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谷氨酸棒杆菌人工核糖体结合位点(RBS)文库的建立与应用 被引量:1
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作者 张悦 张继伟 +3 位作者 吴硕 徐宁 刘君 魏亮 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第23期25-32,共8页
核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)是一种重要的生物控制元件,是实现基因表达精细调控的重要工具,在微生物代谢工程和合成生物学中具有广泛的应用。谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是一种重要的工业微生物,被广泛应... 核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)是一种重要的生物控制元件,是实现基因表达精细调控的重要工具,在微生物代谢工程和合成生物学中具有广泛的应用。谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是一种重要的工业微生物,被广泛应用于多种氨基酸和有机酸的工业化发酵生产。然而目前,关于谷氨酸棒杆菌RBS元件文库的报道仍然较少。该研究基于谷氨酸棒杆菌RBS序列基本特征,设计构建了一个随机RBS文库。利用流式细胞分选技术和96孔板筛选技术,建立了RBS文库高通量筛选方法。通过2步筛选,构建了一个调控范围广,覆盖范围均匀的人工RBS元件文库,调控范围达到29.04倍。利用α-淀粉酶表达系统对构建的人工RBS文库进行测试和表征,结果表明人工RBS文库具有较高的稳定性和通用性。随后该研究将人工RBS文库应用于L-高丝氨酸生物合成途径的调控优化。利用不同强度RBS元件对L-高丝氨酸合成途径关键酶LysCr和Homr进行精细表达调控,获得了具有高效L-高丝氨酸合成能力的最佳组合,L-高丝氨酸产量到达12.7 g/L,比野生型菌株高丝氨酸含量提高了3.6倍。综上所述,该研究构建了一个调控范围广、稳定性高的谷氨酸棒杆菌人工RBS文库,为谷氨酸棒杆菌代谢工程改造和基因精细表达调控提供了有效的控制元件。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 人工核糖体结合位点文库 高通量筛选 L-高丝氨酸
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基因工程
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第3期28-42,共15页
900573 通过电激作用对类肠膜明串珠菌的质粒转化及其在分子克隆中的用途[英]/David. S. …∥ Appl. Environ. Microbiol.-1989,55(6)-1483~1489[译自DBA,1989,8(15),89-08707] 报道了利用电激对类肠膜明串珠菌(Leuconostoc paramesent... 900573 通过电激作用对类肠膜明串珠菌的质粒转化及其在分子克隆中的用途[英]/David. S. …∥ Appl. Environ. Microbiol.-1989,55(6)-1483~1489[译自DBA,1989,8(15),89-08707] 报道了利用电激对类肠膜明串珠菌(Leuconostoc paramesenteroides)的转化。 展开更多
关键词 类肠膜明串珠菌 分子克隆 限制性位点 粘性末端 启动子 核糖体结合位点 基因组文库 报道基因 电激 基因融合
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DNA分析与扩增
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第6期36-40,共5页
关键词 DNA分析 载体转化 乳球菌 基因组文库 定序 凝胶电泳 人基因组 模板浓度 核糖体结合位点 聚合酶链反应
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基因工程
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第4期34-57,共24页
941288用改进的显示技术(DDRT-PCR)鉴别不同表达的mRNA种类[英]/Bauer,D. …∥NucleicAcids Res.-1993,21(18).-4272~4280[译自DBA,1993,12(22),93-12586] 建立了一种改进方法,差异显示逆向转录PCR,用以广泛地展示表达的基因并检出不... 941288用改进的显示技术(DDRT-PCR)鉴别不同表达的mRNA种类[英]/Bauer,D. …∥NucleicAcids Res.-1993,21(18).-4272~4280[译自DBA,1993,12(22),93-12586] 建立了一种改进方法,差异显示逆向转录PCR,用以广泛地展示表达的基因并检出不同细胞的表达差异。经优化该方法可快速有效地鉴别基因并采用了自动分析系统,应用泛围也扩大了。 展开更多
关键词 基因表达系统 启动子调控 酵母人工染色体 DNA 电激法 BamHI ECORI 突变体 核糖体结合位点 转座子
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基因诱变、重组、克隆
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第9期32-35,共4页
922411 人胃H,K-ATP酶β-亚基的cDNA克隆[英]/Ma,J.…∥Bioehem.Biophys.Res.Commun.-1991,180(1).-39~45[译自DBA,1991,10(25),91-14505] 利用两个寡核苷酸DNA探针(由来自相应的大鼠和家兔ATP酶β-亚基的cDNA序列组成),从人胃粘膜噬... 922411 人胃H,K-ATP酶β-亚基的cDNA克隆[英]/Ma,J.…∥Bioehem.Biophys.Res.Commun.-1991,180(1).-39~45[译自DBA,1991,10(25),91-14505] 利用两个寡核苷酸DNA探针(由来自相应的大鼠和家兔ATP酶β-亚基的cDNA序列组成),从人胃粘膜噬菌体λ-gt10基因文库中分离出编码胃H+/K+-转运ATP酶的全长eDNA克隆。将插入序列再克隆到质粒噬菌体pBluescript-Ⅱ-SK+中,测定基因的DNA序列。插入序列长1407bp.编码分子量为33367的291个氨基酸的肽。 展开更多
关键词 基因克隆 酵母人工染色体 操纵子 假丝酵母 杆状病毒 电激法 逆病毒 核糖体结合位点 突变体 染色体步移
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