凋亡率分别为(1.29±0.43)%、(5.48±0.66)%、(11.23±1.16)%、(20.77±1.46)%,kistrin作用16h时不同组别细胞凋亡率分别为(3.04±0.12)%、(7.68±0.23)%、(19.76±2.22)%、(32.36±3.29)%,kistrin作用32h时不同组别细胞凋亡率分别为(4.75±0.08)%、(72.15±7.04)%、(54.09±3.77)%、(43.27±3.32)%;在每个时间点各浓度的细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.01)。与对照组相比,浓度为160μg.L-1的kistrin作用24h后,细胞形态可见改变,kistrin作用32h后细胞出现明显的各种凋亡形态学改变。结论去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04有诱导凋亡的作用,为药物防治后发性白内障提供了新思路。 展开更多
关键词 去整合素 人晶状体上皮细胞株 凋亡 流式细胞仪 吖啶橙染色
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miR-29a抑制H_2O_2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤 被引量：2
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作者 李海燕 郭琳 +2 位作者 张倩 唐莉 马波 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第3期233-237,共5页
目的探究miR-29a在H_2O_2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤中的作用和机制。方法使用不同浓度(0μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、300μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1))的H_2O_2处理人晶状体上... 目的探究miR-29a在H_2O_2诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤中的作用和机制。方法使用不同浓度(0μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、300μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1))的H_2O_2处理人晶状体上皮细胞HLE-B3,以确定后续实验中H_2O_2使用的浓度。将HLE-B3细胞随机分成4组:对照组、H_2O_2组、H_2O_2+模拟物对照组和H_2O_2+miR-29a模拟物组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,Real-time PCR检测miR-29a和Bcl2修饰因子(Bcl2 modifying factor,BMF)、Bcl2拮抗/杀伤因子1(Bcl2-antagonist/killer 1,BAK1) mRNA表达,Western blotting检测BMF和BAK1蛋白表达。结果 HLE-B3细胞活力随着H_2O_2浓度的增加而降低,呈现剂量依赖性,后续实验H_2O_2浓度选择200μmol·L^(-1)。与对照组相比,H_2O_2组中miR-29a的表达(0.56±0.12)下调,细胞活力[(59.67±10.09)%]和SOD含量[(52.97±6.64)U·mL^(-1)]降低,细胞凋亡率[(40.30±4.76)%]和ROS水平[(299.52±43.95)%]增加,BMF和BAK1 mRNA和蛋白表达均上调,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与H_2O_2组相比,H_2O_2+miR-29a模拟物组中miR-29a的表达(4.49±0.55)上调,细胞活力[(92.83±8.09)%]和SOD含量[(84.03±6.31)U·mL^(-1)]增加,细胞凋亡率[(18.74±2.48)%]和ROS水平[(143.13±21.32)%]降低,BMF和BAK1 mRNA和蛋白表达均下调,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与H_2O_2组相比,H_2O_2+模拟物对照组上述指标变化均不大,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论上调miR-29a可促进H_2O_2诱导的人晶状体上皮细胞的细胞增殖、抑制细胞凋亡、减少氧化损伤,这些作用可能与BMF和BAK1的表达下调相关。 展开更多
关键词 miR-29a H2O2 人晶状体上皮细胞 氧化损伤
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茶黄素对葡萄糖诱导的人晶状体上皮细胞一氧化氮合成的影响 被引量：3
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作者 牛丽 曹佩琴 刘仲华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期369-372,共4页
为探明茶黄素–3,3’–双没食子酸酯（TFDG）对人晶状体上皮细胞SRA01/04（Human lens epithelial cells,HLECs SRA01/04）的保护作用,采用MTT法建立高浓度葡萄糖（HG）诱导的HLECs损伤模型,同时观察HLECs细胞形态的变化。用不同浓度（4... 为探明茶黄素–3,3’–双没食子酸酯（TFDG）对人晶状体上皮细胞SRA01/04（Human lens epithelial cells,HLECs SRA01/04）的保护作用,采用MTT法建立高浓度葡萄糖（HG）诱导的HLECs损伤模型,同时观察HLECs细胞形态的变化。用不同浓度（4、8、16、64、32、64、128、256、512μmol/L）TFDG处理HLECs损伤细胞,采用化学比色法和硝酸还原法测定HLECs内一氧化氮（NO）的含量和一氧化氮合酶（NOS）的活性。结果表明：高浓度葡萄糖可以抑制人晶状体上皮细胞生长,用于HLECs损伤模型诱导的最佳葡萄糖浓度为50 mmol/L,最佳诱导时间为24 h；与未经处理的模型细胞相比,经浓度为16～64μmol/L TFDG处理的模型细胞的存活率显著提高（P〈0.05）；各个浓度的TFDG能极显著降低模型细胞内NOS的活性,极显著减少NO的合成（P〈0.01）,且呈浓度依赖性。以上结果表明,TFDG对高浓度葡萄糖诱导的HLECs细胞损伤具有较好的保护作用。 展开更多
关键词 茶黄素–3 3’–双没食子酸酯 人晶状体上皮细胞 一氧化氮 一氧化氮合酶 高浓度葡萄糖
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锌对3-吗啉-斯得酮亚胺(SIN-1)诱导的人晶状体上皮细胞Cu/Zn-SOD表达及活性的影响 被引量：3
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作者 贾义 宋萍萍 +1 位作者 周静 钟乃凤 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第1期24-27,共4页
目的研究补锌和缺锌条件下3-吗啉-斯得酮亚胺(SIN-1)对人晶状体上皮细胞铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)表达及活性的影响。方法将培养的SRA01/04细胞系分为6组:对照组、SIN-1处理组、补锌组、补锌联合SIN-1处理组、缺锌组和缺锌联合SIN-... 目的研究补锌和缺锌条件下3-吗啉-斯得酮亚胺(SIN-1)对人晶状体上皮细胞铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)表达及活性的影响。方法将培养的SRA01/04细胞系分为6组:对照组、SIN-1处理组、补锌组、补锌联合SIN-1处理组、缺锌组和缺锌联合SIN-1处理组。采用MTT法检测细胞存活率,Western blotting和Cu/Zn-SOD活性检测试剂盒分别检测Cu/Zn-SOD蛋白表达和活性水平的变化。结果我们选择对细胞存活率无显著影响的50μmol·L^(-1)ZnSO_4和1μmol·L^(-1)N,N,N,N-四-(2-吡啶基甲基)乙二胺作为补锌和缺锌的条件,选择对细胞存活率有显著影响的500μmol·L^(-1)SIN-1作为细胞受损的条件。在此条件下对照组、SIN-1处理组、补锌组、补锌联合SIN-1处理组、缺锌组和缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率分别为(100.0±1.4)%、(84.7±1.8)%、(101.2±1.6)%、(95.5±1.9)%、(100.9±2.3)%和(75.3±1.2)%,与对照组相比,SIN-1处理组和缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率均显著下降(均为P<0.05),与SIN-1处理组相比,补锌联合SIN-1处理组的细胞存活率显著升高(P<0.05),缺锌联合SIN-1处理组的细胞存活率则进一步下降(P<0.05)。各组的Cu/Zn-SOD蛋白相对表达量分别为1.005±0.007、0.991±0.015、1.044±0.008、0.945±0.007、1.278±0.011和0.850±0.057,Cu/Zn-SOD活性分别为(1.00±0.03)U、(0.85±0.05)U、(1.69±0.04)U、(1.35±0.05)U、(1.52±0.04)U和(1.09±0.03)U。与对照组相比,补锌组和缺锌组Cu/Zn-SOD蛋白表达量和活性均显著增加(均为P<0.05)。分别与补锌组或缺锌组相比,补锌联合SIN-1处理组和缺锌联合SIN-1处理组的Cu/Zn-SOD蛋白表达水平和活性均显著下降(均为P<0.05)。结论补锌可以通过上调Cu/Zn-SOD的表达水平和活性,保护人晶状体上皮细胞抵抗由SIN-1造成的损伤,可能对白内障的形成有抑制作用。 展开更多
关键词 人晶状体上皮细胞 锌 铜锌超氧化物歧化酶
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生理低氧对人晶状体上皮细胞系基因表达谱的影响 被引量：2
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作者 王嵩 梅林 +3 位作者 闫博 杨安钢 赵晶 严宏 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第5期409-412,共4页
目的探讨生理低氧条件下与常规氧环境下培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)在抗氧化能力及基因表达谱上的差异。方法 HLEC传代培养24 h后,分别置于体积分数21%常氧培养箱、体积分数1%低氧培养箱孵育24 h,消化、... 目的探讨生理低氧条件下与常规氧环境下培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)在抗氧化能力及基因表达谱上的差异。方法 HLEC传代培养24 h后,分别置于体积分数21%常氧培养箱、体积分数1%低氧培养箱孵育24 h,消化、超速离心后收集细胞上清分别检测SOD、CAT活性以及GSH含量,Trizol提取细胞总RNA进氉行基因表达谱检测,生物信息学软件DAVID分析差异基因的功能聚类,qRT-PCR验证差异基因。结果低氧组细胞的SOD、CAT酶活性及GSH含量均低于常氧组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。表达谱芯片结果显示:符合差异表达标准的基因中,在低氧组细胞上调的基因有319个,下调的基因有83个。Gene Ontology分析显示:319个上调基因聚类于148个功能分类中,富集值最高的功能分类为低氧反应。选取5个上调基因进行qRT-PCR验证显示:DDIT4、VEGFA、EDN1、VLDLR、EGLN1在低氧组中的表达量均高于常氧组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论生理低氧状态下HLEC的抗氧化能力弱于常氧组,两种氧环境下细胞的基因表达谱不同,提示相应的抗氧化损伤机制可能存在差异。 展开更多
关键词 人晶状体上皮细胞 生理低氧 基因表达谱
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复方SZ滴眼液和阿魏酸钠对紫外线损伤的人晶状体上皮细胞抗氧化酶及其基因表达的影响 被引量：2
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作者 黄秀榕 祁明信 严京 《中华中医药学刊》 CAS 2010年第5期904-907,共4页
目的:研究复方SZ滴眼液(Compound shui zhi eye drop,SZ)和阿魏酸钠(Sodium ferulate,SF)对紫外线(Ultraviolet,UV)损伤的人晶状体上皮细胞抗氧化酶及其基因表达的影响。方法:采用UV照射体外培养的人晶状体上皮细胞(Human lens epitheli... 目的:研究复方SZ滴眼液(Compound shui zhi eye drop,SZ)和阿魏酸钠(Sodium ferulate,SF)对紫外线(Ultraviolet,UV)损伤的人晶状体上皮细胞抗氧化酶及其基因表达的影响。方法:采用UV照射体外培养的人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cell,HLEC),同时用SZ、SF和吡喏克辛钠滴眼液(Pirenoxine sodium,PS)与HLEC共同孵育,并检测HLEC中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathi-one peroxidase,GSH-px)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活性和SODmRNA、GSH-pxmRNA和CATmRNA的基因表达。结果:UV组的HLEC抗氧化酶活性和基因表达均比对照组显著降低(P<0.01)。SZ、SF和PS组的SOD、GSH-px和CAT的活性显著高于UV组(P<0.01,P<0.05);SODmRNA、GSH-pxmRNA和CATmRNA的表达也显著高于UV组(P<0.01)。结论:SZ、SF和PS均能防护UV照射引起的HLEC氧化损伤,SZ和SF的作用优于PS。 展开更多
关键词 白内障 人晶状体上皮细胞 紫外线 氧化损伤 基因表达 复方SZ滴眼液 阿魏酸钠
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miRNA-184在TGF-β_2诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的表达 被引量：2
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作者 丁芝祥 陈阳 +1 位作者 秦贤杰 姚微微 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第12期1116-1120,共5页
目的研究miRNA-184(miR-184)在转化生长因子β_2(transforming growth factor β_2,TGF-β_2)诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义。方法应用不同浓度(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg... 目的研究miRNA-184(miR-184)在转化生长因子β_2(transforming growth factor β_2,TGF-β_2)诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义。方法应用不同浓度(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)、15μg·L^(-1))TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,细胞免疫荧光和Western blot方法观察转分化相关分子波形蛋白(Vimentin)、钙黏附蛋白E(E-Cadherin)的表达;应用qRT-PCR检测miR-184在不同浓度(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)、15μg·L^(-1))TGF-β_2、不同作用时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h)TGF-β_2(10μg·L^(-1))诱导人晶状体上皮细胞转分化中的表达变化。结果随着TGF-β_2浓度的增加,细胞胞浆中Vimentin荧光强度增强;E-Cadherin蛋白表达逐渐减少,各组细胞间E-Cadherin表达量差异有统计学意义(F=87.617,P<0.01);Vimentin蛋白表达逐渐增加,各组细胞间Vimentin表达量差异有统计学意义(F=68.923,P<0.01)。随着TGF-β_2浓度的增加,细胞中miR-184相对表达量增多,在10μg·L^(-1) TGF-β_2诱导组达到峰值;随着TGF-β_2诱导时间的延长,细胞中miR-184相对表达量增加,在24 h表达达到峰值。结论 TGF-β_2诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化时细胞内miR-184表达增加,并与诱导浓度和时间有关,为进一步研究miR-184在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的作用及机制提供实验基础。 展开更多
关键词 转化生长因子-β_2 人晶状体上皮细胞 miRNA-184 上皮-间质转分化
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复方水蛭滴眼液防护人晶状体上皮细胞紫外线损伤的蛋白质组学研究 被引量：2
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作者 黄秀榕 祁明信 严京 《中华中医药学刊》 CAS 2009年第3期453-457,共5页
目的:探讨复方水蛭滴眼液(SZ)防护人晶状体上皮细胞紫外线(UV)损伤的蛋白质组学机制,为将SZ作为防治白内障的有效药物提供实验依据。方法:采用SZ与人晶状体上皮细胞系HLE-B3细胞(HLEC)共同孵育,以吡喏克辛滴眼液(PS)作为阳性对照,经UV照... 目的:探讨复方水蛭滴眼液(SZ)防护人晶状体上皮细胞紫外线(UV)损伤的蛋白质组学机制,为将SZ作为防治白内障的有效药物提供实验依据。方法:采用SZ与人晶状体上皮细胞系HLE-B3细胞(HLEC)共同孵育,以吡喏克辛滴眼液(PS)作为阳性对照,经UV照射HLEC后,采用双向凝胶电泳(2-DE)和质谱(MS)技术,寻找HLEC有效的功能蛋白及SZ作用靶点。结果:①UV组与正常组比较:发现13个差异点。其中表达上调的差异点有5个,经质谱鉴定为:T复合蛋白1β亚基、核内不均一核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、阻抑素(pro-hibitin)4种蛋白质;表达下调的差异点有8个,经质谱鉴定为:波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶3种蛋白质。②SZ组与UV组比较:发现12个差异蛋白点。其中表达上调的差异点8个,经质谱鉴定为:波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶3种蛋白质;表达下调的差异点4个,经质谱鉴定为:核内不均一核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、角蛋白8Ⅱ和阻抑素4种蛋白质。结论:SZ可使UV照射引起HLEC下调的3种蛋白质(波形蛋白、半胱氨酰tRNA合成酶、锰超氧化物歧化酶)上调,又可使UV照射引起上调的4种蛋白质中的3种蛋白质下调(核内不均一核糖核蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、阻抑素)。说明在SZ防护UV损伤中,以上6种蛋白质可能起重要作用。 展开更多
关键词 水蛭 人晶状体上皮细胞 紫外线 蛋白质组 白内障
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丹酚酸A(SalA)对H_2O_2诱导的氧化应激损伤人晶状体上皮细胞增殖、凋亡、超微结构及炎症反应的作用 被引量：4
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作者 杨洪涛 赵静 +2 位作者 王媛媛 禹鑫 裴存文 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第8期724-727,731,共5页
目的探讨丹酚酸A(salvianolic acid A,Sal A)对H_2O_2诱导的氧化应激损伤人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)增殖、凋亡、超微结构及炎症反应的作用。方法将HLEC SRA01/04细胞传代培养后,用不同浓度(50μmol·L^(... 目的探讨丹酚酸A(salvianolic acid A,Sal A)对H_2O_2诱导的氧化应激损伤人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)增殖、凋亡、超微结构及炎症反应的作用。方法将HLEC SRA01/04细胞传代培养后,用不同浓度(50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1)、800μmol·L^(-1))H_2O_2处理培养24 h,通过MTT法检测细胞存活率,筛选H_2O_2最佳作用浓度,作为细胞模型组使用浓度。对照组细胞用正常完全培养液培养。Sal A干预组将细胞先在含50μmol·L^(-1)Sal A培养液中预孵育24 h,后加入最佳作用浓度H_2O_2继续培养24 h。而后采用MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构,Western blot检测各组细胞炎症相关蛋白IL-1β、IL-18、TNF-α的表达情况。结果MTT法检测结果显示不同浓度H_2O_2(50μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1)、800μmol·L^(-1))处理组细胞存活率分别为61.26%±3.35%、47.81%±2.63%、29.53%±2.54%、21.47%±2.26%、14.97%±1.82%,各浓度处理组细胞存活率和对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。其中,100μmol·L^(-1)H_2O_2处理组细胞存活率最接近半数致死量,故选择100μmol·L^(-1)H_2O_2作为氧化应激损伤模型浓度用于后续实验。Sal A干预组细胞存活率为82.54%±3.07%,比100μmol·L^(-1)H_2O_2模型组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,对照组细胞凋亡率为4.06%±0.41%,H_2O_2模型组细胞凋亡率为20.52%±3.29%,Sal A干预组细胞凋亡率为12.35%±1.48%,H_2O_2模型组和Sal A干预组细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察结果显示H_2O_2诱导产生了明显的细胞超微结构损伤,线粒体、内质网数目减少,分泌颗粒减少,胞核体积缩小,可见少数细胞核内异染色质增多甚至聚集成块状。Sal A预处理后,细胞损伤的超微结构出现一定程度改善,如细胞形态较规则,细胞器线粒体、内质网数目增多,空泡数量减少,染色质分布基本均匀。Western blot检测结果显示,H_2O_2引起的氧化损伤会显著提高IL-1β、IL-18、TNF-α表达,Sal A可以在一定程度上降低IL-1β、IL-18、TNF-α的表达。结论Sal A可以有效增加H_2O_2诱导的氧化应激损伤HLEC的增殖,抑制细胞凋亡,减小细胞超微结构损伤性改变,降低IL-1β、IL-18、TNF-α表达。 展开更多
关键词 丹酚酸A 人晶状体上皮细胞 H2O2 细胞增殖 细胞凋亡 细胞超微结构 炎症反应
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