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鱼腥草总黄酮通过调控TLR2/NF-κB信号通路改善小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎的机制研究
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作者 陆宏龙 赖飞娥 +1 位作者 黄洪 覃艺群 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第5期1426-1433,共8页
目的研究鱼腥草总黄酮对单纯疱疹病毒性角膜炎(Herpes simplex keratitis,HSK)小鼠的免疫调节作用,并初步探讨其作用机制。方法采用手术刀片于Balb/c小鼠角膜上皮层划“#”字并接种I型单纯疱疹病毒(I type herpes simplex virus,HSV-1)... 目的研究鱼腥草总黄酮对单纯疱疹病毒性角膜炎(Herpes simplex keratitis,HSK)小鼠的免疫调节作用,并初步探讨其作用机制。方法采用手术刀片于Balb/c小鼠角膜上皮层划“#”字并接种I型单纯疱疹病毒(I type herpes simplex virus,HSV-1)构建HSK模型。将鉴定成功的HSK小鼠随机分为模型组、鱼腥草总黄酮低(75 mg/kg)、高(300 mg/kg)剂量组和高剂量鱼腥草总黄酮+Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2激动剂Pam3CSK4(0.3 mg/kg)组,另设置对照组,每组12只。造模及给药期间,每日采用裂隙灯显微镜观察小鼠角膜病变情况,并进行评分。给药结束后,HE染色观察小鼠角膜病理变化;ELISA检测小鼠血清中干扰素-γ(Interferon-γ,INF-γ)、白介素-2(Interleukin-2,IL-2)、IL-4和IL-6水平;Western blot检测小鼠角膜组织中TLR2、兔抗髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠出现角膜水肿、溃疡及新生血管,角膜病变损伤严重,存在大量炎性细胞浸润,血清中INF-γ与IL-2水平显著降低,而IL-4和IL-6水平显著升高,角膜组织中TLR2、MyD88蛋白表达水平及p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白比值显著升高(P<0.01)。与模型组比较,鱼腥草总黄酮低、高剂量组小鼠角膜损伤得到改善,角膜病变评分显著降低,血清中INF-γ与IL-2水平显著升高,IL-4和IL-6水平显著降低,角膜组织中TLR2、MyD88蛋白表达水平及p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白比值显著降低(均P<0.01)。然而,TLR2激动剂Pam3CSK4可部分逆转鱼腥草总黄酮对HSK小鼠角膜炎及免疫失衡的改善作用。结论鱼腥草总黄酮可有效改善HSK小鼠角膜损伤,调节免疫反应,抑制炎症水平,其作用机制可能与调控TLR2/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒性角膜炎 I型单纯疱疹病毒 鱼腥草总黄酮 免疫反应 TLR2/NF-κB信号通路
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白细胞介素18、单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因联合修饰骨髓间充质干细胞治疗脑胶质瘤 被引量:4
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作者 李春晖 焦保华 +3 位作者 康春生 史彦芳 郭毅 崔凯 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期325-330,共6页
目的了解骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-tk)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)后在荷瘤大鼠体内的治疗作用。方法提取1周龄大鼠骨髓培养大鼠骨髓间充质干细胞。骨髓间... 目的了解骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-tk)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)后在荷瘤大鼠体内的治疗作用。方法提取1周龄大鼠骨髓培养大鼠骨髓间充质干细胞。骨髓间充质干细胞转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(BMSCs/tk)或白细胞介素18(BMSCs/IL-18)或联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因、白细胞介素18(BMSCs/tk/IL-18),而后进行体内外试验检测其抗肿瘤作用。检测荷瘤鼠脾脏淋巴细胞免疫活性,采用TUNEL方法检测胶质瘤内的凋亡细胞,抗-CD34染色检测微血管密度(MVD),检测淋巴细胞的浸润,记录试验大鼠的生存期。结果骨髓间充质干细胞可稳定转染IL-18及tk基因,BMSCs/tk和BMSCs/IL-18/tk均显示了明显的旁观者效应,荷瘤鼠移植BMSCs/IL-18或BMSCs/IL-18/tk后,血清白细胞介素2和干扰素-γ浓度明显增高,并且接受移植的荷瘤鼠再次受到C6细胞冲击后可诱导快速的抗肿瘤免疫反应。微血管密度检测显示,BMSCs/IL-18(4.50±2.19)、BMSCs/tk/IL-18(3.65±2.13)与对照组(7.15±2.11)、PBS组(7.55±1.64)、BMSCs组(7.80±2.28)、BMSCs/tk组(7.65±1.84)比较有明显低的微血管密度(P<0.05),通过TUNEL检测、浸润淋巴细胞计数、细胞因子浓度及荷瘤鼠生存期比较,BMSCs/IL-18/tk比BMSCs/IL-18或BMSCs/tk显示了更加明显的抗肿瘤作用,BMSCs/IL-18/tk组生存期明显延长。结论联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因和白细胞介素18的骨髓间充质干细胞显示了明显的抗恶性胶质瘤作用,骨髓间充质干细胞可能成为一种理想的治疗颅内胶质瘤的基因治疗载体。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 白细胞介素18 胶质瘤 单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因
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全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠的效果 被引量:3
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作者 蔡宇 廖伟 +4 位作者 周世骥 唐勇 龚建平 刘长安 李生伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第20期2112-2115,共4页
目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用。方法用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检... 目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用。方法用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检测不同剂量ATRA的抗肿瘤效应;再用ATRA联合基因治疗,实验分4组:磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组,各组测量肿瘤体积,计算抑瘤率,Western blot检测输注的目的基因质粒的表达,HE染色行病理学观察,免疫组化法检测连接蛋白Cx32的表达。结果 ATRA在1 mg/kg下无抗肝癌作用,但≥4 mg/kg即具有明显抗肝癌效应;抑瘤率在磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组分别为0、(7.46±7.25)%、(37.65±3.87)%、(59.04±3.08)%,联合治疗组分别与磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HE结果显示:采用ATRA联合基因治疗后,肿瘤坏死细胞明显较对照组多,免疫组化结果显示:ATRA处理过的组织中,Cx32蛋白表达增加,且以胞膜表达为主。结论 ATRA具有抗肝癌作用;ATRA能增强超声微泡包裹的HSV-TK自杀基因杀伤肝癌的效果,其可能机制与ATRA促进了Cx32蛋白的正常表达有关。 展开更多
关键词 肝肿瘤 全反式维甲酸 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 超声微泡 连接蛋白32
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腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤的初步观察 被引量:3
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作者 陈世璋 张燕升 +5 位作者 范忠 李维弟 郭莹 王潇 陈剑飞 李宁 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期610-613,617,共5页
目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(... 目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(HPD)静脉给药,选择相应激光输出功率定时照射,以ADV-TK基因行瘤体及周边注射,经GCV静脉输入治疗后,通过影像学及瘤体血流动力学分析进行临床疗效评估。结果经联合法治疗后,患者肿瘤明显缩小(甚至完全消失),瘤体内血流量降低,影像结果对比改变明显,治疗效果理想。结论将ADV-TK/GCV系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤具有显著的抗肿瘤效应,具备副作用轻微、临床安全性高的特点,为系统性治疗相关肿瘤提供了一种安全可靠的治疗手段。 展开更多
关键词 病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统 光动力 血卟啉衍生物 恶性肿瘤
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:1
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作者 陈伟 喻启桂 +2 位作者 薛采芳 甄荣芬 樊荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期91-93,共3页
用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒I 型胸苷激酶( HSV1 TK) 基因的p UC18/TK 质粒,将切出的TK 基因片段克隆入原核表达载体p WR4501 中,构建成HSV1 TK 基因重组表达质粒... 用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒I 型胸苷激酶( HSV1 TK) 基因的p UC18/TK 质粒,将切出的TK 基因片段克隆入原核表达载体p WR4501 中,构建成HSV1 TK 基因重组表达质粒p WR4501/TK。以HSV1 TK 特异性引物TK1 For 和TK2 Rev 进行PCR 鉴定可扩增出预期的503 bp 的TK 基因编码区部分序列;EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切质粒p WR4501/ TK, 可切出约1150bp 的DNA 片段, 表明重组质粒中已插入HSV1 TK基因片段。用IPTG 诱导p WR4501/TK/JM109 ,表达出相对分子质量( Mr) 约为97 000 的TK 和β半乳糖苷酶( Mr55 000) 融合蛋白。薄层扫描显示,该融合蛋白含量占菌体蛋白总量的27 .47 % 。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 融合表达 大肠杆菌
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因融合表达产物的免疫学特性研究 被引量:2
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作者 陈伟 薛采芳 +1 位作者 甄荣芬 樊荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第4期305-307,共3页
目的研究TK基因在真核细胞中的表达。方法应用已构建和表达的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV 1TK)融合蛋白免疫兔制备抗HSV 1TK血清 ,并以免疫印迹法鉴定其特异性 ,以免疫荧光法检测HSV 1TK基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果免疫印迹... 目的研究TK基因在真核细胞中的表达。方法应用已构建和表达的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV 1TK)融合蛋白免疫兔制备抗HSV 1TK血清 ,并以免疫印迹法鉴定其特异性 ,以免疫荧光法检测HSV 1TK基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果免疫印迹显示 ,自制和国外提供的抗TK兔血清 ,均能特异性地识别Mr 约为97000的TK融合蛋白。免疫荧光染色得到的结果满意 ,而且自制抗血清的效价和染色强度均优于国外提供的免疫血清。结论原核表达的HSV 1TK融合蛋白具有较好的免疫学活性 ;自制抗HSV 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因治疗 基因表达
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全反式维A酸对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦旁观者效应增强作用及其机制 被引量:1
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作者 黄光琦 宋毅 +3 位作者 陆燕蓉 张洁 肖林 杨元 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期432-437,共6页
目的 通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法 应用Polybrene转染、荧光定量RT PC... 目的 通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法 应用Polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察ATRA对宫颈癌细胞ME180 ,ME180 /TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果 ME180 ,ME180 /TK不同比例的混合细胞随ATRA浓度的增加而存活率降低。ME180 +ME180 /TK混合细胞的存活率随ME180 /TK细胞比例的增加而降低。在 2mg·L- 1更昔洛韦 (GCV)作用下 ,以 10 - 8mol·L- 1ATRA与不加ATRA (0mol·L- 1)的作用相比较 ,在ME180与ME180 /TK不同比例混合的各组中 ,细胞的存活率明显降低 (P <0 .0 5 )。并观察到10 - 8及 10 - 10 mol·L- 1ATRA对GCV旁观者效应的增强作用。RT PCR结果表明 ,经ATRA处理的ME180细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 1.84倍及 2 .6 5倍。结论 宫颈癌ME180细胞中 ,ATRA在10 - 8~ 10 - 10 mol·L- 1范围内 ,具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。其主要机制是通过ATRA在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,导致旁观者效应的增强。 展开更多
关键词 维A酸 基因 单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦 旁观者效应 细胞缝隙连接通讯 基因表达 细胞 ME180
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因工程化细胞和更昔洛韦系统的急慢性毒性 被引量:1
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作者 张晓鹏 胡加飞 +7 位作者 蔡如珏 袁国梁 董萍 文淑华 黄承瑶 卢亦成 张光霁 朱诚 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期137-139,共3页
目的:探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因工程化细胞(pLTKcSN/VPC)和更昔洛韦(GCV)系统的动物体内急、慢性毒性。方法:将pLTKcSN/VPC和(或)以β-半乳糖苷酶基因为报告基因的PA317细胞悬液注入小... 目的:探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因工程化细胞(pLTKcSN/VPC)和更昔洛韦(GCV)系统的动物体内急、慢性毒性。方法:将pLTKcSN/VPC和(或)以β-半乳糖苷酶基因为报告基因的PA317细胞悬液注入小鼠、大鼠和灵长类动物体内,7d后部分动物再全身应用GCV。分批处死动物,观察pLTKcSN/VPC和GCV系统在不同种属动物的体内急、慢性毒性。采用PCR和原位杂交方法直接检测胸苷激酶基因在动物脑和全身各脏器内的整合及表达情况。结合原位杂交和X-gal染色结果,判断注射细胞在动物脑内的存活时间。结果:pLTKcSN/VPC和GCV系统对动物的心、肝、肺和肾有一定的急性损害作用。该细胞在大鼠和猴脑内的存活时间为3周。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 基因治疗 单纯疱疹病毒 更昔洛韦
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因部分缺失重组质粒的构建及序列分析
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作者 甄荣芬 喻启桂 +2 位作者 陈伟 樊荣 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期88-90,共3页
目的:构建HSV1 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法:以p UC18/ TK 重组质粒DNA 为模板,用PCR 方法扩增TK5′端503bp 基因片段,并将扩增的片段克隆入载体p UC18 中(p UC1... 目的:构建HSV1 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法:以p UC18/ TK 重组质粒DNA 为模板,用PCR 方法扩增TK5′端503bp 基因片段,并将扩增的片段克隆入载体p UC18 中(p UC18/TK1) ;用Pst I 和Hind Ⅲ双酶切pUC18/ TK, 获得TK3′端383bp 片段, 将此酶切片段克隆入pUC18/ TK1 中, 并进行测序。结果: 构建成重组质粒pUC18/ TK- 。经酶切鉴定获得1 条约900 bp 的基因片段; 序列测定证实, HSV117syn + TK 基因缺失了第493 ~744 位251 对碱基。结论:成功地构建了部分缺失的HSV1/TK- 基因重组质粒,为研制其突变株奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因缺失 序列分析
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因治疗肿瘤机制研究进展 被引量:1
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作者 何祥梁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期373-376,共4页
Herpes simplex virus-I type thymidine kinase gene is a drug sensitivity gene. It is still not very clear about how it kills tumor cells, the article reviewed in short in a few aspects such as molecular structure of TK... Herpes simplex virus-I type thymidine kinase gene is a drug sensitivity gene. It is still not very clear about how it kills tumor cells, the article reviewed in short in a few aspects such as molecular structure of TK gene, TK enzyme,bystander effect,gap junction intercellular communication,cell apoptosis and phagocytosis,inflammation and immunity reaction, and the developing direction of TK gene. 展开更多
关键词 基因治疗 肿瘤 胸苷激酶 单纯疹疹病毒I型
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单纯疱疹病毒胸苷激酶多克隆抗体的制备
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作者 张煜 于湘辉 +2 位作者 查晓 王安荣 孔维 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1089-1091,共3页
目的:克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK的功能奠定基础。方法:从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达... 目的:克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK的功能奠定基础。方法:从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达载体pRSETB中进行表达,以纯化的表达产物免疫家兔制备多克隆抗血清,进行Western blotting鉴定。结果:用IPTG诱导后,表达出相对分子质量(Mr)约43000的融合蛋白,免疫家兔制备的兔血清,第2~5周每周采血1次,Western blotting检测均获得特异性蛋白带;最后一次样品3个稀释度(1∶1000、1∶3000、1∶5000)的Western blotting分析仍可以检出蛋白质带。结论:成功获得了特异性强和滴度高的HSV-TK多克隆抗体。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因表达 多克隆抗体
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在骨肉瘤细胞中的表达和作用
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作者 乔慧 丘钜世 +1 位作者 李扬 张惠忠 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期143-145,共3页
目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)及其底物丙氧鸟苷 (GCV)的基因治疗系统对骨肉瘤细胞株SAOS 2的杀伤作用。方法 :用DOTAP将含有HSV TK基因的真核表达质粒tgCMV HyTK导入骨肉瘤细胞株SAOS 2 ;提取阳性转染细胞 (SAOS 2TK)的... 目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)及其底物丙氧鸟苷 (GCV)的基因治疗系统对骨肉瘤细胞株SAOS 2的杀伤作用。方法 :用DOTAP将含有HSV TK基因的真核表达质粒tgCMV HyTK导入骨肉瘤细胞株SAOS 2 ;提取阳性转染细胞 (SAOS 2TK)的总RNA ,用斑点杂交的方法检测HSV TK基因的表达 ;用MTT比色法测定SAOS 2TK细胞对GCV的敏感性及“旁观者效应”。结果 :SAOS 2TK细胞能产生稳定的TK基因的转录产物 ;SAOS 2TK细胞在GCV的作用下呈现明显的生长抑制效应 ,且观察到强效的“旁观者效应”。结论 :HSV 展开更多
关键词 骨肿瘤 骨肉瘤 基因治疗 单纯疱疹病毒胸苷激酶
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应研究
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作者 郭中敏 林以理 +1 位作者 陈建波 陈系古 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第2期65-68,F003,共5页
目的 研究单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV1 TK)基因转染并联合抗病毒药更昔洛韦 (Ganciclovir ,GCV)对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应。方法 采用基因工程技术构建带HSV1-TK基因的逆转录病毒重组体pLX SN TK ,采用脂质体介导入PA317包装细... 目的 研究单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV1 TK)基因转染并联合抗病毒药更昔洛韦 (Ganciclovir ,GCV)对人胶质母细胞瘤细胞的杀伤效应。方法 采用基因工程技术构建带HSV1-TK基因的逆转录病毒重组体pLX SN TK ,采用脂质体介导入PA317包装细胞 ,建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株PA317 TK ;用该细胞上清液转导人胶质母细胞瘤细胞 ,用不同浓度GCV作用人胶质母细胞瘤细胞SW0 38 C2 TK和野生型SW0 38 C2 ,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测 72h后细胞存活率 ,并求出半杀伤浓度。结果 重组逆转录病毒载体pLXSN TK能有效地将TK基因导入SW0 38-C2细胞内 ,并使其获得对GCV的敏感性 ;体外细胞毒实验 :在 2 0 μmol LGCV存在的情况下 ,野生型细胞无明显改变 ,而实验组细胞明显死亡 ,半杀伤浓度IC50 为 0 8μmol L ,与SW0 38 C2相比 ,对GCV的敏感性提高了 6 0 0倍 ,旁杀效果也较明显。结论 SW0 38 C2转染TK基因后 ,能有效地被GCV杀灭。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 单纯疱疹病毒 基因 细胞 转染 基因治疗 肿瘤
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抗单纯疱疹病毒1型的IgY制备及其生物学活性检测
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作者 苏海涛 翟玥 +1 位作者 宋秀玲 徐坤 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期303-309,共7页
目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-... 目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和蛋白浓度定量试剂盒测定IgY效价、纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测IgY中和病毒的能力,测定病毒阻断率,以Vero细胞为病毒感染靶细胞,测定不同抗体浓度(0.01560、0.03125、0.06250、0.12500、0.50000、和1.00000 g·L^(-1))作用后细胞病变效应(CPE),根据CPE程度测定IgY体外抗HSV-1能力。结果:制备的IgY效价随免疫时间逐渐升高,达到1/1024000后保持稳定;IgY轻链重链条带清晰;IgY平均蛋白水平为11.544 g·L^(-1);IgY对HSV-1的阻断率可高达77.90%;HSV-1致CPE程度随抗体浓度升高而逐渐降低,当IgY浓度达到0.50000g·L^(-1)及以上时,25%以下细胞(甚至无细胞)发生病变。结论:成功制备出抗HSV-1的IgY,该抗体对HSV-1具有明显的中和阻断能力和体外抑制活性,可用于药物及诊断方法的开发。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型 卵黄抗体 中和病毒 体外抗病毒能力
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因真核表达载体的构建及其在食管癌细胞中的表达 被引量:3
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作者 李杰 郭玉忠 +1 位作者 谢华 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第1期47-50,共4页
目的 :构建含单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV -tk)基因的真核表达载体 (pcDNA3-tk) ,并观察能否在食管癌细胞株中表达。方法 :将HSV -tk的cDNA亚克隆于真核表达载体pcDNA3上 ,构建pcDNA3-tk。后者经脂质体介导转染食管癌细胞株Eca - 1 0 9,... 目的 :构建含单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV -tk)基因的真核表达载体 (pcDNA3-tk) ,并观察能否在食管癌细胞株中表达。方法 :将HSV -tk的cDNA亚克隆于真核表达载体pcDNA3上 ,构建pcDNA3-tk。后者经脂质体介导转染食管癌细胞株Eca - 1 0 9,通过高剂量的G4 1 8选择培养 ,筛选出抗性克隆。经RT -PCR检测确定HSV -tk基因是否能在转染细胞内转录。结果 :成功地构建了真核表达载体pcDNA3-tk ,并且在pcDNA3-tk转染的食管癌细胞内发现tk基因的mRNA。结论 :含HSV 展开更多
关键词 食管肿瘤 基因治疗 TK基因 单纯疱疹病毒胸苷激酶 真核表达载体
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外泌体与疱疹病毒感染介导疼痛发生的研究进展
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作者 李陈广 高翔宇 +3 位作者 白雨婷 许晨亮 樊碧发 肖礼祖 《中国疼痛医学杂志》 北大核心 2025年第2期85-92,共8页
外泌体是一类由多种细胞分泌的磷脂双分子层包裹的囊状结构,内含多种蛋白质、脂类和核酸等。外泌体不仅参与正常的免疫调节和细胞间的信息传递,还参与各种疾病的发生和发展。单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒属于人类α疱疹病毒,感染后... 外泌体是一类由多种细胞分泌的磷脂双分子层包裹的囊状结构,内含多种蛋白质、脂类和核酸等。外泌体不仅参与正常的免疫调节和细胞间的信息传递,还参与各种疾病的发生和发展。单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒属于人类α疱疹病毒,感染后可引发皮肤病变和神经病理性疼痛等症状。本文将重点综述外泌体在疱疹病毒感染过程及其相关疾病中的作用,特别是在病毒感染和带状疱疹后神经痛方面的机制研究。疱疹病毒感染中的外泌体有望成为疱疹性相关疾病预防、诊断和治疗的新策略。 展开更多
关键词 外泌体 疱疹病毒 单纯疱疹病毒 水痘-带状疱疹病毒 疼痛
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单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用的研究 被引量:2
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作者 薛文群 詹惠英 +5 位作者 陈道桢 赵琪 朱云霞 杨幼易 鲁晓萱 樊启英 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期4-7,共4页
目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。 方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela... 目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。 方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela/TK细胞 ,并将其用于体外实验。 结果 :载体HSV TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示 ,当Hela/TK细胞数占混合细胞 10 %时 ,低浓度 (10mg/L)的GCV就可将 5 0 %左右的肿瘤细胞杀死。GCV作用后的实验组Hela /TK细胞基因组经琼脂糖凝胶电泳后可观察到典型的DNA梯状条带。 结论 :逆转录病毒可介导HSV TK基因转入人宫颈癌Hela细胞并获稳定表达 ,HSV TK/GCV自杀基因系统在体外对宫颈癌细胞有杀伤作用 ,且存在明显的旁观效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 旁观效应 逆转录病毒载体 人宫颈癌 自杀基因治疗
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因表达对人肝癌细胞的生长抑制
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作者 李旭 陈葳 +1 位作者 杨兆瑞 施新猷 《西安医科大学学报》 CSCD 1996年第3期279-281,共3页
使用转导有单纯疱疹Ⅰ型病毒胸苷激酶(HSV1-TK)基因的人肝癌SMMC-7721细胞株建立了裸鼠移植瘤模型,并进行了在体和体外试验性无环鸟苷(ACV)治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ACV的敏感性,肝癌细... 使用转导有单纯疱疹Ⅰ型病毒胸苷激酶(HSV1-TK)基因的人肝癌SMMC-7721细胞株建立了裸鼠移植瘤模型,并进行了在体和体外试验性无环鸟苷(ACV)治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ACV的敏感性,肝癌细胞生长抑制与ACV的剂量有关;用药组裸鼠除平均瘤重明显低于对照组外,还可见细胞核分裂指数降低,伴有细胞变性和坏死。结果表明:HSV1-TK基因经逆转录病毒转导后,用ACV诱导表达明显抑制了人肝癌细胞的生长。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因表达 肝肿瘤
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I型单纯疱疹病毒感染对人角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2和黏着斑激酶表达的影响 被引量:3
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作者 曹婷 邢怡桥 +1 位作者 杨燕宁 梅海峰 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1050-1054,共5页
背景研究表明,I型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染可导致角膜上皮细胞(CECs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶(FAK)对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道... 背景研究表明,I型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染可导致角膜上皮细胞(CECs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达、分泌和活性改变。黏着斑激酶(FAK)对MMPs的表达、释放和激活起着重要的调节作用。人角膜上皮感染HSV-1后FAK的表达变化鲜有报道。目的探讨HSV-1感染对体外培养的人CECsMMP-2和FAK表达的影响。方法以HSV-1(F株)感染体外培养的人CECs,应用逆转录PCR(RT—PCR)、免疫印迹法、免疫组织化学法分别于感染后2、20、40h检测人CECsMMP-2、FAK及磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)的表达情况。结果RT.PCR法检测结果显示,感染细胞的MMP-2mRNA、FAKmRNA较非感染细胞(即加入无病毒无血清培养液的阴性对照组)的表达明显增强,不同时间点间比较差异无统计学意义,组别与时间点间不存在交互作用(MMP-2mRNA:F目目=0.968,P=0.436;F蚴I=47.649,P=0.000;F女Ⅱ#目=0.757,P=0.536.FAKmRNA:F时间=0.658,P=0.631;F组别=35.182,P=0.000;F交互作用=1.386,P=0.137)。Westernblot法检测结果显示,感染后2h时p-FAK、FAK、MMP-2在感染细胞与非感染细胞间差异均无统计学意义(P’0.05),感染后20h、40h感染细胞的蛋白表达较非感染细胞均明显增强(P〈0.05)。免疫组织化学染色检测结果显示,随着感染时间的延长,MMP-2、FAK、p-FAK蛋白染色阳性细胞数目增多。结论在HSV-1感染早期,FAK的激活可刺激MMPs活性增强,从而加速角膜溃疡及坏死性病变的形成。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-2 黏着斑激酶 I型单纯疱疹病毒 角膜炎
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单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)治疗大鼠9L胶质肉瘤的疗效
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作者 洪波 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第2期134-134,共1页
<正>为了评价HSV-tk基因转染加GCV治疗方案的效果,本研究采用Fischer 344大鼠9L胶质肉瘤模型,所使用的物品和实验的条件尽量同NIH研究组相同,包装细胞为G1TkSvNa 53,立体定向脑内接种4×10~4肿瘤细胞,第5天同样接种包装细胞1.... <正>为了评价HSV-tk基因转染加GCV治疗方案的效果,本研究采用Fischer 344大鼠9L胶质肉瘤模型,所使用的物品和实验的条件尽量同NIH研究组相同,包装细胞为G1TkSvNa 53,立体定向脑内接种4×10~4肿瘤细胞,第5天同样接种包装细胞1.5~6×10,第10~24天,腹腔注射GCV,15mg/kg。另外本研究还观察了体外转染tk基因后用GCV治疗的效果。结果:HSV-tk+GCV组的生存期是23.90±0.90天,HSV-tk+生理盐水组是24.0±0.4天,βgal+GCV组是24.7±1.8天,各组之间的存活期无显著差异,增加包装细胞的浓度也不能延长存活期。而体外转染tk基因(肿瘤细胞100%转染)接种于脑内后用GCV治疗可以治愈约1/4的大鼠,而同样皮下接种脑瘤模型却有约2/3的大鼠得到治愈。本研究还对“旁观者效应”(bystander effect)和GCV治疗浓度的问题进行了研究和探讨。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶基因 HSV-TK 治疗 大鼠 9L胶质肉瘤
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