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人噬菌体抗体库中异常重组子的分析
被引量：
4
1
作者
王琰
王刚
化冰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期63-66,共4页
目的 阐明在噬菌体抗体库技术中，选择适当限制性内切酶酶切位点的重要性，并介绍人抗体可变区胚系基因的限制酶谱。方法 从正常人外周血提取淋巴细胞总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增 ＩｇＭ和哪 的 Ｆｄ片段及ｋ链基因，重组到载体ｐ３...
目的 阐明在噬菌体抗体库技术中，选择适当限制性内切酶酶切位点的重要性，并介绍人抗体可变区胚系基因的限制酶谱。方法 从正常人外周血提取淋巴细胞总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增 ＩｇＭ和哪 的 Ｆｄ片段及ｋ链基因，重组到载体ｐ３ＭＨ中构建噬菌体抗体库。以限制性内切酶消化及电泳分析所获重组克隆；用ＰＣＧＥＮＥ软件分析人抗体可变区胚系基因的限制性内切酶谱。结果 在构建抗体库的过程中，发现高频率的异常重组子克隆。经序列分析证实，在人Ｖ＿Ｈ基因片段中，存在用于克隆轻链的ＳａｃＩ位点。对人全部功能性可变区胚系基因进行限制性内切酶谱分析，发现人 Ｖ＿Ｈ第Ⅳ家族的 １１个成员均含有ＳａｃＩ位点，其它限制酶切位点在抗体可变区胚系基因中具有不同的出现率。结论 构建抗体库时，用于重组可变区基因的酶切位点，对库的构建具有重要的影响，因此，应对表达载体所用的限制性内切酶进行精心选择。现在比较广泛使用的ｐＣＯＭＢ系统载体不利于良好性能抗体库的构建。
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关键词
人抗体可变区基因
抗体
库
限制性内切酶
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职称材料
题名
人噬菌体抗体库中异常重组子的分析
被引量：
4
1
作者
王琰
王刚
化冰
机构
海军总医院中心实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期63-66,共4页
基金
全军医药卫生"十五"重点项目资助
NO.01Z015
文摘
目的 阐明在噬菌体抗体库技术中，选择适当限制性内切酶酶切位点的重要性，并介绍人抗体可变区胚系基因的限制酶谱。方法 从正常人外周血提取淋巴细胞总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ扩增 ＩｇＭ和哪 的 Ｆｄ片段及ｋ链基因，重组到载体ｐ３ＭＨ中构建噬菌体抗体库。以限制性内切酶消化及电泳分析所获重组克隆；用ＰＣＧＥＮＥ软件分析人抗体可变区胚系基因的限制性内切酶谱。结果 在构建抗体库的过程中，发现高频率的异常重组子克隆。经序列分析证实，在人Ｖ＿Ｈ基因片段中，存在用于克隆轻链的ＳａｃＩ位点。对人全部功能性可变区胚系基因进行限制性内切酶谱分析，发现人 Ｖ＿Ｈ第Ⅳ家族的 １１个成员均含有ＳａｃＩ位点，其它限制酶切位点在抗体可变区胚系基因中具有不同的出现率。结论 构建抗体库时，用于重组可变区基因的酶切位点，对库的构建具有重要的影响，因此，应对表达载体所用的限制性内切酶进行精心选择。现在比较广泛使用的ｐＣＯＭＢ系统载体不利于良好性能抗体库的构建。
关键词
人抗体可变区基因
抗体
库
限制性内切酶
Keywords
Human antibody V genes
antibody library
restric- tion enzyme
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人噬菌体抗体库中异常重组子的分析
王琰
王刚
化冰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002
4
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