干扰长单一序列区83基因对人巨细胞病毒感染后人脑血管平滑肌促血管生成素及血管内皮生长因子表达的影响

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作者 刘磊 王佳伟 《中国卒中杂志》 2017年第9期800-807,共8页

目的长单一序列区(unique long region 83,UL83)基因是人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染再激活标志。本研究拟探索UL83对HCMV感染后人脑血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)中不稳定斑块破裂相关因子,如促... 目的长单一序列区(unique long region 83,UL83)基因是人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染再激活标志。本研究拟探索UL83对HCMV感染后人脑血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)中不稳定斑块破裂相关因子,如促血管生成素(angiopoietin,Ang)以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法 (1)采用流式细胞仪确定amidite荧光素(fluorescein amidite,FAM)标记的小干扰核糖核酸(small interfering ribonucleic acid,si RNA)通过脂质体转入人脑VSMC的转染效率;(2)将3条化学合成si RNA通过脂质体转染入已感染HCMV AD_(169)株(MOI=10)的人脑VSMC当中,结合空白组、接毒组及接毒无效干扰组筛选抑制UL83基因最强si RNA;(3)分别检测HCMV AD_(169)株(MOI=10)感染人脑VSMC后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h以及72 h Ang-1、Ang-2及VEGF-A信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,m RNA)及蛋白表达变化;(4)分别检测空白组、接毒高效干扰组、接毒无效干扰组及接毒组在感染48 h后Ang-1、Ang-2及VEGF-A的mRNA及感染72 h后上述蛋白表达情况。结果转染6 h后,95.59%人脑VSMC转染了FAM标记si RNA。感染HCMV AD_(169)株(MOI=10)的人脑VSMC在转染siRNA 48 h后,si RNA转染组与接毒组相比,UL83 m RNA相对表达量最多下降78.7%;转染si RNA72 h后,UL83编码的pp65蛋白相对表达量最多下降81.3%。人脑VSMC感染HCMV AD_(169)株(MOI=10)0 h、6 h、12 h、24 h、48 h以及72 h时后,Ang-1 m RNA及蛋白相对表达量逐渐下降(P<0.01),Ang-2及VEGF-A mRNA及蛋白相对表达量则逐渐增加(P<0.01)。而通过转染高效si RNA抑制HCMV AD_(169)株UL83基因,使得Ang-1表达下降,Ang-2和VEGF-A表达增加均被抑制。结论 HCMV AD_(169)株具有同时促进人脑VSMC中Ang-1表达降低,Ang-2及VEGF-A表达增加功能。而通过si RNA抑制HCMV AD_(169)株UL83基因表达能够阻止上述变化。提示HCMV可能通过UL83基因造成靶细胞产生促血管新生微环境。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒ul83基因 小干扰核糖核酸 促血管生成素-1 促血管生成素-2 血管内皮生长因子-A

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人巨细胞病毒临床低传代病毒株UL97基因的克隆与分析 被引量：2

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作者 王波 李月琴 +4 位作者 田传军 张纯青 苏运贞 何华坤 周天鸿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期694-699,共6页

分离人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代GZ02病毒株,并根据GenBank提供的实验室标 准病毒株HCMV AD169磷酸转移酶基因UL97 DNA序列及有关文献设计引物,从HCMY GZ02病毒 株基因组DNA中通过PER扩增UL97基因,并克隆至pGEM3Z质粒载体．重组质粒... 分离人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代GZ02病毒株,并根据GenBank提供的实验室标 准病毒株HCMV AD169磷酸转移酶基因UL97 DNA序列及有关文献设计引物,从HCMY GZ02病毒 株基因组DNA中通过PER扩增UL97基因,并克隆至pGEM3Z质粒载体．重组质粒经测序鉴定,发 现HCMV GZ02病毒株UL97基因序列保守区域与HCMV AD169 UL97长度完全一致,但发生G205A、 G761A、T823C、T1173C、T1282C、T1334C、T2106C等7个位点的碱基突变,涉及到编码氨基酸E69K, S275P,CA28R和F445S位点发生改变． 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 野生型 ul97基因 突变 克隆 序列分析

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人巨细胞病毒UL138基因在临床低传代分离株中的多态性研究 被引量：2

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作者 马艳萍 阮强 +5 位作者 齐莹 何蓉 卢颖 吉耀华 刘庆 陈淑荣 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期193-196,共4页

目的 :研究人巨细胞病毒 (HCMV)UL1 38基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染不同致病性之间的关系。方法 :对 30株经荧光定量PCR方法检测HCMV DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV UL1 38全序列PCR扩增 ,对 1 6株进行HC... 目的 :研究人巨细胞病毒 (HCMV)UL1 38基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染不同致病性之间的关系。方法 :对 30株经荧光定量PCR方法检测HCMV DNA为阳性的临床低传代分离株进行HCMV UL1 38全序列PCR扩增 ,对 1 6株进行HCMV UL1 38基因全序列测序及结果分析。结果 :30株临床分离株中有 2 0株UL1 38基因PCR扩增阳性。 1 6株临床分离株HCMV UL1 38开放阅读框架及编码蛋白的重要功能基团均高度保守。核苷酸序列进化树的分析结果表明 :除 2 0M外 ,先天性巨结肠株只存在于 2a型 ,而小头畸形株仅存在于 2b型。结论 :HCMVUL1 38基因高度保守 ,但存在一定的多态性。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 ul138基因 多态性

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人巨细胞病毒UL145基因在先天感染患儿临床株中的多态性研究 被引量：1

4

作者 孙峥嵘 卢颖 +6 位作者 阮强 吉耀华 何蓉 马艳萍 齐莹 毛志芹 黄郁晶 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期561-563,567,共4页

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)UL145序列在先天感染患儿临床株中的基因多态性,探讨HCMV基因多态性与先天感染引起的不同临床症状之间的关系。方法:对16株临床低传代分离株和15株未传代临床株的HCMV临床标本分别进行UL145全序列PCR扩增,对... 目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)UL145序列在先天感染患儿临床株中的基因多态性,探讨HCMV基因多态性与先天感染引起的不同临床症状之间的关系。方法:对16株临床低传代分离株和15株未传代临床株的HCMV临床标本分别进行UL145全序列PCR扩增,对PCR扩增阳性的31例标本进行序列测定及分析,并且与9株已在GenBank递交的HCMV UL145序列进行比较分析。结果:序列分析结果表明31株HCMV临床株的UL145基因是高度保守的。所有临床株的HCMV UL145开放阅读框架均为393 bp,编码蛋白含有130个氨基酸。所有临床株的核苷酸同源率为95.9%～100%,编码蛋白的同源率为97.7%～100%。临床症状不同的患儿其HCMV UL145基因及其编码蛋白具有相似的结构。所有先天感染患儿临床株的UL145编码蛋白具有蛋白激酶(C PKC)磷酸化功能位点和酪蛋白激酶(CK2)磷酸化功能位点。结论:HCMV UL145基因在临床株中是高度保守,未发现其与HCMV先天感染不同临床症状间存在明显的关系。HCMV UL145基因的高度保守性在先天感染中具有重要作用。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 ul145基因 基因多态性

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人巨细胞病毒UL135基因在临床低传代分离株中的多态性研究 被引量：1

5

作者 孙峥嵘 阮强 +3 位作者 何蓉 马艳萍 齐莹 吉耀华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期17-19,共3页

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL135基因编码序列在临床低传代分离株中的多态性，探讨HCMV基因多态性与其感染引起不同临床疾病之间的关系。方法：对29株经荧光定量PCR方法检测HCMV．DNA为阳性的临床低传代分离株的细胞培养上清液进行... 目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL135基因编码序列在临床低传代分离株中的多态性，探讨HCMV基因多态性与其感染引起不同临床疾病之间的关系。方法：对29株经荧光定量PCR方法检测HCMV．DNA为阳性的临床低传代分离株的细胞培养上清液进行HCMVUL135全序列PCR扩增，并对PCR扩增阳性的25例标本进行序列测定及分析。结果：29株临床低传代分离株有25株PCR扩增阳性。25株分离株UL135开放读码框架（0RF）长度均与Toledo株相同，其核苷酸的变异率为0．1％-2．6％。与Toledo株相比，部分分离株具有氨基酸翻译后修饰位点的新增或缺失。25株临床分离株UL135蛋白质二级结构预测结果显示了第28位、313—317位、161—163位、171位氨基酸均有蛋白质结构二级的改变。结论：25株HCMV临床低传代分离株UL135基因及其编码产物的氨基酸序列比较保守，但仍存在一定程度的多态性，未发现UL135基因的变化与HCMV先天感染导致的不同疾病存在着相关联系。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 ul135基因 基因多态性

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人巨细胞病毒UL137基因在临床低传代分离株中的多态性研究

6

作者 黄郁晶 阮强 +5 位作者 卢颖 齐莹 何蓉 马艳萍 吉耀华 孙峥嵘 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期20-22,共3页

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL137基因在先天巨细胞病毒感染临床低传代分离株中的多态性。方法：选择经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床分离株进行涵盖UL137全序列的UL136，UL138基因全序列PCR扩增，对扩增阳性的标本进行... 目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL137基因在先天巨细胞病毒感染临床低传代分离株中的多态性。方法：选择经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床分离株进行涵盖UL137全序列的UL136，UL138基因全序列PCR扩增，对扩增阳性的标本进行全序列的测序，核实测序结果，拼接出UL137基因编码序列，进行相关分析。结果：经分析获得22株HCMV临床分离株UL137ORF核苷酸序列，核苷酸变异分布于整个编码区，但主要集中在5’端220—290bp处，均为核苷酸碱基替换，无插入及移码突变。在UL137预测编码蛋白氨基酸序列中，新增2个半胱氨酸位点，导致17株临床分离株在71-76位氨基酸出现了N相连豆蔻酰化位点（MYR）的新增，及第90～92位氨基酸硫化cAMP位点的相应缺失。结论：HCMVUL137基因在临床低传代分离株中高度保守，但存在一定的多态性。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 ul137基因 多态性

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人巨细胞病毒UL144基因克隆表达及其对树突状细胞功能的影响

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作者 汪怀周 蔡刚 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期874-878,共5页

目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV)UL144基因的重组腺病毒,研究UL144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出UL144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMVUL144基因的... 目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV)UL144基因的重组腺病毒,研究UL144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出UL144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMVUL144基因的重组腺病毒载体pAd-UL144,转染HEK293细胞后包装产生重组腺病毒Ad-UL144。通过RT-PCR检测目的基因的表达。将此重组腺病毒转染小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术检测DC表面分子,采用ELISA技术分析DC培养上清中的细胞因子,采用3H-TdR掺入法检测UL144基因修饰的DC激活T细胞增殖的能力。结果:成功将UL144基因片段克隆至载体上,并经HEK293细胞包装出病毒颗粒,经测定病毒滴度为3×1010pfu/ml。流式细胞术检测显示,UL144基因修饰的DC表面分子CD80、CD86和I-Ad表达水平低于对照组(P<0.01)。ELISA分析表明,UL144基因修饰的DC分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的能力减弱(P<0.05)。UL144基因修饰的DC介导的T细胞增殖功能明显低于DC对照组(P<0.01)。结论:UL144基因修饰的DC具有维持相对未成熟状态的能力,并减弱了对抗原特异性T效应细胞的刺激功能。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 ul144基因 疱疹病毒侵入介体 树突状细胞 免疫耐受

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人巨细胞病毒UL/b’区基因多态性

8

作者 阮强 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期524-527,共4页

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中普遍感染,在新生儿中,HCMV先天感染可引起黄疸性肝炎、先天性巨结肠、小头畸形等各种消化系统和神经系统畸形。导致HCMV不同致病性的发病机制还不十分清楚,一方面与宿主免疫功能,即有... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中普遍感染,在新生儿中,HCMV先天感染可引起黄疸性肝炎、先天性巨结肠、小头畸形等各种消化系统和神经系统畸形。导致HCMV不同致病性的发病机制还不十分清楚,一方面与宿主免疫功能,即有效的细胞及体液免疫应答有关;另一方面与病毒的数量、入侵部位及病毒自身的基因结构相关,尤其是与病毒毒力、组织嗜性和病毒逃避机体免疫攻击能力密切相关的基因关系密切。对于HCMV基因多态性的研究可以在基因层面揭示不同来源临床株的结构特点,对全面认识HCMV基因组和进一步深入研究基因组功能具有重要意义,成为HCMV研究的热点领域之一。近年来,国际多个研究小组对HCMV临床株广泛存在而旧有实验室株缺失的UL/b’区基因进行了较系统的研究,取得了较快的进展。此专题对这方面的研究进展进行概要介绍,以供同行了解与深入研究。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 基因多态性 ul/b’区基因

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人巨细胞病毒临床株UL146基因多态性研究 被引量：2

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作者 常淑婷 毛志芹 +7 位作者 易彪 尹晓波 阮强 何蓉 吉耀华 孙峥嵘 马艳萍 齐莹 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期749-751,共3页

目的研究人巨细胞病毒(HCMV)UL146基因在巨细胞病毒感染临床株中的多态性,寻找具有临床诊断、治疗价值的基因,为HCMV感染的临床诊断和防治提供资料。方法选择经QPCR检测尿HCMV-DNA为阳性的临床株进行UL146基因序列PCR扩增,对扩增阳性标... 目的研究人巨细胞病毒(HCMV)UL146基因在巨细胞病毒感染临床株中的多态性,寻找具有临床诊断、治疗价值的基因,为HCMV感染的临床诊断和防治提供资料。方法选择经QPCR检测尿HCMV-DNA为阳性的临床株进行UL146基因序列PCR扩增,对扩增阳性标本进行序列测定和分析。结果 28株扩增阳性标本序列之间有很大变异,种系树化分析结果显示可以分为3个型,4个亚型;ELRCXC的趋化因子功能区在各序列中高度保守。结论 HCMV-UL146基因呈现高度多态性,其编码的ELRCXC趋化因子功能区在各序列中高度保守,HCMV-UL146基因多态性与HCMV感染不同临床症状之间的关系尚不明确。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 ul146基因 多态性 趋化因子

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广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL141基因的序列特征

10

作者 谭琪琪 王波 +3 位作者 胡兢晶 苏海浩 伍苑宾 郭梦杰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第10期1048-1052,共5页

目的 UL141基因的结构特征及多态性对发现人巨细胞病毒(HCMV)感染致病性机制具有指导意义。文中旨在研究广州地区HCMV临床低传代株UL141基因的序列特征。方法选取2016年3月至2017年3月在广州医科大学附属广东省妇儿医院儿科就诊的10例H... 目的 UL141基因的结构特征及多态性对发现人巨细胞病毒(HCMV)感染致病性机制具有指导意义。文中旨在研究广州地区HCMV临床低传代株UL141基因的序列特征。方法选取2016年3月至2017年3月在广州医科大学附属广东省妇儿医院儿科就诊的10例HCMV患儿,收集患儿尿液标本,从中分离低传代临床病毒株,应用多重PCR方法鉴定,对其进行HCMV UL141基因全序列扩增、克隆、鉴定、测序,并在Gen Bank搜索HCMV UL141同源序列,行序列分析。结果UL141基因存在UL141a及UL141b 2处开放阅读框架(ORF),分别由315及1017个核苷酸构成,Gen Bank登记号分别为DQl80372和DQl80371。UL141基因全长1277 bp,编码蛋白由338个氨基酸残基组成,UL141a及UL141b开放阅读框架ORF分别为315、1017 bp,其DNA序列比较保守,存在46处位点变异,变异皆为碱基替换,无插入或缺失。HCMV UL141编码蛋白翻译后修饰位点在所有分离株中均比较保守,所有分离株UL141蛋白的等电点均在8.36~8.68之间。结论广州地区HCMV临床低传代分离株UL141基因及其编码的氨基酸序列比较保守,但仍存在一定的多态性,为进一步揭示ULl41蛋白的功能及HCMV感染的致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 生物信息学 ul141 基因序列 多态性

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利用酵母双杂交系统筛选与人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23相互作用的病毒编码蛋白 被引量：3

11

作者 肖静 胡嘉淼 +7 位作者 肖小平 员月明 刘明亮 曾宝娟 李婧惠 周天鸿 冉艳红 李弘剑 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期377-383,共7页

人巨细胞病毒(HCMV)UL23基因编码病毒皮层蛋白,该基因缺失时,病毒在人包皮成纤维细胞(HFF)中的繁殖速度加快.为进一步阐述HCMV UL23基因编码产物pUL23的功能及调控机制,采用鸟枪法构建了融合于GAL4活性区域的HCMV Towne株基因组随机表... 人巨细胞病毒(HCMV)UL23基因编码病毒皮层蛋白,该基因缺失时,病毒在人包皮成纤维细胞(HFF)中的繁殖速度加快.为进一步阐述HCMV UL23基因编码产物pUL23的功能及调控机制,采用鸟枪法构建了融合于GAL4活性区域的HCMV Towne株基因组随机表达文库.利用酵母双杂交技术,以pGBKT7-UL23为诱饵质粒,从构建的HCMV基因组表达文库中筛选到与pUL23相互作用的病毒编码蛋白pUL24.GST-pull down实验和免疫共沉淀实验进一步确认两种病毒蛋白之间的相互作用.结果表明,构建的HCMV基因组表达文库能够用于GAL4酵母双杂交系统筛选与诱饵蛋白相互作用的病毒自身编码蛋白.病毒蛋白pUL23和pUL24之间具有相互作用,这为进一步阐述pUL23在HCMV感染过程中的功能提供依据.该研究为揭示HCMV病毒感染机制奠定了基础. 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 ul23基因 BAC 基因组文库 蛋白质相互作用

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稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究 被引量：1

12

作者 杨丹丽 肖小平 +6 位作者 宫君原 员月明 李月琴 张欣 邹弈 周天鸿 李弘剑 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期966-970,共5页

目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法:通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒... 目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法:通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23。将该载体导入Am-phoPackTM-293细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系。采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位。结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白。共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23定位于细胞质,处于细胞核周边。结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系。该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 基因 ul23 逆转录病毒

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人巨细胞病毒基因突变与耐药性的相关性研究进展

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作者 仲佳 朱有名 +1 位作者 周亚滨 孙小虎 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期21-26,共6页

人巨细胞病毒是人群中感染非常广泛的一类病毒,近年来其感染引发的严重疾病日益增加。为了预防和控制该疾病,须反复长期使用抗病毒药物,从而导致该药耐药性的出现。本文介绍了巨细胞病毒基因突变与耐药性的相关性研究进展,结合药物的作... 人巨细胞病毒是人群中感染非常广泛的一类病毒,近年来其感染引发的严重疾病日益增加。为了预防和控制该疾病,须反复长期使用抗病毒药物,从而导致该药耐药性的出现。本文介绍了巨细胞病毒基因突变与耐药性的相关性研究进展,结合药物的作用机制和病毒的结构特点对人巨细胞病毒的主要耐药突变区域UL97基因和UL54基因的突变位点进行了统计分析,提出了耐药突变的高发区域,对进一步研究耐药蛋白空间结构的变化及新药的研制有重要的指导意义.最后对交叉耐药的研究进行了分析综述,对耐药人巨细胞病毒的研究方向及关注的问题提出了自己的看法。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 L97基因 ul54基因 数学建模耐药性

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人巨细胞病毒耐药性的研究进展 被引量：2

14

作者 罗丹 方峰 《医药导报》 CAS 2007年第1期49-51,共3页

抗人巨细胞病毒(HCMV)的治疗药物主要有更昔洛韦(GCV)、膦甲酸钠(FOS)和西多福韦(CDV)。但近年来,其耐药株呈增多趋势,主要的耐药机制为病毒UL97基因和UL54基因发生了突变。根据耐药株出现的时间和高危因素,可采用表型和基因型方法进行... 抗人巨细胞病毒(HCMV)的治疗药物主要有更昔洛韦(GCV)、膦甲酸钠(FOS)和西多福韦(CDV)。但近年来,其耐药株呈增多趋势,主要的耐药机制为病毒UL97基因和UL54基因发生了突变。根据耐药株出现的时间和高危因素,可采用表型和基因型方法进行检测,以利于HCMV感染的及时监测并采取相应的处理措施。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 耐药 ul97基因 ul54基因 表型检测 基因型检测

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器官移植后巨细胞病毒耐药的处理 被引量：2

15

作者 康一生 于立新 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第1期73-77,共5页

巨细胞病毒(CMV)感染是器官移植术后常见的并发症,其耐药发生亦非罕见,且易导致临床预后不良。CMV耐药的危险因素来源于宿主、病毒以及抗病毒药物等各个方面,产生耐药的原因则主要由于药物发挥活性的基因(UL97基因)或病毒复制的基因(UL5... 巨细胞病毒(CMV)感染是器官移植术后常见的并发症,其耐药发生亦非罕见,且易导致临床预后不良。CMV耐药的危险因素来源于宿主、病毒以及抗病毒药物等各个方面,产生耐药的原因则主要由于药物发挥活性的基因(UL97基因)或病毒复制的基因(UL54基因)发生突变所致。目前临床上诊断CMV耐药的手段相对缺乏,主要依靠检测病毒基因突变,并以此指导下一步的临床决策。UL97基因突变的临床措施可以将更昔洛韦更换为西多福韦或膦甲酸钠,而UL54基因突变则通常可以更换为膦甲酸钠。目前一些新型抗CMV药物如letermovir、maribavir、brincidofovir以及一些用于其他指征的药物如来氟米特、青蒿酯也为CMV耐药的治疗带来了新的曙光。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 器官移植 ul97基因突变 Letermovir Maribavir Brincidofovir

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广州地区HCMV临床病毒株UL137基因的结构特征与多态性 被引量：3

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作者 王波 李月琴 +6 位作者 胡兢晶 苏海浩 何震宇 田传军 张纯青 叶铁真 周天鸿 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期264-269,共6页

【目的】研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL137基因的结构特征与基因多态性。【方法】从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株,经多重PCR鉴定后分别命名为HCMVD2、D3和D5... 【目的】研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL137基因的结构特征与基因多态性。【方法】从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株,经多重PCR鉴定后分别命名为HCMVD2、D3和D52。对3株临床分离株进行HCMVUL137基因全序列PCR扩增,PCR产物纯化后进行基因克隆,构建HCMVUL137-pMD18-T重组质粒;基因测序;将HCMVUL137基因序列呈报GenBank,并进行基因生物信息学分析。【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株。克隆测序后呈报GenBank并被收录,收录序列号分别为:DQ180388、DQ180376、DQ180360。通过序列分析,结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守,同源性在96.91%～100%之间,其变异均为碱基替换;编码蛋白均由96个氨基酸残基组成,同源性在90.63%～100%之间,超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间;编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS、MYS、cAMPs三类,其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守,cAMPs位点仅在5株病毒出现;编码蛋白等电点在11.50～12.00之间,呈强碱性。【结论】广州地区临床低传代分离株HCMVUL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性。提示HCMVUL137ORF可能是一个具有重要功能的基因。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 临床病毒株 低传代 ul137 基因序列 基因多态性

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贫困山区早孕期HCMV宫内感染与UL54基因突变的研究

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作者 盛秋 李芬 +3 位作者 于学文 韩蓁 李学成 任永惠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期319-320,共2页

目的:探讨贫困山区早孕期人巨细胞病毒(HCMV)宫内活动性感染与HCMVUL54基因突变的关系。方法:采用免疫组织化学(SABC)PCR-RFLP的方法检测人绒毛组织中HCMV早期抗原的存在及HCMVUL54基因密码子501是否发生突变。结果:贫困山区早孕期妇女H... 目的:探讨贫困山区早孕期人巨细胞病毒(HCMV)宫内活动性感染与HCMVUL54基因突变的关系。方法:采用免疫组织化学(SABC)PCR-RFLP的方法检测人绒毛组织中HCMV早期抗原的存在及HCMVUL54基因密码子501是否发生突变。结果:贫困山区早孕期妇女HCMV宫内活动性感染率为18.91%;PCR-RFLP分析结果显示,在早孕期HCMV宫内感染者中UL54501密码子未发生突变。结论:贫困山区早孕期HCMV宫内感染与HCMVUL54基因密码子501突变无关,但不排除其他位点的突变或其他形式异常导致病毒致病性改变存在的可能性。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 宫内感染 ul54基因

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引导RNase P对HCMV UL54 mRNA片段体外切割的EGS构建

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作者 吕静竹 李月琴 周天鸿 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期4-6,共3页

HCMV是一种广泛存在的疱疹病毒,在免疫抑制和免疫功能低下人群中,HCMV感染可引起严重疾病。RNase P是细胞内催化tRNA5′末端成熟的酶,当EGSs与靶mRNA互补结合并形成类似tNRA的复合物时,大肠杆菌RNase P催化亚基M1 RNA可具备对靶mRNA特... HCMV是一种广泛存在的疱疹病毒,在免疫抑制和免疫功能低下人群中,HCMV感染可引起严重疾病。RNase P是细胞内催化tRNA5′末端成熟的酶,当EGSs与靶mRNA互补结合并形成类似tNRA的复合物时,大肠杆菌RNase P催化亚基M1 RNA可具备对靶mRNA特异的催化切割活性。为研究抗病毒制剂,针对HCMV DNA多聚酶UL54 mRNA设计并构建特异性的EGS-C6,通过对UL54基因亚克隆片段转录产物体外切割研究,证实该EGS具备引导M1 RNA对UL54 mRNA特异切割的能力,可发展成一种新型抗病毒制剂。 展开更多

关键词 RNASE P 外部引导序列 人巨细胞病毒 ul54基因

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HCMV IE86对恶性胶质瘤细胞凋亡及p53表达活性的影响 被引量：1

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作者 刘婷 钱冬萌 +5 位作者 胡明 于淼 张现娟 秦子英 刘小可 王斌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期44-49,共6页

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)能诱导肿瘤细胞恶性转化且抑制肿瘤细胞凋亡,但HCMV编码的主要即刻早期调控蛋白IE86在这一过程中是否发挥关键作用仍然未知。为探究IE86对基因修饰荷胶质瘤小鼠p53表达水平及恶性胶质瘤细胞凋... 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)能诱导肿瘤细胞恶性转化且抑制肿瘤细胞凋亡,但HCMV编码的主要即刻早期调控蛋白IE86在这一过程中是否发挥关键作用仍然未知。为探究IE86对基因修饰荷胶质瘤小鼠p53表达水平及恶性胶质瘤细胞凋亡情况的影响,本研究通过PCR技术鉴定基因修饰小鼠IE86表达情况;实时定量PCR技术检测IE86和p53mRNA表达水平变化;免疫组织化学方法检测p53和p21蛋白的表达水平;TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况。结果显示,成功构建了IE86基因修饰小鼠模型;与IE86阴性组相比IE86阳性组p53表达水平上升(P<0.05),但p21表达水平下降(P<0.05);IE86阳性组细胞抗凋亡能力增强(P<0.05)。以上结果表明,在基因修饰的小鼠中IE86持续表达但p53转录活性的指示标志p21下调,且IE86可提高恶性胶质瘤细胞抗凋亡能力。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 胶质瘤细胞ul261 IE86基因修饰小鼠 IE86 P53 p21 凋亡

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桥序列在构建人工核酶M1GS中的作用 被引量：4

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作者 郑永霞 李弘剑 +4 位作者 李月琴 陈浩军 唐冬生 张欣 周天鸿 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期151-155,共5页

目的:为检验连接的GS序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法:通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS ,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活... 目的:为检验连接的GS序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法:通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS ,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活性。结果:有桥序列的M1GS具备体外特异切割底物的核酶活性,而无桥序列的M1GS核酶未表现体外切割活性。 展开更多

关键词 核酶 核酶P 人巨细胞病毒 ul54基因

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