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MT01对感染状态人成骨样细胞内ALP活性及mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 高涵 申玉芹 +5 位作者 刘引 胡天琦 费鸿博 顾中一 李洋洋 林崇韬 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期580-583,共4页
目的:通过检测MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的人成骨样细胞内特异性成骨相关因子ALP活性及mRNA表达水平的改变,探讨MT01对感染状态下人成骨样细胞成骨向分化的影响。方法:选取状态良好的MG63细胞接种于6孔板内,2个MT01组加入质量浓度为1mg/... 目的:通过检测MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的人成骨样细胞内特异性成骨相关因子ALP活性及mRNA表达水平的改变,探讨MT01对感染状态下人成骨样细胞成骨向分化的影响。方法:选取状态良好的MG63细胞接种于6孔板内,2个MT01组加入质量浓度为1mg/L的MT01,共孵育3h后,相应组加入感染复数为100∶1的Pg菌悬液。实验分为:空白对照、MT01、Pg和MT01+Pg4组,碱性磷酸酶测试盒测定24h后上清液及细胞内ALP活性。Real-time PCR检测2、4、6、8、12、24h特异性成骨相关因子ALP mRNA的表达。结果:在感染与非感染情况下,MT01均可促进ALP活性,且上调MG63细胞内成骨相关因子ALP mRNA表达,其表达上调呈时间依赖性。结论:MT01可促进感染及非感染状态下MG63内ALP基因表达水平,提高ALP活力。 展开更多
关键词 人成骨样细胞MG63 牙龈卟啉单胞菌 特定序列寡核苷酸MT01 碱性磷酸酶
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IRAK-4基因沉默对人成骨样细胞凋亡的影响
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作者 杨子波 傅明 +3 位作者 张紫机 黄保丁 张志奇 廖威明 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期672-680,共9页
【目的】研究siRNA沉默白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)基因对人成骨样细胞株MG63凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。【方法】以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞(CON组:不加入任何转染试剂;SC组:以scr... 【目的】研究siRNA沉默白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)基因对人成骨样细胞株MG63凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。【方法】以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞(CON组:不加入任何转染试剂;SC组:以scrambled siRNA序列进行转染;KD组:以特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染),应用流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡水平,western blotting检测Bcl-2、Bax基因的表达。【结果】与对照组相比,靶基因沉默组(KD组)细胞的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低;转染48h后,KD组细胞增殖变缓,凋亡增加,Bcl-2蛋白的表达明显下调且Bcl-2/BaxSC>Bcl-2/BaxKD;Spearman等级相关分析显示MG63细胞凋亡比例与Bcl-2/Bax的比值间有显著的相关性。【结论】siRNA沉默IRAK-4基因能够诱导人成骨样细胞株MG63凋亡,且靶细胞凋亡水平与Bcl-2、Bax基因表达水平的比值相关。 展开更多
关键词 人成骨样细胞 IRAK-4 细胞凋亡 RNA干扰 基因沉默
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富血小板血浆对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响
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作者 王悦 刘春丽 +3 位作者 王静 杨旭芳 周延民 马英智 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期133-138,共6页
目的研究富血小板血浆(PRP)对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响,探讨PRP的生物学功能。方法采集健康志愿者的静脉血,两次离心法制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活后离心提取PRP萃取液。碱性磷酸酶(ALP)染色检测不同体积分数PRP(0、1%、2%、3%... 目的研究富血小板血浆(PRP)对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响,探讨PRP的生物学功能。方法采集健康志愿者的静脉血,两次离心法制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活后离心提取PRP萃取液。碱性磷酸酶(ALP)染色检测不同体积分数PRP(0、1%、2%、3%)对MG63分化活性的影响,碘化丙啶(PI)荧光染色观察PRP作用下MG63细胞形态的变化,免疫细胞化学检测PRP对MG63表达转化生长因子-β(TGF-β)的影响,扫描电子显微镜(SEM)观察PRP对MG63在人工骨材料表面生长情况的影响,CCK-8法检测PRP对MG63增殖活性的影响,流式细胞术(FCM)检测经PRP培养后不同时间MG63的细胞周期,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PRP作用下MG63中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)mRNA的表达量。结果 ALP检测见3%PRP组ALP阳性细胞染色最深,并随体积分数的增加染色强度增加,且PRP组细胞均出现不同程度的脱片现象。PI荧光染色见PRP组细胞核荧光染色较对照组增强。免疫细胞化学检测见3%PRP组TGF-β表达量最高(P<0.05)。SEM观察:PRP组材料表面MG63密集,生长状态良好。CCK-8法测定细胞增殖活性,显示4.8%PRP组吸光度A450 nm值高于对照组(P<0.05)。FCM检测表明:PRP组第2天S期细胞百分比高于对照组(P<0.05);第10天PRP组G0/G1期细胞百分比高于对照组(P<0.05);除第6天外,PRP组G2/M期细胞百分比均高于对照组。RT-PCR结果表明:PRP组MG63的Col-ⅠmRNA表达量较对照组明显上调。结论适宜体积分数的PRP对MG63的增殖、迁移和相关蛋白、基因的表达有促进作用,PRP具有统一、协调细胞生物学行为的作用。 展开更多
关键词 富血小板血浆 人成骨样细胞MG63 细胞增殖
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MT01/PEN复合物对人成骨样细胞MG63表达骨保护蛋白和核因子κB受体活化因子配体的影响 被引量:1
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作者 崔野 郑义 +3 位作者 申玉芹 侯旭 娄译心 孙新华 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期32-36,共5页
目的应用聚乙烯亚胺阳离子聚合物(PEN)载体装载寡脱氧核苷酸MT01,制备MT01/PEN复合物,检测该复合物对人成骨样细胞MG63表达骨保护蛋白(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的影响。方法制备3种不同配比的MT01/PEN(质量比分别为1∶2... 目的应用聚乙烯亚胺阳离子聚合物(PEN)载体装载寡脱氧核苷酸MT01,制备MT01/PEN复合物,检测该复合物对人成骨样细胞MG63表达骨保护蛋白(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的影响。方法制备3种不同配比的MT01/PEN(质量比分别为1∶2、1∶4、1∶6)复合物,以全硫代化修饰MT01(MT01-s)和未修饰的MT01作阳性对照,分别转染MG63细胞。采用酶联免疫吸附测定法和real-time聚合酶链反应法分别检测培养24、48、72 h时各组上清液及细胞内OPG和RANKL的表达水平。结果经MT01/PEN复合物转染后,上清液及细胞内OPG表达水平均升高(P<0.05);多数组中RANKL表达水平降低,而OPG/RANKL比值呈升高趋势(P<0.05);不同质量配比的MT01/PEN均对MG63细胞的成骨具有影响,其中质量比为1∶6时作用最明显。结论应用PEN作为基因载体装载MT01可增强MT01对MG63细胞的促成骨作用。 展开更多
关键词 人成骨样细胞MG63 寡脱氧核苷酸MT01 聚乙烯亚胺阳离子聚合物 保护蛋白 核因子κB受体 活化因子配体
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人成骨样细胞SaOS-2向成骨分化过程中GNAS1基因的表达变化 被引量:1
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作者 李兴暖 汪涛 +2 位作者 吴萍 刘建云 李卫东 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期307-310,共4页
目的:对成骨分化过程中GNAS1基因的表达进行研究.方法:对人成骨样细胞Sa OS-2进行成骨定向分化,采用茜素红染色、实时定量PCR和免疫印迹检测成骨分化效果和分化过程中GNAS1的表达变化.结果:实时定量PCR结果显示,RUNX2基因在成骨分化第3... 目的:对成骨分化过程中GNAS1基因的表达进行研究.方法:对人成骨样细胞Sa OS-2进行成骨定向分化,采用茜素红染色、实时定量PCR和免疫印迹检测成骨分化效果和分化过程中GNAS1的表达变化.结果:实时定量PCR结果显示,RUNX2基因在成骨分化第3天表达最高,之后呈下降趋势,而实时定量PCR和免疫印迹均检测到GNAS1基因在成骨分化第3天表达最低,之后呈升高趋势.结论:GNAS1基因在成骨分化过程中表达存在差异,提示对成骨细胞分化具有调控作用. 展开更多
关键词 GM4S7基因 分化 人成SaOS-2细胞
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MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响 被引量:4
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作者 周岳 申玉芹 +3 位作者 高涵 刘引 于海蛟 林崇韬 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-4,共4页
目的:通过检测MT01对牙周致病菌Pg感染的成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子基因表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨分化作用的影响。方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1mg/L的特定序列... 目的:通过检测MT01对牙周致病菌Pg感染的成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子基因表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨分化作用的影响。方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1mg/L的特定序列寡核苷酸MT01和等体积PBS,共孵育3h后,加入感染复数MOI=100∶1的Pg菌悬液(对照组加等体积PBS)。即实验分为:MT01+Pg、MT01、Pg和空白对照4组,Realtime PCR检测2、4、6、8、12、24h特异性成骨相关因子Runx2,SP7mRNA的表达。结果:在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内成骨相关因子Runx2,SP7mRNA的表达,但在不同时间点,MT01调控Runx2,SP7mRNA表达上调的能力存在差异。结论:MT01可以促进牙周致病菌感染下的成骨细胞的成骨向分化。 展开更多
关键词 特定序列寡核苷酸MT01 牙龈卟啉单胞菌 相关因子 人成骨样细胞MG63
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Importin 8在成骨分化中的细胞内定位及表达差异 被引量:2
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作者 郎斌 汪鑫平 +2 位作者 车向新 吴萍 许晓源 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期516-519,共4页
目的观察Importin 8(IPO8)在成骨分化过程中的细胞内定位与表达差异。方法对人成骨样SaOS-2细胞进行成骨诱导分化,采用茜素红染色、免疫细胞化学方法和实时定量PCR技术检测成骨分化效果及分化过程中IPO8的细胞内定位和表达差异。结果茜... 目的观察Importin 8(IPO8)在成骨分化过程中的细胞内定位与表达差异。方法对人成骨样SaOS-2细胞进行成骨诱导分化,采用茜素红染色、免疫细胞化学方法和实时定量PCR技术检测成骨分化效果及分化过程中IPO8的细胞内定位和表达差异。结果茜素红染色显示SaOS-2细胞成骨诱导第10天可见大量红色结节样结构。免疫细胞化学方法显示,IPO8主要定位于细胞核周胞质。诱导至第3天,IPO8胞浆胞核均有表达,但明显开始向核内移动。至第7天,核内表达更明显,而到第10天,细胞呈骨细胞样,IPO8均匀分布于胞质内。实时定量PCR技术检测发现,OPN基因在SaOS-2细胞成骨分化过程中表达增加,而IPO8基因在成骨分化至第3天时表达最高,之后呈下降趋势。结论 IPO8在成骨分化过程中的细胞内定位与表达存在明显差异,提示IPO8可能参与成骨细胞分化过程的调控。 展开更多
关键词 IMPORTIN 8 分化 人成SaOS-2细胞
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