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人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达
1
作者 杨海 王芳宇 +3 位作者 李青旺 胡建宏 董潇潇 单永红 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第10期32-36,共5页
【目的】建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法,为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】以人AT cDNA序列为模板,设计1对反向扩增引物,进行反向PCR反应;PCR产物经连接、测序后,克隆至表达质粒pc... 【目的】建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法,为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】以人AT cDNA序列为模板,设计1对反向扩增引物,进行反向PCR反应;PCR产物经连接、测序后,克隆至表达质粒pcDNA3.1(+)-GFP上,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mATGFP;用重组载体介导突变基因在山羊乳腺上皮(GME)细胞内表达,收集细胞培养上清液进行表达产物的定性、定量检测。【结果】突变基因经测序证实与预期结果一致,且在GME细胞内得到高效表达,细胞培养液上清中的突变体质量浓度为(526±17.3)mg/L。【结论】反向PCR法是对AT基因进行定点突变的可靠方法,AT突变基因在GME细胞内可高效表达。 展开更多
关键词 反向PCR 人抗凝血酶 Cys248 定点突变 真核表达
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从1升山羊乳成功地分泌7克AT-Ⅲ
2
作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第5期20-20,共1页
美国Genzyme Trangenies公司从1升重组山羊乳汁中以工业水平生产7克人抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)。该公司决定作为以动物工厂生产的第一种医药品开发AT-Ⅲ,并着手工业化。去年11月已向美国食品与药物管理局(FDA)申报。为进入临床试验与FDA商谈重... 美国Genzyme Trangenies公司从1升重组山羊乳汁中以工业水平生产7克人抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)。该公司决定作为以动物工厂生产的第一种医药品开发AT-Ⅲ,并着手工业化。去年11月已向美国食品与药物管理局(FDA)申报。为进入临床试验与FDA商谈重组AT-Ⅲ的安全性评价法和GMP标准(优良制造规范)等。 展开更多
关键词 山羊乳 AT 羊乳汁 人抗凝血酶Ⅲ 医药品 安全性评价 工业水平 缺乏症 膝关节置换手术 销售权
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医药其他
3
《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第3期80-89,共10页
910879 生产人抗凝血酶Ⅲ的重组CHO和BHK细胞系的代谢商[英]/Sehmid,G.…// Biotcehnol.Lett.-1990,12(5).-317～322[译自DBA,1990,9(15),90—08751]重组CHO和BHK细胞各自独立地生长在Iscove’s培养基的细胞悬液中,该培养基含0.01%或0.1... 910879 生产人抗凝血酶Ⅲ的重组CHO和BHK细胞系的代谢商[英]/Sehmid,G.…// Biotcehnol.Lett.-1990,12(5).-317～322[译自DBA,1990,9(15),90—08751]重组CHO和BHK细胞各自独立地生长在Iscove’s培养基的细胞悬液中,该培养基含0.01%或0.1%小牛血清、 展开更多
关键词 人抗凝血酶Ⅲ 细胞培养物 分子克隆 基因片段 蛋白纯度 表达载体 重链可变区 链霉菌 小牛血清 细胞系
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