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人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
1
作者
张萌
张恺宁
+5 位作者
陈子怡
王玲
伍丽萍
王悦
刘冰
施秉银
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期409-414,共6页
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒...
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。
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关键词
人促甲状腺激素受体
A亚单位
昆虫细胞体系
分泌型表达
SF9细胞
GRAVES病
在线阅读
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职称材料
人促甲状腺激素受体基因真核表达质粒的构建
2
作者
康莉
黑砚
肖利华
《眼科研究》
CSCD
北大核心
2009年第6期523-524,共2页
关键词
人促甲状腺激素受体
真核表达质粒
受体
基因
自身免疫性
甲状腺
疾病
特异性自身免疫性疾病
receptor
甲状腺
相关眼病
动物模型
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职称材料
pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
被引量：
6
3
作者
詹升华
张徽
刘纯
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期390-393,共4页
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真...
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。
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关键词
人促甲状腺激素受体
PCDNA3.1
COS-7细胞
转染
动物模型
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职称材料
题名
人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
1
作者
张萌
张恺宁
陈子怡
王玲
伍丽萍
王悦
刘冰
施秉银
机构
西安交通大学第一附属医院内分泌科
西安交通大学第一附属医院生物样本信息资源中心
出处
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期409-414,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.82201238,No.81970679,No.82170805)。
文摘
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。
关键词
人促甲状腺激素受体
A亚单位
昆虫细胞体系
分泌型表达
SF9细胞
GRAVES病
Keywords
human thyroid stimulating hormone receptor A subunit
insect cell system
secretory expression
sf9 cell
Graves’disease
分类号
Q962 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
人促甲状腺激素受体基因真核表达质粒的构建
2
作者
康莉
黑砚
肖利华
机构
武警总医院眼眶病研究所
出处
《眼科研究》
CSCD
北大核心
2009年第6期523-524,共2页
关键词
人促甲状腺激素受体
真核表达质粒
受体
基因
自身免疫性
甲状腺
疾病
特异性自身免疫性疾病
receptor
甲状腺
相关眼病
动物模型
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
R771.3 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
被引量：
6
3
作者
詹升华
张徽
刘纯
机构
重庆医科大学病理学教研室
重庆医科大学第一医院内分泌科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期390-393,共4页
基金
重庆市卫生局重点课题基金资助 (No .0 1 1 1 0 4 )
文摘
目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。
关键词
人促甲状腺激素受体
PCDNA3.1
COS-7细胞
转染
动物模型
Keywords
thyrotropin receptor
pcDNA3.1
COS-7 cell
transfection
animal model
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
R347.514 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
张萌
张恺宁
陈子怡
王玲
伍丽萍
王悦
刘冰
施秉银
《西安交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人促甲状腺激素受体基因真核表达质粒的构建
康莉
黑砚
肖利华
《眼科研究》
CSCD
北大核心
2009
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
詹升华
张徽
刘纯
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
6
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职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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