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人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体的构建及转染研究 被引量:4
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作者 张晶晶 刘凤军 +2 位作者 彭淑英 宋红卫 张涌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第1期29-32,共4页
构建了携带人乳铁蛋白(LTF)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的乳腺特异性表达载体(pEBL),用脂质体法转染泌乳期莎能奶山羊乳腺上皮细胞,转染后于荧光显微镜下观察GFP表达情况。用G 418对转染细胞进行筛选,获得抗性细胞克隆,并对转染细胞进... 构建了携带人乳铁蛋白(LTF)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的乳腺特异性表达载体(pEBL),用脂质体法转染泌乳期莎能奶山羊乳腺上皮细胞,转染后于荧光显微镜下观察GFP表达情况。用G 418对转染细胞进行筛选,获得抗性细胞克隆,并对转染细胞进行PCR检测。结果显示,pEBL构建成功,转染6 h后可观察到细胞有GFP表达,PCR检测阳性克隆细胞转有LTF基因。表明pEBL载体已转染山羊乳腺上皮细胞,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊乳腺上皮细胞 人乳蛋白 绿色荧光蛋白 异性载体
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骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及其在特异性骨转移乳腺癌细胞中的稳定表达 被引量:3
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作者 杜红延 王捷 +3 位作者 郭勇 郑霖 杨静 刘大志 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期410-412,共3页
目的构建骨唾液蛋白(BSP)非融合荧光表达载体,建立稳定高效表达BSP和荧光蛋白的乳腺癌细胞系,为进一步研究BSP在乳腺癌细胞骨转移中的作用奠定基础。方法从构建好的pB hBSP载体中用PCR方法扩增hBSP基因,通过BglⅡ和PstⅠ两个限制性酶切... 目的构建骨唾液蛋白(BSP)非融合荧光表达载体,建立稳定高效表达BSP和荧光蛋白的乳腺癌细胞系,为进一步研究BSP在乳腺癌细胞骨转移中的作用奠定基础。方法从构建好的pB hBSP载体中用PCR方法扩增hBSP基因,通过BglⅡ和PstⅠ两个限制性酶切位点定向克隆至真核表达载体pIRES2EGFP,构建重组载体pIRES2hBSP EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性骨转移的乳腺癌细胞株MDA MB231BO中,并利用G418和流式细胞仪筛选阳性克隆。结果成功构建hB SP和EGFP非融合表达的真核表达载体pIRES2hBSP EGFP,并成功转染特异骨转移的乳腺癌细胞株,获得hBSP的稳定转染细胞株,荧光显微镜下可观察到荧光蛋白标记。结论真核表达载体pIRES2hBSP EGFP的构建及hBSP稳定转染细胞株的获得为研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定了的基础。 展开更多
关键词 骨唾液蛋白 荧光蛋白 乳腺癌细胞 基因转染 稳定表达 非融合荧光蛋白载体 异性骨转移
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乳蛋白基因在转基因动物乳腺细胞中特异性表达的研究进展 被引量:4
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作者 田锦 王淑彩 +1 位作者 李志敏 傅衍 《黄牛杂志》 2002年第1期31-34,42,共5页
乳蛋白是乳的主要营养成分 ,乳蛋白的种类及其在乳中的浓度都影响乳的品质 ,而乳中各乳蛋白的含量都受到相应乳蛋白基因的控制。通过转基因技术 ,可以在转基因动物乳腺细胞中特异性地表达目的蛋白 ,从而改善乳的品质以及生产具有特殊药... 乳蛋白是乳的主要营养成分 ,乳蛋白的种类及其在乳中的浓度都影响乳的品质 ,而乳中各乳蛋白的含量都受到相应乳蛋白基因的控制。通过转基因技术 ,可以在转基因动物乳腺细胞中特异性地表达目的蛋白 ,从而改善乳的品质以及生产具有特殊药用价值的乳产品。本文主要概述乳蛋白多态性及其作用 ,乳蛋白基因及多态性 ,并着重介绍乳蛋白基因在转基因动物体内的表达调控 ;通过介绍大量转基因试验的研究成果 ,以探寻改变乳成分的分子遗传基础。 展开更多
关键词 蛋白基因 基因动物 乳腺细胞 异性表达 蛋白 药用蛋白
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猪PBD-1基因乳腺特异性表达载体的构建 被引量:1
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作者 黎丽荣 黄海军 +7 位作者 高其双 董斌科 邓兵 刘艳 陶弼菲 向敏 吴建英 蒋思文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期127-129,134,共4页
为构建猪PBD-1基因乳腺特异性表达载体,采用PCR方法从质粒pcDNA3.1-BLG-HNP-1中扩增出山羊乳球蛋白(BLG)基因,插入到真核表达载体pIRES2-EGFP-PBD-1构建成乳腺特异性表达载体pIRES2-EGFP-BLG-PBD-1。经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和... 为构建猪PBD-1基因乳腺特异性表达载体,采用PCR方法从质粒pcDNA3.1-BLG-HNP-1中扩增出山羊乳球蛋白(BLG)基因,插入到真核表达载体pIRES2-EGFP-PBD-1构建成乳腺特异性表达载体pIRES2-EGFP-BLG-PBD-1。经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定、比较,鉴定。结果成功构建了乳腺特异性表达载体pIRES2-EGFP-BLG-PBD-1。乳腺特异性表达载体pIRES2-EGFP-BLG-PBD-1的成功构建,为进一步研究PBD-1蛋白的抗菌活性、抗菌机理及将进一步该载体应用于动物乳腺生物反应器的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪β防御素1 山羊蛋白 乳腺异性表达载体 抗菌机理
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乳铁蛋白肽基因的合成及其在动物乳腺中的表达 被引量:12
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作者 张锦霞 王铁东 +2 位作者 张守峰 郭学军 扈荣良 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2006年第2期229-233,共5页
根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽(LfcinB)25个氨基酸的mRNA序列,设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物,用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因(包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子),并将此基因克... 根据已发表的编码牛乳铁蛋白肽(LfcinB)25个氨基酸的mRNA序列,设计了4条用于合成牛乳铁蛋白肽全基因的引物,用重叠延伸PCR法合成149bp的牛乳铁蛋白肽基因(包括牛乳铁蛋白信号肽序列、上下游酶切位点和终止密码子),并将此基因克隆到载体pI-B,获得了乳腺特异性表达质粒pI-BL,该质粒经生理盐水稀释后直接注入稳定泌乳期奶山羊和奶牛乳腺组织(注射量为400μg),以琼脂板溶圈法检测奶样抑菌活性。结果显示,注射后3~48h,奶样有明显抑菌活性,其中3~9h抑菌活性最高。 展开更多
关键词 蛋白 蛋白 基因合成 乳腺异性表达
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转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞的研究 被引量:7
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作者 郑月茂 刘凤军 +1 位作者 何小宁 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1282-1286,共5页
利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因的重组质粒,并导入到山羊乳腺上皮细胞,经G418及PCR筛选获得阳性细胞;转染细胞增殖后经激素诱导,培养液上清通过Western blot检测证明,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白,其分子质量为58 ku。
关键词 人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体 绿色荧光蛋白 基因山羊乳腺上皮细胞
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一种乳腺特异性表达载体的构建
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作者 刘建忠 周丽芳 +1 位作者 朱艳君 马季骅 《化学与生物工程》 CAS 2005年第12期11-13,共3页
以兔乳清酸性蛋白基因启动子(rWAP,6.3 kb)、兔乳清酸性蛋白基因终止子(200 bp)和人瘦蛋白基因(cDNA,1.0 kb)经过一系列的亚克隆操作,构建了一种通用性的乳腺特异性表达载体,从而为通过转基因小鼠动物模型表达外源基因提供了极大的方便。
关键词 清酸性蛋白基因启动予 清酸性蛋白基因终止子 乳腺异性表达栽体
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β乳球蛋白基因(βlg)的表达调控及其应用 被引量:2
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作者 刘建喜 林爱星 +1 位作者 周云 陈永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第3期23-27,共5页
β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异... β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异位表达、差异表达、表达水平低和表达受位置效应影响等问题。构建表达载体时充分考虑 βlg启动子和远端调控元件 ,有可能使外源基因获得稳定、高效、特异的表达。 展开更多
关键词 β蛋白基因 表达调控 乳腺组织 异性表达 表达载体
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