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重组人卵透明带蛋白3的制备及其免疫学活性分析 被引量:2
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作者 郭焱 曲晓波 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1119-1121,共3页
目的:纯化制备rhuZP3,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-1/huZP3的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,然后SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。rhuZP3免疫小鼠,ELISA法检测抗血清对rhZP3的抗体反... 目的:纯化制备rhuZP3,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-1/huZP3的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,然后SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。rhuZP3免疫小鼠,ELISA法检测抗血清对rhZP3的抗体反应。结果:表达出了可溶性融合蛋白,纯化后的rhuZP3纯度达95%。而且它在ELISA鉴定实验中能被抗rhuZP3抗体识别。结论:通过原核表达系统制备的rhuZP3及其抗体具有免疫学活性。 展开更多
关键词 人卵透明带蛋白3 表达 纯化 活性
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人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较
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作者 周文燊 熊波 +4 位作者 李文星 谢琪璇 肖銮娟 张春雪 潘善培 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期117-122,共6页
目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区... 目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。 展开更多
关键词 重组人卵透明ZP3蛋白 表达 跨膜区 酶切位点突变 组氨酸纯化标签
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蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用 被引量:1
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作者 谢琪璇 郑育声 +3 位作者 彭雅林 肖銮娟 余巍 潘善培 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1208-1210,共3页
目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y ... 目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论 该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。 展开更多
关键词 层析 蛋白 定量 重组人卵透明ZP3蛋白 纯化
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重组人卵ZP3肽段在毕赤酵母中的表达 被引量:2
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作者 徐放 谢杏美 +1 位作者 孔明惠 曹佐武 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期533-538,共6页
目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794-1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组... 目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794-1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组质粒导入毕赤酵母中,筛选出高拷贝菌株,甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物。结果:成功构建酵母表达载体,并在酵母菌株X-33中诱导表达重组蛋白。重组蛋白可以与鼠抗重组人卵透明带hZP3融合肽段的抗血清发生特异结合,表明目的基因成功表达。结论:重组hZP3蛋白已在酵母中成功表达,目的蛋白能与相应的抗体结合。 展开更多
关键词 人卵透明hZP3蛋白 毕赤酵母 表达载体pPICZα 酵母表达 高拷贝转化子
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