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重组人卵透明带蛋白3的制备及其免疫学活性分析
被引量:
2
1
作者
郭焱
曲晓波
金宁一
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期1119-1121,共3页
目的:纯化制备rhuZP3,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-1/huZP3的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,然后SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。rhuZP3免疫小鼠,ELISA法检测抗血清对rhZP3的抗体反...
目的:纯化制备rhuZP3,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-1/huZP3的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,然后SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。rhuZP3免疫小鼠,ELISA法检测抗血清对rhZP3的抗体反应。结果:表达出了可溶性融合蛋白,纯化后的rhuZP3纯度达95%。而且它在ELISA鉴定实验中能被抗rhuZP3抗体识别。结论:通过原核表达系统制备的rhuZP3及其抗体具有免疫学活性。
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关键词
人卵透明带蛋白3
表达
纯化
活性
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职称材料
人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较
2
作者
周文燊
熊波
+4 位作者
李文星
谢琪璇
肖銮娟
张春雪
潘善培
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期117-122,共6页
目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区...
目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。
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关键词
重组
人卵
透明
带
ZP3
蛋白
表达
跨膜区
酶切位点突变
组氨酸纯化标签
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职称材料
蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用
被引量:
1
3
作者
谢琪璇
郑育声
+3 位作者
彭雅林
肖銮娟
余巍
潘善培
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第12期1208-1210,共3页
目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y ...
目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论 该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。
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关键词
层析
蛋白
定量
重组
人卵
透明
带
ZP3
蛋白
纯化
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职称材料
重组人卵ZP3肽段在毕赤酵母中的表达
被引量:
2
4
作者
徐放
谢杏美
+1 位作者
孔明惠
曹佐武
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期533-538,共6页
目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794-1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组...
目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794-1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组质粒导入毕赤酵母中,筛选出高拷贝菌株,甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物。结果:成功构建酵母表达载体,并在酵母菌株X-33中诱导表达重组蛋白。重组蛋白可以与鼠抗重组人卵透明带hZP3融合肽段的抗血清发生特异结合,表明目的基因成功表达。结论:重组hZP3蛋白已在酵母中成功表达,目的蛋白能与相应的抗体结合。
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关键词
人卵
透明
带
hZP3
蛋白
毕赤酵母
表达载体pPICZα
酵母表达
高拷贝转化子
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职称材料
题名
重组人卵透明带蛋白3的制备及其免疫学活性分析
被引量:
2
1
作者
郭焱
曲晓波
金宁一
机构
长春中医药大学
中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期1119-1121,共3页
基金
吉林省科技厅科研基金重大项目(20060415)
文摘
目的:纯化制备rhuZP3,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-1/huZP3的大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,然后SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。rhuZP3免疫小鼠,ELISA法检测抗血清对rhZP3的抗体反应。结果:表达出了可溶性融合蛋白,纯化后的rhuZP3纯度达95%。而且它在ELISA鉴定实验中能被抗rhuZP3抗体识别。结论:通过原核表达系统制备的rhuZP3及其抗体具有免疫学活性。
关键词
人卵透明带蛋白3
表达
纯化
活性
Keywords
Human zona pellucida
3
(rhuZP
3
)
Expression
Purification
Activity
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较
2
作者
周文燊
熊波
李文星
谢琪璇
肖銮娟
张春雪
潘善培
机构
暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所
出处
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期117-122,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30370541
30570683)
广东省自然科学基金资助项目(31883)
文摘
目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。
关键词
重组
人卵
透明
带
ZP3
蛋白
表达
跨膜区
酶切位点突变
组氨酸纯化标签
Keywords
recombinant human zona peUucida-
3
(rhZP
3
)
protease cleavage sites mutation
polyhistidine expression
transmembrane domain
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用
被引量:
1
3
作者
谢琪璇
郑育声
彭雅林
肖銮娟
余巍
潘善培
机构
暨南大学生殖免疫研究中心
海南大学生物工程系
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第12期1208-1210,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目 ( 30 370 54 1)
广东省自然科学基金资助项目 ( 31883)
广东省科技计划资助项目 ( 2 0 0 3830 50 1)~~
文摘
目的 建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法 利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果 洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论 该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。
关键词
层析
蛋白
定量
重组
人卵
透明
带
ZP3
蛋白
纯化
Keywords
chromatography
protein
quantify
rhZP
3
purification
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
Q513 [生物学—生物化学]
在线阅读
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职称材料
题名
重组人卵ZP3肽段在毕赤酵母中的表达
被引量:
2
4
作者
徐放
谢杏美
孔明惠
曹佐武
机构
暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所
暨南大学附属第一医院妇产科
出处
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期533-538,共6页
基金
国家自然科学基金重点项目(21307017)
文摘
目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794-1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组质粒导入毕赤酵母中,筛选出高拷贝菌株,甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物。结果:成功构建酵母表达载体,并在酵母菌株X-33中诱导表达重组蛋白。重组蛋白可以与鼠抗重组人卵透明带hZP3融合肽段的抗血清发生特异结合,表明目的基因成功表达。结论:重组hZP3蛋白已在酵母中成功表达,目的蛋白能与相应的抗体结合。
关键词
人卵
透明
带
hZP3
蛋白
毕赤酵母
表达载体pPICZα
酵母表达
高拷贝转化子
Keywords
human zona pellueide
3
protein
Pichia pastoris
pPICZα
yeast expression
high copy transformant
分类号
R339.22 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人卵透明带蛋白3的制备及其免疫学活性分析
郭焱
曲晓波
金宁一
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较
周文燊
熊波
李文星
谢琪璇
肖銮娟
张春雪
潘善培
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用
谢琪璇
郑育声
彭雅林
肖銮娟
余巍
潘善培
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
重组人卵ZP3肽段在毕赤酵母中的表达
徐放
谢杏美
孔明惠
曹佐武
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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职称材料
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