人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养系统的构建及其生物力学特性

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作者 胡守龙 李莉 +1 位作者 崔冬梅 曾骏文 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期108-113,共6页

背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维... 背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维培养系统，微观模拟在体巩膜，建立巩膜重塑模型。 方法采集新鲜供体巩膜组织，采用组织块培养法分离和培养HSFs，采用免疫荧光技术检测细胞中波形蛋白和角蛋白的表达以鉴定细胞；获取8周龄SPF级雄性SD大鼠鼠尾腱制备鼠尾胶原，400 μl胶原加入50 μl NaOH（0.1 mol/L）溶液中混匀，加入80 μl 10倍培养液，混匀，溶液pH值约为7。加入1 100 μl终浓度1×106/ml细胞悬液混合形成凝胶培养系统，于倒置相差显微镜下观察HSFs的增生情况和细胞形态，采用IPP-5软件对三维培养的含细胞胶原收缩面积进行测量以分析三维胶原系统的物理特性；采用生物力学试验机对三维胶原系统的生物力学特性进行测定。 结果培养的HSFs波形蛋白呈阳性表达，角蛋白表达阴性。未接种培养细胞的无成纤维细胞SD鼠鼠尾胶原凝胶透明，实验期间性状无明显变化，而含HSFs的三维胶原凝胶随着细胞培养时间的延长细胞数量增加，倒置相差显微镜下可观察到数十层成纤维细胞相互交错呈网状排列，培养后7～14 d凝胶块呈乳白色，凝胶面积保持在正常的10%左右，三维培养系统中的HSFs接种后24 h细胞产生多向性突起，呈双极形或纺锤形。HSFs胶原凝胶复合物的弹性材料蠕变曲线呈非线性（0～100 s）部分与线性（100～600 s）部分，前者是胶原凝胶在短暂应力的作用下本身的弹性变化，后者是胶原凝胶在定力的作用下随拉伸时间的延长而出现的蠕变变化。 结论鼠胶原凝胶对培养的HSFs有良好的生物相容性，HSFs胶原凝胶可形成三维复合物，可呈现机械性生物学特性，是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型，可用于巩膜重塑的模拟研究。 展开更多

关键词 成纤维细胞/细胞学 巩膜 人 胶原 SD大鼠 生物力学 细胞培养技术/方法 种植 人巩膜成纤维细胞的胶原蛋白基质

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TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达 被引量：3

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作者 牟丽丽 刘桂香 +2 位作者 王玲 韩明磊 高岩 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第11期1016-1020,1024,共6页

目的观察转染基质金属蛋白酶2抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase2,TIMP-2)基因的豚鼠巩膜成纤维细胞不同时间增生能力及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和TIMP-2的表达,探讨基因治疗近视的可行性... 目的观察转染基质金属蛋白酶2抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase2,TIMP-2)基因的豚鼠巩膜成纤维细胞不同时间增生能力及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和TIMP-2的表达,探讨基因治疗近视的可行性。方法随机选取三色健康豚鼠,组织块法体外培养原代巩膜成纤维细胞,免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定,取第3～6代细胞进行实验。分子克隆构建携带TIMP-2基因的真核表达载体,转染豚鼠巩膜成纤维细胞,MTT法观察转染后12h、24h、48h、3d、5d、7d细胞增生能力。提取总RNA,二步法逆转录-聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好,波形蛋白鉴定阳性。转染3d、5d、7d TIMP-2基因转染组成纤维细胞的增生速度分别为0.6724±0.0092、0.7963±0.0060、0.8462±0.0064,明显快于正常对照组成纤维细胞(0.5810±0.0120、0.6525±0.0072、0.7129±0.0132),差异均具有显著统计学意义(均为P<0.01)。转染48h MMP-2mRNA表达即开始减少,转染3d时表达明显减少,达到最低,除转染12h与24h之间外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间MMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TIMP-2mRNA表达在转染48h时即开始增加,除12h与24h外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间TIMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用,TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞抑制MMP-2mRNA的表达,可在一定程度上阻止近视发展中巩膜组织的丢失与重塑。 展开更多

关键词 转染 豚鼠巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶2特异性组织抑制剂

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高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响 被引量：6

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作者 张再超 叶希韵 +1 位作者 刘霞 翁宇静 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期323-326,共4页

目的研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响。方法体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40mmol/L)培养48h(高糖1～3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细... 目的研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响。方法体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40mmol/L)培养48h(高糖1～3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2)mRNA的表达。以加入含25mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组。结果随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05)。结论高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少。 展开更多

关键词 皮肤成纤维细胞 高糖 RT-PCR Ⅰ型胶原蛋白 Ⅲ型胶原蛋白 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制酶

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氧化低密度脂蛋白对大鼠心肌成纤维细胞胶原的影响 被引量：6

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作者 肖华 季爱民 +2 位作者 李志粱 宋旭东 陈爱华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第13期1252-1255,共4页

目的探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响。方法体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24h,3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察细胞DNA合成,3H-脯... 目的探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响。方法体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24h,3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达。结果和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成。ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用最强。50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强。结论ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程中起一定的作用。 展开更多

关键词 氧化低密度脂蛋白 心肌成纤维细胞 胶原 基质金属蛋白酶

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RGD多肽水凝胶对Tenon囊成纤维细胞活化和YAP信号的影响

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作者 吕瑶 梁亮 +2 位作者 覃勉 蒋汝平 吴霞 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第9期686-691,共6页

目的探究不同浓度的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽水凝胶,对Tenon囊成纤维细胞(HTF)活化和Yes相关蛋白(YAP)表达的影响。方法制备0.5%、1.0%、2.0%三种浓度RGD多肽水凝胶,透射电子显微镜观察其内部微观结构,流变学检测弹性模量(E)。... 目的探究不同浓度的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽水凝胶,对Tenon囊成纤维细胞(HTF)活化和Yes相关蛋白(YAP)表达的影响。方法制备0.5%、1.0%、2.0%三种浓度RGD多肽水凝胶,透射电子显微镜观察其内部微观结构,流变学检测弹性模量(E)。构建SD雄性大鼠结膜损伤模型后,分为空白组(不作处理)、低浓度RGD组(结膜下注射0.5%RGD多肽水凝胶)、中浓度RGD组(结膜下注射1.0%RGD多肽水凝胶)、高浓度RGD组(结膜下注射2.0%RGD多肽水凝胶),观察1周后取材,Masson染色观察大鼠结膜处胶原纤维增生情况,免疫组织化学检测大鼠结膜YAP、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)表达情况。利用转化生长因子-β2(TGF-β2)刺激HTF活化构建瘢痕化细胞模型,按照实验要求分为对照组、0.5%RGD水凝胶组、1.0%RGD水凝胶组、2.0%RGD水凝胶组、正常组,培养24 h后,Western blot检测HTF中YAP、结缔组织生长因子(CTGF)、α-SMA、纤连蛋白(FN)和I型胶原蛋白(Col I)的蛋白相对表达量;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白(F-actin)和YAP蛋白表达定位。结果电镜下观察可见,RGD多肽水凝胶内部纳米纤维交联密度随多肽浓度增加而升高,流变学测得0.5%、1.0%及2.0%RGD多肽水凝胶弹性模量(E)依次约为0.067 kPa、0.150 kPa、2.170 kPa。Masson染色结果显示,除中浓度RGD组大鼠结膜胶原纤维增生面积比明显低于空白组外(P<0.05),低浓度组、高浓度组与空白组差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫组织化学结果显示,与空白组相比,低浓度RGD组、中浓度RGD组、高浓度RGD组大鼠YAP及α-SMA蛋白相对表达量均下降,中浓度RGD组下降最明显,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。细胞免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,0.5%RGD水凝胶组、1.0%RGD水凝胶组、2.0%RGD水凝胶组HTF的F-actin绿色荧光减弱,YAP红色荧光从细胞核转位于细胞质表达。Western blot检测结果显示,与对照组相比,0.5%RGD水凝胶组、1.0%RGD水凝胶组、2.0%RGD水凝胶组HTF中YAP、CTGF、α-SMA、FN及Col I蛋白相对表达量均下降,1.0%RGD水凝胶组下降最明显,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论RGD多肽水凝胶的最佳作用浓度为1.0%,其通过抑制YAP蛋白的表达水平及其核转位,减少HTF的活化及其纤维化蛋白的表达,从而产生抗瘢痕效果。 展开更多

关键词 TENON囊成纤维细胞 RGD多肽水凝胶 细胞外基质 Yes相关蛋白 瘢痕化

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机械牵张对兔角膜成纤维细胞细胞外基质基因表达的影响 被引量：3

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作者 刘成星 冯鹏飞 +3 位作者 李晓娜 宋婕 安美文 陈维毅 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第5期447-453,458,共8页

目的研究机械牵张与白介素-1β(IL-1β)联合作用对兔角膜成纤维细胞细胞外基质相关基因表达的影响。方法对原代提取的兔角膜成纤维细胞进行牵张幅度15%、频率0.1 Hz的周期性牵张12、24、36 h,同时给予IL-1β处理,采用实时荧光定量PCR检... 目的研究机械牵张与白介素-1β(IL-1β)联合作用对兔角膜成纤维细胞细胞外基质相关基因表达的影响。方法对原代提取的兔角膜成纤维细胞进行牵张幅度15%、频率0.1 Hz的周期性牵张12、24、36 h,同时给予IL-1β处理,采用实时荧光定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶(MMPs)、基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP-1)和I型胶原α1(Collagen Iα1)mRNA表达变化水平。结果 IL-1β单独作用可以诱导角膜成纤维细胞MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达;MMP-1和MMP-3 mRNA表达随时间而降低,MMP-9、TIMP-1、Collagen Iα1 mRNA则随时间而增加;IL-1β与机械牵张联合作用使MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平上调,TIMP-1和Collagen Iα1 mRNA表达下调,且具有时间依赖。单独机械牵张使Collagen Iα1 mRNA表达下降,IL-1β与机械牵张联合作用使其表达进一步下调,且具有时间依赖性。结论机械牵张与炎性因子联合作用可加剧角膜组织破坏,促进角膜膨隆的发生发展。 展开更多

关键词 周期性牵张 基质金属蛋白酶 胶原 角膜成纤维细胞

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豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞前部及后极部MMP-2 mRNA及蛋白表达变化的研究 被引量：3

7

作者 陈博宇 王超英 +5 位作者 安慧琴 马景学 陈维毅 郝岚 刘迎庆 仝春梅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第9期807-811,共5页

目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)... 目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴-10.00DS凹透镜,分别饲养6d、15d、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用组织块培养法培养豚鼠的前部及后极部GSF,利用免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western blot蛋白印迹法检测前部及后极部GSF中MMP-2表达变化。结果 MMP-2的表达定位于细胞浆和细胞核。实验组中前部GSF饲养15d阳性表达率较高,30d阳性表达率最高;后极部GSF饲养6d表达率开始较高,至15d阳性表达率最高,以后保持较高的阳性表达率,各诱导时间点之间两两比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);自身对照组各组自身前部及后极部比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论体外培养的豚鼠GSF稳定表达MMP-2 mRNA及其蛋白,且前部GSF于诱导15d开始阳性表达率较高,后极部GSF于诱导6d开始阳性表达率较高,后极部GSF较前部表达明显增多。 展开更多

关键词 豚鼠 巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶 2 免疫细胞化学 实时荧光定量PCR Western blot蛋白印迹法

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三种口腔溃疡中药制剂对小鼠成纤维细胞生长增殖和胶原合成的影响 被引量：8

8

作者 金姗姗 郑雅文 +3 位作者 张洁 齐锐 刘斌 李志革 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1176-1181,共6页

目的探讨3种治疗复发性口腔溃疡中药制剂(西瓜霜、云南白药、甘草泻心汤)在细胞水平上促进溃疡愈合的作用机制。方法建立小鼠口腔成纤维细胞体外培养模型,以华素片为对照,采用MTT、Elisa测定3种中药制剂对成纤维细胞增殖、胶原合成的影... 目的探讨3种治疗复发性口腔溃疡中药制剂(西瓜霜、云南白药、甘草泻心汤)在细胞水平上促进溃疡愈合的作用机制。方法建立小鼠口腔成纤维细胞体外培养模型,以华素片为对照,采用MTT、Elisa测定3种中药制剂对成纤维细胞增殖、胶原合成的影响。结果西瓜霜在促进成纤维细胞的增殖及胶原合成,抑制MMP-2,促进TIMP-1方面有较显著的作用。云南白药促进能够HYP的分泌和抑制MMP-2的分泌。甘草泻心汤对成纤维细胞有一定的抑制作用。结论提示临床上治疗复发性口腔溃疡时应联合用药或分期用药。 展开更多

关键词 复发性口腔溃疡 西瓜霜 云南白药 甘草泻心汤 小鼠成纤维细胞L929 胶原合成 羟脯氨酸(HYP) 金属基质蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)

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极低频电磁场作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞的分子病理改变 被引量：6

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作者 王洁 崔杰锋 +3 位作者 朱煌 赵立全 冯婕妤 叶胜龙 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期403-407,共5页

背景极低频电磁辐射产生的热效应与人类癌症的关系及其对眼表的影响已有较多研究。但眼球暴露于极低频电磁场（ELF．EMFs）下是否会导致巩膜的病理改变，从而影响近视的发生、发展目前鲜见报道。目的研究ELF—EMFs作用下人胚胎眼巩膜成... 背景极低频电磁辐射产生的热效应与人类癌症的关系及其对眼表的影响已有较多研究。但眼球暴露于极低频电磁场（ELF．EMFs）下是否会导致巩膜的病理改变，从而影响近视的发生、发展目前鲜见报道。目的研究ELF—EMFs作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞（HFSFs）的分子病理改变及其在近视发生发展中的可能机制。方法对HFSFs进行体外培养和传代，根据细胞是否暴露于50Hz电磁场分为暴露组和对照组，应用实时定量聚合酶链反应（real—timePCR）法检测不同磁场强度（0、0．1、0．2、0．5、1．0mT）、不同暴露时间（0、6、12、24、36、48h）下HFSFs中I型胶原蛋白（COL1A1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）的基因表达水平变化，同时应用CCK18法检测两组HFSFs的细胞增生情况，并以细胞免疫荧光法对HFSFs中COL1A1和MMP-2蛋白的表达进行确认。结果与对照组相比，暴露组在磁场强度0．2mT下作用6h可见HFSFs中COL1A1mRNA的表达下调，差异有统计学意义（对照组：0．099±0．008，暴露组：0．050±0．004；P=0．009），且表达量随着磁场强度的增加而减少；在磁场强度O．1mT下暴露24h，HFSFs细胞中的MMP-2mRNA表达上调，差异有统计学意义（对照组：0．009＋0．001，暴露组：0．018±0．003；P=0．038），并随着暴露时间的延长表达增强。磁场强度0．2mT下暴露24h，HFSFs细胞增生的吸光度（A450）值明显下降，差异有统计学意义（P=0．009）；免疫荧光分析也显示暴露组HFSFs细胞中COL1A1表达下调，MMP-2表达上调。结论ELF—EMFs暴露可在一定范围内影响体外培养的HFSFs的增生及COL1A1的合成，可能是诱导巩膜发生病理性重塑进而导致近视发生、发展的危险因素之一。 展开更多

关键词 极低频电磁场 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 近视 I型胶原蛋白 基质金属蛋白酶2

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锡类散对原代培养的小鼠口腔成纤维细胞与创面愈合相关功能的影响(英文) 被引量：4

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作者 代剑平 陈钧 +2 位作者 贝宇飞 韩邦兴 周小坤 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期30-35,共6页

目的:研究锡类散对小鼠口腔成纤维细胞的影响,探索其促伤口愈合的机制。方法:采用MTT法、氯胺-T法、明胶酶谱分析和酶联免疫反应测定锡类散对小鼠口腔成纤维细胞的增殖、群体倍增时间、胶原、金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)、基质金属蛋白酶... 目的:研究锡类散对小鼠口腔成纤维细胞的影响,探索其促伤口愈合的机制。方法:采用MTT法、氯胺-T法、明胶酶谱分析和酶联免疫反应测定锡类散对小鼠口腔成纤维细胞的增殖、群体倍增时间、胶原、金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的影响。结果:锡类散水提物能以时间和浓度依赖性方式促进小鼠口腔成纤维细胞生长,经水提物(125μg/mL)处理后,细胞群体倍增时间为33.8h,并且胶原积累显著增加,其水提物和醇提物都能显著(P<0.05)增加MMP-2活性,同时极显著(P<0.01)提高TIMP-1的合成。结论:锡类散通过促进成纤维细胞分裂、胶原沉积和TIMP-1的产生而激活成纤维细胞,促伤口愈合。 展开更多

关键词 胶原合成 成纤维细胞 金属蛋白酶-2 9 基质金属蛋白酶抑制因子-1 伤口愈合

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阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制 被引量：2

11

作者 吴劲松 李姝蓉 熊伟伟 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第4期266-269,共4页

目的 探讨不同浓度阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 取出生24 h的健康雄性SD大鼠眼巩膜组织(均为右眼)进行原代培养。取细胞进行分组:对照组(正常巩膜成纤维细胞),0.1 g·L^(-1)、1.0 g·L^(-1)及5.0... 目的 探讨不同浓度阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 取出生24 h的健康雄性SD大鼠眼巩膜组织(均为右眼)进行原代培养。取细胞进行分组:对照组(正常巩膜成纤维细胞),0.1 g·L^(-1)、1.0 g·L^(-1)及5.0 g·L^(-1)阿托品处理组(正常巩膜成纤维细胞分别加入三种不同浓度阿托品溶液),每组5只大鼠原代培养细胞。加药后24 h, CCK-8法检测各组巩膜成纤维细胞活力,流式细胞仪检测各组巩膜成纤维细胞凋亡率,Western blot法检测各组巩膜成纤维细胞光蛋白聚糖、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-14和MMP抑制剂(TIMP)-2蛋白表达情况。结果 CCK-8实验结果显示:与对照组相比,0.1 g·L^(-1)、1.0 g·L^(-1)及5.0 g·L^(-1)阿托品处理组细胞活力均增高,其中以1.0 g·L^(-1)阿托品处理组增高最显著,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果表明:阿托品处理组各组的巩膜成纤维细胞凋亡率与对照组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与对照组相比,阿托品处理组巩膜成纤维细胞中光蛋白聚糖、TIMP-2蛋白相对表达量均升高,其中以5.0 g·L^(-1)阿托品处理组上升最明显(均为P<0.05);与对照组相比,阿托品处理组巩膜成纤维细胞中MMP-2、MMP-14蛋白相对表达量均降低,其中以5.0 g·L^(-1)阿托品处理组下降最明显(均为P<0.05)。结论 阿托品处理能增强体外培养大鼠巩膜成纤维细胞活力,这种效应的产生可能与光蛋白聚糖、MMPs、TIMPs等细胞因子有关。 展开更多

关键词 阿托品 巩膜成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 光蛋白聚糖 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂 大鼠

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胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞增生的影响及其机制 被引量：1

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作者 高岩 韩明磊 +1 位作者 牟丽丽 刘桂香 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期915-918,共4页

背景胰高血糖素与近视的发生密切相关，在一定浓度范围内可抑制近视的发展，但其确切的作用机制尚不明确。目的研究胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞（GSFCs）生长的影响及作用机制。方法获取出生15d的健康纯种豚鼠的巩膜组织，采用组织... 背景胰高血糖素与近视的发生密切相关，在一定浓度范围内可抑制近视的发展，但其确切的作用机制尚不明确。目的研究胰高血糖素对豚鼠巩膜成纤维细胞（GSFCs）生长的影响及作用机制。方法获取出生15d的健康纯种豚鼠的巩膜组织，采用组织块培养法进行GSFCs的培养和传代，采用免疫组织化学法检测培养的细胞中波形蛋白抗体、细胞角蛋白抗体及S-100抗体的表达。用完全随机法将培养的细胞分组，分别在不同组的培养孔中加入5、10、50、100、200μg／L胰高血糖素培养GSFCs24h，不加胰高血糖素培养的为对照组。利用MTT比色法观察各质量浓度胰高血糖素作用后及50btg／L胰高血糖素作用1、2、3、5、7dGSFCs的生长情况，酶联免疫检测仪测量波长490nm处各孔细胞的吸光度（A490）值，并用ELISA法检测培养72h不同质量浓度胰高血糖素对GSFCs中基质金属蛋白酶2／组织金属蛋白酶抑制剂2（MMP-2／TIMP-2）表达水平的影响，以酶标仪测定450nm波长处各孔细胞的A450值。结果GSFCs传代培养后密度较低时呈枝状排列，密度较高时呈束状或漩涡状排列，波形蛋白抗体反应阳性。随着胰高血糖素质量浓度的增加，细胞的A490值逐渐升高，差异有统计学意义（F=32．340，P=0．013），胰高血糖素质量浓度〉10μg／L时，细胞的A490值较对照组明显升高，差异均有统计学意义（t=5．575、6．627、16．074、12．003，P〈0．05）。培养孔中加入50μg／L胰高血糖素后随着培养时间的延长，细胞的A450值升高，差异有统计学意义（F时间=10．610，P=0．024），且与对照组比较细胞的A490值升高，差异有统计学意义（F。=9．068，P=0．039）。胰高血糖素质量浓度在5～200μg／L时，随胰高血糖素质量浓度的增加，MMP-2含量逐渐减少，差异有统计学意义（F=153．639，P=0．036），但TIMP-2含量的变化差异无统计学意义（F=24．770，P=3．250）。结论胰高血糖素可促进体外培养的GSFCs的增生，其作用呈剂量和时间依赖性，其作用机制可能是下调MMP-2在GSFCs中的表达，MMP-2／TIMP-2失衡所致。 展开更多

关键词 巩膜成纤维细胞 胰高血糖素 基质金属蛋白酶2/组织金属蛋白酶抑制剂2

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极低频电磁场对人胚胎眼巩膜成纤维细胞中ROCK1及COL1A1表达的调控作用

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作者 牛宗镇 朱煌 +2 位作者 蔡晓静 王洁 冯婕妤 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期640-644,共5页

目的观察极低频电磁场(ELF-EMFs)对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)及Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)表达的影响。方法 HFSFs体外培养和传代后以0.2 mT、50 Hz电磁场辐射24 h(暴露组),设立未行电磁场辐射的HF... 目的观察极低频电磁场(ELF-EMFs)对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)及Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)表达的影响。方法 HFSFs体外培养和传代后以0.2 mT、50 Hz电磁场辐射24 h(暴露组),设立未行电磁场辐射的HFSFs作为对照组。Real-Time PCR检测ROCK1和COL1A1 mRNA的表达,Western blotting检测ROCK1和COL1A1蛋白的表达。结果 Real-Time PCR检测结果显示:与对照组相比,暴露组HFSFs中ROCK1 mRNA的表达显著上调(t=3.006,P=0.039 7),而COL1A1mRNA的表达显著下调(t=4.225,P=0.013 4)。Western blotting检测发现,暴露组HFSFs中ROCK1蛋白的表达升高,COL1A1蛋白的表达降低。结论 ELF-EMFs对HFSFs中ROCK1和COL1A1的表达具有调控作用,并因此使巩膜重塑,进而导致近视的发生和发展。 展开更多

关键词 极低频电磁场 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 Rho相关的卷曲蛋白激酶1 Ⅰ型胶原蛋白

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越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞MMP2和collagenⅠ表达的影响 被引量：2

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作者 刘丽敏 钟华红 +5 位作者 邓宏伟 肖红萍 曾杞汶 田原 刘小勇 孟晶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1291-1296,共6页

目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法:取不同浓度(0,10^(-6),10^(-5),10^(-4),10^(-3),10^(-2),10^(-1) and 1 g/L)... 目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法:取不同浓度(0,10^(-6),10^(-5),10^(-4),10^(-3),10^(-2),10^(-1) and 1 g/L)越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间(6 h、8 h、12 h、24 h和48h)对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力最高时(10-1g/L越橘花青素作用12 h)的细胞周期和凋亡情况;RT-q PCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达。结果:MTT法结果显示HFSF在10-1g/L的越橘花青素作用12 h时活力最高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10-1g/L越橘花青素组S和G2期的细胞比例增加(P<0.05),凋亡率差异无统计学意义;RT-q PCR显示MMP2的mRNA表达量下降(P<0.05),COL1A1的mRNA表达量增加(P<0.05),COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降(P<0.05),collagen I蛋白表达增加(P<0.05)。结论:越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen Ⅰ表达的作用。 展开更多

关键词 越橘花青素 人胚胎巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶2 Ⅰ型胶原蛋白

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青蒿琥酯对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及机制探讨 被引量：24

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作者 李战 农晓琳 +2 位作者 李佳荃 朴智 唐黎黎 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期947-951,共5页

目的研究青蒿琥酯(ART)对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及其可能机制。方法收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞。用0、75、150、300、600μmol·L-1ART干预24 h,MTT法检测青蒿琥酯的细胞增殖抑制作用,... 目的研究青蒿琥酯(ART)对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及其可能机制。方法收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞。用0、75、150、300、600μmol·L-1ART干预24 h,MTT法检测青蒿琥酯的细胞增殖抑制作用,荧光定量RT-PCR法检测结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶1(MMP1)和Ⅰ型前胶原α2链(proCOL1A2)mRNA的表达,Western blot法检测CTGF及Ⅰ型胶原的蛋白表达。结果各测试浓度ART均可抑制成纤维细胞增殖。和对照组相比,CTGF和proCOL1A2mRNA表达降低,而MMP1表达明显升高。Western blot法检测发现CTGF及Ⅰ型胶原表达明显下调。结论 ART能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,并下调其CTGF及Ⅰ型胶原表达,同时上调MMP1的表达;通过抑制CTGF,并促进MMP1表达而减少胶原沉积可能是ART抑制增生性瘢痕的机制之一。 展开更多

关键词 增生性瘢痕 成纤维细胞 青蒿琥酯 结缔组织生长因子 基质金属蛋白酶 Ⅰ型胶原 MMP1 COLLAGEN Ⅰ

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微组织大尺度收缩中细胞和胶原基质的力学检测

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作者 王翔 高蔷 +4 位作者 韩潇宁 布冰 王龙飞 李奥琦 邓林红 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期111-111,共1页

目的细胞产生的机械力及其与细胞外基质的相互作用在组织形态建成,稳态维持和损伤修复中起着关键作用。然而,来自测量系统的边界条件对细胞产生不可忽视的力学反馈,进而干扰了软组织中细胞收缩力的精确测量。方法制备了低弹性常数和较... 目的细胞产生的机械力及其与细胞外基质的相互作用在组织形态建成,稳态维持和损伤修复中起着关键作用。然而,来自测量系统的边界条件对细胞产生不可忽视的力学反馈,进而干扰了软组织中细胞收缩力的精确测量。方法制备了低弹性常数和较大挠度范围的基于PDMS聚合物的微弦结构,并在一对微弦上培养胶原蛋白和成纤维细胞混合物形成的微组织。通过测量微组织收缩而导致的微弦间距变化,实现在较小力学边界条件下对其收缩力的实时、精确测量。 展开更多

关键词 成纤维细胞 细胞收缩 细胞外基质 收缩力 损伤修复 弹性常数 形态建成 胶原蛋白

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8-异戊烯基柑橘素促进体外骨髓基质干细胞成骨性分化的研究 被引量：3

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作者 明磊国 陈克明 +2 位作者 葛宝丰 马慧萍 翟远坤 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期107-113,共7页

目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkali... 目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度。增殖分析采用MTT法。以1×10-6 mol.L-1的最佳浓度作用并成骨性诱导(1×10-7mmol.L-1地塞米松、10 mmol.L-1β-甘油磷酸钠和50 mg.L-1抗坏血酸)培养的d 4、8、12、16测ALP活性、钙盐沉积量,d 16进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT Real-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的基因表达情况。结果 8-异戊烯基柑橘素不能促进BMSCs增殖,但8-异戊烯基柑橘素在1×10-6 mol.L-1时能促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA表达水平。结论 8-异戊烯基柑橘素可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值。 展开更多

关键词 骨髓基质干细胞 分化 8-异戊烯基柑橘素 碱性磷酸酶 碱性成纤维细胞生长因子 胰岛素样生长因子 骨形态发生蛋白 Ⅰ型胶原 OSTERIX Runx-2

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中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老及机制研究 被引量：3

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作者 胡孝辉 高丰厚 方勇 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期807-811,共5页

目的探讨中波紫外线(UVB)对人皮肤成纤维细胞的诱导衰老作用及可能机制。方法使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,通过观察不同剂量UVB照射后的细胞形态学改变以及β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老染色情况,确定后续实验诱导皮肤... 目的探讨中波紫外线(UVB)对人皮肤成纤维细胞的诱导衰老作用及可能机制。方法使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,通过观察不同剂量UVB照射后的细胞形态学改变以及β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老染色情况,确定后续实验诱导皮肤成纤维细胞衰老的UVB单次照射剂量。于经确定剂量UVB照射后的不同时点(12、24、48、72h)收集细胞及其细胞培养上清液,Western blotting检测诱导衰老的皮肤成纤维细胞衰老相关蛋白P16表达;ELISA法检测诱导衰老细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶1、3(MMP1、MMP3)表达。结果经40mJ/cm2 UVB单次照射的人皮肤成纤维细胞呈现典型的衰老细胞形态学改变,β-gal细胞衰老染色阳性细胞百分比为(88.75±5.32)%,确定诱导衰老UVB单次照射剂量为40mJ/cm2。Western blotting显示,诱导衰老皮肤成纤维细胞P16蛋白表达随UVB照射时间的延长而明显升高;ELISA法检测发现诱导衰老细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达随UVB照射时间的延长而明显减少,MMP1和MMP3表达则随UVB照射时间的延长而显著增加。结论 UVB照射能诱导人皮肤成纤维细胞发生衰老,其机制可能与细胞胶原合成减少而降解增加有关。 展开更多

关键词 人皮肤成纤维细胞 衰老 胶原 基质金属蛋白酶 中波紫外线

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弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶在肺组织破坏中协同作用的实验研究 被引量：7

19

作者 朱运奎 金远林 +3 位作者 肖永久 汤育瑛 汪莉 李继东 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期784-787,共4页

目的:采用肺成纤维细胞三维立体培养技术,直接观察弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶对肺的主要成分之一胶原组织的降解作用。方法:用明胶酶谱法和Westernblotting法测定MMP - 1、2、3、9和TIMP - 1和2 (金属蛋白酶抑制因子) ,同时测定胶原含... 目的:采用肺成纤维细胞三维立体培养技术,直接观察弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶对肺的主要成分之一胶原组织的降解作用。方法:用明胶酶谱法和Westernblotting法测定MMP - 1、2、3、9和TIMP - 1和2 (金属蛋白酶抑制因子) ,同时测定胶原含量。结果:TNF -α和IL - 1β诱导培养在立体胶原内的肺成纤维细胞产生MMP- 1、3和9,但是只引起少量胶原降解(2. 8%±1 .5 % ,P >0 .0 5 ) ,同时加入中性粒细胞弹力蛋白酶(NE) ,结果导致胶原完全降解(P <0 . 0 1)。NE使MMP - 1、2、3和9由非活化的形式转化为较小分子量的活化分子,同时,清除TIMP- 1和2。胶原降解后基质发生强烈收缩。结论:基质金属蛋白酶可直接降解肺内胶原和其它间质组织,导致肺组织破坏,中性粒细胞弹力蛋白酶通过活化基质金属蛋白酶引起或加速细胞外基质的破坏。基质金属蛋白酶与弹力蛋白酶的协同作用可能是肺气肿等肺组织破坏的机理。 展开更多

关键词 白细胞弹力蛋白酶 基质金属蛋白酶 肺 成纤维细胞 胶原

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PGF_2α类抗青光眼药Unoprostone对培养猴睫状肌细胞中胶原Ⅲ、Ⅳ及MMP-1表达的影响 被引量：3

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作者 金明 洪晶 吴景天 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期40-42,共3页

目的 :探讨前列腺素F2 α(prostaglandinF2 α ,PGF2 α)类抗青光眼药Unoprostone对猴的降眼压作用机制是否与睫状肌中基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinase ,MMP)及细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM)的表达有关。方法 :采用... 目的 :探讨前列腺素F2 α(prostaglandinF2 α ,PGF2 α)类抗青光眼药Unoprostone对猴的降眼压作用机制是否与睫状肌中基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinase ,MMP)及细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM)的表达有关。方法 :采用免疫细胞化学方法对培养猴睫状肌细胞中胶原Ⅰ ,Ⅲ ,Ⅳ及MMP 1的分布进行观察。比较 10 -6mol/LPGF2 α、Unoprostone代谢物M1及M2 对睫状肌细胞作用前后胶原Ⅲ ,Ⅳ及MMP 1的染色变化。结果 :胶原Ⅲ ,Ⅳ及MMP 1在培养猴睫状肌细胞内外分布各异 ,胶原Ⅰ未见明显染色 ;10 -6mol/LPGF2 α、Unoprostone代谢物M1及M2 分别使猴睫状肌细胞中胶原Ⅲ ,Ⅳ减少 ,MMP 1表达增强。结论 :Unoprostone增强猴睫状肌MMP表达 ,引起ECM降解加强 ,表明其降眼压机制为使睫状肌束间隙增大 。 展开更多

关键词 猴 睫状肌细胞 胶原Ⅲ 胶原Ⅳ 基质金属蛋白酶-1 Unoprostone 葡萄膜巩膜房水流出

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