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人卵巢颗粒细胞分离培养的优化及生物学特性 被引量：2
1
作者 许素铭 王耀琴 +3 位作者 朱鹏飞 李宵 王春芳 武学清 《解剖学杂志》 CAS 2019年第2期116-120,共5页
目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性。方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基∶卵泡液=1∶1)进行培养。比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况。利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4... 目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性。方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基∶卵泡液=1∶1)进行培养。比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况。利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4、Sox2的表达,应用流式细胞术检测CD44、CD73、CD45的表达。结果:hGCs培养24 h贴壁良好,细胞间伸出伪足。对照组和实验组分别在培养14 d和21 d后出现凋亡。实验组雌激素的分泌显著增加,第9天出现高峰,第21天显著下降。培养第7天实验组Oct4和Nanog mRNA表达显著增加。培养7 d后,CD44、CD73表达阳性, CD45表达阴性。结论:该方法简单、有效,可获得大量hGCs。培养基中添加卵泡液有益于hGCs的生长,增加培养天数。同时hGCs可分泌雌激素并具有一定的干细胞特性。 展开更多
关键词 人卵巢颗粒细胞 细胞培养 细胞沉淀法 生物学特性 干细胞
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美洲大蠊小肽预处理对H_(2)O_(2)诱导人卵巢颗粒细胞氧化应激及凋亡的抑制作用
2
作者 孙蕊仙 唐运萍 +3 位作者 杨礼莲 伏蓉 王婧羽 隋世燕 《山东医药》 CAS 2023年第35期1-4,14,共5页
目的探讨不同浓度美洲大蠊小肽预处理对H_(2)O_(2)诱导人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)氧化应激及凋亡的影响。方法取对数生长期的KGN细胞,分为空白组、H_(2)O_(2)组和美洲大蠊小肽50、100、150组。各组均常规培养24 h,空白组不予特殊处理,H_(2... 目的探讨不同浓度美洲大蠊小肽预处理对H_(2)O_(2)诱导人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)氧化应激及凋亡的影响。方法取对数生长期的KGN细胞,分为空白组、H_(2)O_(2)组和美洲大蠊小肽50、100、150组。各组均常规培养24 h,空白组不予特殊处理,H_(2)O_(2)组加入250μmol/L H_(2)O_(2)作用6 h;美洲大蠊小肽50、100、150组分别加入50、100、150μg/mL美洲大蠊小肽进行预处理,然后加入250μmol/L H_(2)O_(2)作用6 h。采用CCK-8法检测空白组、H_(2)O_(2)组和美洲大蠊小肽50、100、150组分别预处理6、12、24 h的细胞存活率,并比较各组(美洲大蠊小肽50、100、150组均预处理12 h)细胞活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)表达。结果H_(2)O_(2)组细胞存活率低于空白组(P<0.05)。预处理6 h的美洲大蠊小肽50、100、150组细胞存活率与H_(2)O_(2)组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),预处理12、24 h的美洲大蠊小肽50、100、150组细胞存活率均高于H_(2)O_(2)组(P均<0.05)。与预处理6 h比较,美洲大蠊小肽50、100、150组预处理12、24 h的细胞存活率均升高(P均<0.05);预处理12、24 h的美洲大蠊小肽50、100、150组细胞存活率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。与空白组比较,H_(2)O_(2)组细胞MDA、NO、ROS表达均升高(P均<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,美洲大蠊小肽50、100、150组细胞MDA、NO、ROS表达均降低(P均<0.05),美洲大蠊小肽50、100、150组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论美洲大蠊小肽预处理能够减轻H_(2)O_(2)诱导的KGN细胞氧化应激及凋亡,以50μg/mL作用12 h为最佳预处理条件。 展开更多
关键词 美洲大蠊小肽 过氧化氢 氧化应激 细胞凋亡 人卵巢颗粒细胞
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氧化应激诱导卵巢颗粒细胞凋亡过程中调控线粒体自噬的关键因子研究
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作者 杨礼莲 隋世燕 +1 位作者 蒋蓉 徐琳杰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期6-14,共9页
为了筛选氧化应激诱导人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)凋亡过程中参与线粒体自噬的关键蛋白,取对数生长的KGN细胞,分为对照组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、羰基氰化氯苯腙(CCCP)组,待细胞融合率达85%~90%时,H_(2)O_(2)组加入250μmol/L H_(2)O_(2... 为了筛选氧化应激诱导人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)凋亡过程中参与线粒体自噬的关键蛋白,取对数生长的KGN细胞,分为对照组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、羰基氰化氯苯腙(CCCP)组,待细胞融合率达85%~90%时,H_(2)O_(2)组加入250μmol/L H_(2)O_(2)作用6 h建立氧化应激模型,CCCP组加入20μmol/L CCCP作用12 h建立线粒体自噬模型,对照组正常培养,收集细胞样本进行蛋白质组学分析,并使用蛋白免疫印迹(Western blot)法对关键蛋白进行验证。经生物信息学分析,结合参考文献,3个组之间有40个蛋白的表达存在差异,其中与线粒体自噬有关的蛋白有BNIP3、IRS2、GATA4和ENDOG;BNIP3与ENDOG存在相互联系。Western blot检测结果显示,BNIP3、IRS2和GATA4蛋白的表达水平与测序结果一致;与对照组相比,CCCP组ENDOG蛋白表达显著下调,但H_(2)O_(2)组无显著性差异。结果表明,BNIP3、IRS2和GATA4可能是氧化应激诱导KGN细胞凋亡过程中参与线粒体自噬的关键因子。 展开更多
关键词 人卵巢颗粒细胞 线粒体自噬 细胞凋亡 氧化应激 卵泡闭锁
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