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miR-181a促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化催乳素的表达 被引量:10
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作者 张群 刘红玉 +4 位作者 蒋玥 王玢 颜桂军 孙海翔 胡娅莉 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第2期129-134,共6页
目的目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stro... 目的目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stromal cell,hESC)体外诱导蜕膜化过程中蜕膜化标志基因蜕膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)表达的调控作用。方法收集怀孕0~6.5 d孕鼠子宫组织,采用TRIZOL法提取总RNA,通过实时定量PCR检测子宫组织中miR-181a的表达。制备Ad-miR-181a重组腺病毒,并感染hESC,24 h后采用0.5 mmol/L 8-Br-cAMP和1μmol/L Medroxyproges-terone(MPA)联合进行体外蜕膜化诱导培养;通过化学发光免疫法和实时定量PCR分别检测细胞培养液上清中dPRL的浓度与间质细胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的表达;同时采用荧光素酶报告基因检测miR-181a对hESC中dPRL(-332/+65)启动子的调控作用。结果早孕小鼠子宫组织中miR-181a的表达高于非妊娠小鼠子宫,且随着妊娠天数的增加呈逐渐上升的趋势,在小鼠着床"窗口期"即孕4.5 d达到高峰(2.60±0.15倍,P<0.01,n=5),孕5.5 d子宫miR-181a的表达开始平稳下降;成功获得滴度为5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,该腺病毒介导的miR-181a过表达显著增加hESC蜕膜化标志基因dPRL mRNA表达水平,增高超过8倍(P<0.01);在8-Br-cAMP和MPA联合诱导hESC体外蜕膜化时,高表达miR-181a可明显增加8-Br-cAMP联合MPA诱导的PRL mRNA表达水平与PRL蛋白分泌(P<0.01)。荧光素酶报告基因进一步证实miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)启动子的活性达到2倍(P<0.05)。结论 miR-181a参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控。 展开更多
关键词 miR-181a 催乳素 蜕膜化 人子宫内膜间质细胞
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Nur77促进人子宫内膜蜕膜化间质细胞中催乳素的表达 被引量:4
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作者 蒋玥 赵静 +4 位作者 华美娟 甄鑫 胡娅莉 颜桂军 孙海翔 《医学研究生学报》 CAS 2011年第1期5-10,共6页
目的蜕膜化催乳素在妊娠的建立与维持中具有重要作用,但目前对参与蜕膜化催乳素表达调节因子的研究较少。文章旨在探讨孤儿核受体Nur77在人子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中对蜕膜化标志基因(Prolactin,PRL)的作用。方法制备Ad-Flag-Nur77... 目的蜕膜化催乳素在妊娠的建立与维持中具有重要作用,但目前对参与蜕膜化催乳素表达调节因子的研究较少。文章旨在探讨孤儿核受体Nur77在人子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中对蜕膜化标志基因(Prolactin,PRL)的作用。方法制备Ad-Flag-Nur77重组腺病毒,通过荧光素酶报告基因和荧光定量PCR结合重组腺病毒介导的Nur77过表达及小干扰RNA沉默Nur77基因的实验,阐述Nur77对蜕膜催乳素的调控作用。结果成功获得滴度为8×1010ifu/ml的重组Nur77腺病毒,该腺病毒可在子宫内膜间质细胞中高表达Flag-Nur77融合蛋白;体外培养的人子宫内膜间质细胞经8-Br-cAMP和甲羟孕酮(medroxy progesterone,MPA)刺激后,Nur77的表达明显增加,并在体外诱导蜕膜化培养的第3天达到高峰;过表达Nur77可明显上调人子宫内膜间质细胞中dPRL(-332/+65)启动子活性>4倍,并以浓度依赖的方式明显增加人子宫内膜间质细胞中PRL mRNA的表达,P<0.01;功能缺失实验进一步表明基因沉默内源性Nur77蛋白表达明显抑制dPRL启动子活性达60%,同时显著抑制8-Br-cAMP和MPA诱导的人子宫内膜间质细胞中PRLmRNA的表达,P<0.01。结论孤儿核受体Nur77参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控。 展开更多
关键词 Nur77 催乳素 蜕膜化 人子宫内膜间质细胞
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NOD样受体家族蛋白3调控子宫内膜间质细胞催乳素分泌的作用机制 被引量:5
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作者 张瑜 程茜 +3 位作者 王淑娴 戈榭 马汝钧 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第2期124-130,共7页
目的NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)在子宫内膜中的生理性功能研究较少。文中旨在研究NLRP3在子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的表达和调控作用。方法选自2020年4月至6月在东部战区总医院生殖中心20例不孕症患者的子宫内膜样本。收集人增殖期(... 目的NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)在子宫内膜中的生理性功能研究较少。文中旨在研究NLRP3在子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中的表达和调控作用。方法选自2020年4月至6月在东部战区总医院生殖中心20例不孕症患者的子宫内膜样本。收集人增殖期(n=10)及蜕膜期(n=10)的子宫内膜。另选用SPF级30只6~8周龄雌鼠和10只雄鼠,获取小鼠交配后见栓天数(dpc)0.5~7.5天的子宫内膜,采用Western blot、免疫组化检测NLRP3的表达及定位。体外利用对羟基苯甲酸甲酯(MPA)和8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)联合诱导人间质细胞系T-HESCs蜕膜化,检测蜕膜化过程中NLRP3的表达情况。干扰NLRP3的表达后,通过实时荧光定量PCR及ELISA分别检测细胞及其培养上清中蜕膜化标志物催乳素(PRL)的表达情况。结果免疫组化结果显示,在人蜕膜期子宫内膜中,可见大量NLRP3阳性细胞,蜕膜期NLRP3的表达量较增殖期显著上升。Western blot结果所示,人蜕膜期子宫内膜较增殖期NLRP3显著高表达。免疫组化结果所示,NLRP3在小鼠妊娠早期上调,dpc 3.5天表达最高,可见大量NLRP3阳性细胞表达,细胞质棕黄色深染,之后下降。Western blot结果所示,在小鼠妊娠早期,随着妊娠时间增加,NLRP3表达量先上升后下降,dpc 3.5天达到峰值,与dpc 0.5天和dpc 7.5天比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果所示,随着诱导人间质细胞蜕膜化时间延长,NLRP3及caspase-1表达量显著升高。与12 h NLRP3、caspase-1蛋白表达量(1.76±0.04、1.28±0.02)比较,0 h(1.00±0.01、0.98±0.01)明显降低,24 h(2.26±0.03、1.95±0.05)明显升高(P<0.05)。结论NLRP3可促进间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达和分泌,为研究NLRP3在子宫内膜围种植期调控间质细胞蜕膜化奠定基础。 展开更多
关键词 NOD样受体家族蛋白3 蜕膜化 人子宫内膜间质细胞 催乳素
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HOXA10与连续TTAT基序结合抑制p/CAF表达 被引量:5
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作者 华美娟 赵静 +4 位作者 陈林君 颜桂军 刁振宇 胡娅莉 孙海翔 《医学研究生学报》 CAS 2009年第11期1143-1146,1149,I0003,共6页
目的:转录因子HOXA10在胚胎着床和子宫内膜蜕膜化过程中发挥重要作用。p/CAF是HOXA10新的靶基因,文章旨在筛选并鉴定p/CAF启动子区与HOXA10功能性结合的序列。方法:制备重组腺病毒HOXA10(ad-HOXA10),用于感染人子宫内膜间质细胞(hESC);... 目的:转录因子HOXA10在胚胎着床和子宫内膜蜕膜化过程中发挥重要作用。p/CAF是HOXA10新的靶基因,文章旨在筛选并鉴定p/CAF启动子区与HOXA10功能性结合的序列。方法:制备重组腺病毒HOXA10(ad-HOXA10),用于感染人子宫内膜间质细胞(hESC);构建p/CAF启动子区多种突变报告基因质粒;采用萤光素酶报告基因实验检测结合腺病毒介导的HOXA10基因过表达,分析hESC中HOXA10对p/CAF启动子转录活性的调控。结果:获得滴度为2.4×1011ifu/mL的重组ad-HOXA10,对hESC的感染率达到80%以上。HOXA10通过结合连续的3个TTAT(-710^-674 nt)基序抑制p/CAF启动子活性,连续的3个TTAT基序的一级结构影响HOXA10的功能性结合。结论:p/CAF启动子区连续的3个TTAT基序是HOXA10功能性结合所必须的,HOXA10可能通过调控p/CAF的表达来控制hESC的增殖与分化。 展开更多
关键词 HOXA10 p/CAF 人子宫内膜间质细胞
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