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原位杂交检测人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA在高危型人乳头瘤病毒分型检测阴性子宫颈高级别鳞状上皮内病变中的表达研究
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作者 刘玉珍 冯慧敏 张友忠 《实用妇产科杂志》 北大核心 2025年第5期393-399,共7页
目的:通过原位杂交检测技术探索高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)分型检测阴性的子宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)是否由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起,进而为子宫颈HSIL的精确诊断及治疗提供新思路。方法:收集2020年1月至2022年10月就诊于山... 目的:通过原位杂交检测技术探索高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)分型检测阴性的子宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)是否由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起,进而为子宫颈HSIL的精确诊断及治疗提供新思路。方法:收集2020年1月至2022年10月就诊于山东第二医科大学附属医院妇科行子宫颈活检或手术治疗的305例子宫颈HSIL患者的病历资料,其中HR-HPV分型检测阴性患者为研究组(15例),阳性患者为对照组(290例)。采用RNAscope原位杂交技术检测两组患者样本中HPV E6/E7 m RNA的表达,并使用染色强度半定量评分分析HPV E6/E7 m RNA的表达情况,同时采用免疫组织化学(IHC)方法检测p16、Ki-67的表达情况。结果:(1)305例HSIL患者中,15例(4.9%)HR-HPV分型检测为阴性。(2)研究组中73.3%(11/15)HPV E6/E7 m RNA呈阳性表达,与对照组100.0%(290/290)比较,差异有统计学意义(P<0.001)。(3)研究组p16的阳性表达率与对照组比较,差异有统计学意义(93.3%vs.100.0%,P=0.049),两组Ki-67阳性表达率均为100.0%。(4)组织病理学类型为子宫颈上皮内瘤变(CIN)2的样本中,研究组HPV E6/E7 m RNA总体评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P=0.004);CIN3的样本中,研究组HPV E6/E7 m RNA总体评分虽低于对照组,但差异无统计学意义(P=0.158)。结论:子宫颈癌筛查中,单纯采用HR-HPV分型检测可能导致4.9%的HSIL患者因结果阴性而出现漏诊或误诊。HPV E6/E7 m RNA原位杂交检测技术可能有助于降低HR-HPV分型检测在HSIL中的假阴性率,并辅助预测子宫颈病变的发展方向,进而为实现个体化精准治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 子宫颈 高级别鳞上皮内病变 人乳头病毒 人乳头病毒e6/e7 mRNA 原位杂交
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口腔鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒16型转化基因E_7的检测 被引量:2
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作者 王建广 黄洪章 李金荣 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 2000年第S1期105-108,共4页
【目的】准确检测口腔鳞状细胞癌及正常口腔粘膜中人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)的感染状况 ,探讨人乳头瘤病毒 16型与人口腔鳞状细胞癌之间的关系。【方法】从 30例未经治疗的口腔鳞状细胞癌患者肿瘤组织及 30例健康志愿者正常口腔粘膜切... 【目的】准确检测口腔鳞状细胞癌及正常口腔粘膜中人乳头瘤病毒 16型 (HPV16)的感染状况 ,探讨人乳头瘤病毒 16型与人口腔鳞状细胞癌之间的关系。【方法】从 30例未经治疗的口腔鳞状细胞癌患者肿瘤组织及 30例健康志愿者正常口腔粘膜切取标本 ,液氮冷冻保存 ;常规提取组织DNA ,设计HPV16E7转化基因特异性引物 ,进行聚合酶链反应 ,对PCR结果进行检测 ,记录结果。【结果】 30例口腔鳞状细胞癌患者中检测到 11例HPV16阳性 ,感染率 36 7% ;30例正常对照组中检测到 4例HPV16阳性 ,感染率 11 1%。经 χ2 检验 ,两者差别有显著性。【结论】人乳头瘤病毒 16型与人口腔鳞状细胞癌有一定关系 ,但HPV16在人口腔鳞状细胞癌发生发展过程中所起的作用还有待进一步研究。 展开更多
关键词 乳头病毒 口腔肿 癌基因e7
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人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的检测在宫颈癌筛查中的初步评价 被引量:10
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作者 姜俊 陈宜刚 +2 位作者 王华 叶军 冯蕾 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1261-1264,共4页
目的:评价支链DNA技术(bDNA)对HPV-E6/E7 mRNA的检测及其临床价值。方法:对167例宫颈癌筛查妇女宫颈脱落细胞用液基细胞薄层涂片技术行宫颈细胞学检查,同时采用bDNA技术检测HPV-E6/E7 mRNA。另从中随机选择43例患者[11例非典型磷状上皮... 目的:评价支链DNA技术(bDNA)对HPV-E6/E7 mRNA的检测及其临床价值。方法:对167例宫颈癌筛查妇女宫颈脱落细胞用液基细胞薄层涂片技术行宫颈细胞学检查,同时采用bDNA技术检测HPV-E6/E7 mRNA。另从中随机选择43例患者[11例非典型磷状上皮细胞(ASCUS)、17例低度磷状上皮内病变(LSIL)、15例高度磷状上皮内病变(HSIL)]检测HPV-E6/E7DNA。结果:①HPV-E6/E7 mRNA与HPV-E6/E7 DNA相关性分析显示:HPV-E6/E7 mRNA与HPV-E6/E7 DNA检测结果呈现显著正相关(r=0.465,P=0.002);②总体人群HPV-E6/E7 mRNA检出阳性率为43.1%,随着病理级别的升高,HPV-E6/E7mRNA阳性率(χ2=41.396,P<0.001)和copies量(H=39.350,P<0.001)均呈现趋势性升高;③HPV-E6/E7 mRNA对LSIL+诊断的灵敏度为67.1%(95%CI:56.1%-78.1%)、特异性为74.2%(95%CI:65.5%-82.9%)、准确性为71.3%(95%CI:64.4%-78.1%)、阳性预测值为65.3%(95%CI:54.3%-76.3%)、阴性预测值为75.8%(95%CI:67.2%-84.4%)。结论:HPV-E6/E7 mRNA与宫颈细胞学类型相关,其对LSIL+的诊断具有较高的效率,可能更为适用于宫颈癌的发病风险评估。 展开更多
关键词 人乳头病毒 非典型鳞上皮细胞 低度鳞上皮内病变 高度鳞上皮内病变 e6 e7信使RNA e6 e7 DNA bDNA技术
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中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16E6E7基因的分离、克隆和序列分析 被引量:8
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作者 许雪梅 司静懿 +5 位作者 刘世德 徐建青 刘朝奇 李昆 陈浩 宋国兴 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期185-191,共7页
目的分析中国山东地区宫颈癌患者HPV16型E6E7基因结构特点。方法从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取DNA,经HPV多重引物PCR法鉴定标本中感染HPV型别,选感染HPV16型的标本DNA为模板进行PCR扩增,获得... 目的分析中国山东地区宫颈癌患者HPV16型E6E7基因结构特点。方法从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取DNA,经HPV多重引物PCR法鉴定标本中感染HPV型别,选感染HPV16型的标本DNA为模板进行PCR扩增,获得HPV16E6E7基因,将其重组入pALTER-1载体,进行双向测序、分析。结果构建了含中国山东地区宫颈癌患者组织中HPV16E6E7的重组质粒,命名为HPV16E6E7-SD。DNA序列分析表明,该序列全长776bp,与已发表的德国标准株长度相等,但其核苷酸顺序的第557位核苷酸“T”变为“C”,即E6的终止密码子TAA变为谷氨酰胺密码子CAA。结论中国山东地区宫颈癌患者组织中HPV16E6E7的基因结构与德国标准株HPV16E6E7基因之间存在差异。 展开更多
关键词 人乳头病毒 e6e7基因 宫颈癌 序列分析
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液基薄层细胞学检查联合人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测在宫颈病变筛查中的价值分析 被引量:26
5
作者 王俊飞 沈树娜 祝平 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第4期578-581,共4页
目的探讨薄层液基细胞学检查(thinprep cytology test,TCT)联合人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) E6/E7mRNA检测在宫颈疾病筛查中的应用效果。方法选取538例患者作为研究对象,所有患者均行TCT、HPV E6/E7检测和阴道镜下宫颈多点... 目的探讨薄层液基细胞学检查(thinprep cytology test,TCT)联合人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) E6/E7mRNA检测在宫颈疾病筛查中的应用效果。方法选取538例患者作为研究对象,所有患者均行TCT、HPV E6/E7检测和阴道镜下宫颈多点活检,比较单独使用TCT或HPV E6/E7 mRNA以及联合TCT和HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变筛查中的诊断价值。结果以病理学检查作为检测金标准,TCT和HPV E6/E7这两种检测方法对于宫颈病变均具有一定的筛检率,TCT检测的灵敏度66.56%,特异度为53.57%,HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏度74.84%,特异度为77.68%,TCT联合HPV E6/E7mRNA检测的灵敏度和特异度分别为99.68%和39.29%。结论 TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变筛查中可大幅度提高灵敏度,降低临床漏诊率,具有临床筛查价值。 展开更多
关键词 薄层液基细胞学检查 人乳头病毒e6/e7 mRNA 宫颈疾病
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人乳头瘤病毒16型E6E7基因协同共激活分子B7-1基因免疫诱导的特异性免疫反应 被引量:4
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作者 许雪梅 朱明昭 +3 位作者 张明策 司静懿 李昆 宋国兴 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期301-306,共6页
目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗。方法将用PC... 目的利用突变修饰后的中国山东地方株人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)E6E7融合基因(fmE6E7),研究治疗HPV16感染相关疾病的DNA疫苗,并进一步探索利用共激活分子B7-1基因,研究更加活化细胞免疫的加强疫苗。方法将用PCR法扩增获得fmE6E7基因插入真核表达质粒pVR1012中获得pVR1012-fmE6E7,瞬时转染Cos-7细胞,免疫荧光组织化学法检测证实其表达后,在C57BL/6小鼠肌肉内进行pVR1012-fmE6E7单独免疫,或与小鼠共激活分子B7-1基因真核表达质粒(pcDNA3.1-B7-1)联合免疫。51Cr释放法分析免疫小鼠的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)活性,间接ELISA法检测小鼠血清中E7特异性抗体。用5×105个C3细胞皮下接种C57BL/6小鼠,分析小鼠体内诱发的特异性抗瘤免疫水平。结果修饰后的E6E7基因免疫可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应,小鼠B7-1基因与fmE6E7联合免疫可显著提高特异性CTL活性,并可保护33%(2/6)的小鼠免受C3肿瘤细胞的攻击,而单独fmE6E7基因免疫则不能抑制C3瘤细胞的生长,联合B7-1基因免疫对诱发的抗体水平无加强作用。结论中国山东地方株E6E7融合基因可用于DNA疫苗的构建,B7-1基因协同免疫可提高疫苗的细胞免疫水平,利用B7-1基因作为HPV16DNA疫苗的协同因子具有重要价值。 展开更多
关键词 人乳头病毒 e6基因 e7基因 DNA疫苗 细胞毒性T淋巴细胞
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E6/E7 mRNA检测筛查妊娠期高危型人乳头瘤病毒感染的价值研究 被引量:3
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作者 杨咏梅 王凤英 +3 位作者 廖秦平 肖群 康宁 吴洁 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2022年第3期280-284,共5页
背景妊娠期高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染及宫颈病变需要更为有效的诊断与分流管理措施,从而指导个性化诊疗,减少妊娠期非必要有创检查。目的将妊娠期HR-HPV感染E6/E7 mRNA检测与HR-HPV DNA检测进行比较,评估E6/E7 mRNA检测应用于妊娠... 背景妊娠期高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染及宫颈病变需要更为有效的诊断与分流管理措施,从而指导个性化诊疗,减少妊娠期非必要有创检查。目的将妊娠期HR-HPV感染E6/E7 mRNA检测与HR-HPV DNA检测进行比较,评估E6/E7 mRNA检测应用于妊娠期HR-HPV感染及宫颈病变的诊断价值。方法选取2016年1月至2019年1月在首都医科大学宣武医院妇产科建档定期产检的符合纳入标准的20~45岁育龄妊娠期女性为研究对象,分别进行薄层液基细胞学检测(TCT)及HR-HPV DNA检测,结果异常者进一步行阴道镜检查并取活组织送病理检查(以病理检查结果为金标准),同时留取宫颈脱落细胞检测HR-HPV E6/E7 mRNA片段。病理检查结果为宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ级、CINⅢ级定义为宫颈高级别病变。结果本研究共调查20~45岁健康单胎妊娠女性1058名,其中TCT结果异常和/或HPV 16、18亚型者118名,同意行阴道镜检测并成功获得病理检查结果者84名。在病理检查结果为CINⅠ及正常或炎症的女性中,HR-HPV E6/E7 mRNA检测阳性率均低于HR-HPV DNA检测(P<0.05);在病理检查结果为CINⅡ级及CINⅢ级的女性中,HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA检测阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HR-HPV DNA预测宫颈高级别病变的灵敏度为89.7%(26/29),特异度为21.8%(12/55),阳性预测值为37.1%(26/69),阴性预测值为75.0%(12/15);HR-HPV E6/E7 mRNA预测宫颈高级别病变的灵敏度为65.5%(19/29),特异度为54.5%(25/55),阳性预测值为43.0%(19/44),阴性预测值为75.0%(25/40)。McNemar配对χ^(2)检验结果显示:HR-HPV E6/E7 mRNA预测宫颈高级别病变的灵敏度低于HR-HPV DNA,特异度高于HR-HPV DNA(P<0.05)。结论HR-HPV E6/E7 mRNA检测可以在一定程度上提高CINⅡ级及以上宫颈高级别病变的诊断特异度,因而可以考虑将HR-HPV E6/E7 mRNA检测应用于HR-HPV阳性病例的筛查分流管理,避免妊娠期非必要有创检查。 展开更多
关键词 乳头病毒 人乳头病毒DNA检测 e6/e7 mRNA检测 妊娠期 诊断 鉴别
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人乳头瘤病毒16型E6和E7癌蛋白在肺癌中的表达检测 被引量:2
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作者 许春雷 赵光明 +2 位作者 千新来 陆元志 赵清正 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第4期364-366,共3页
关键词 人乳头病毒 16e6 16e7 癌蛋白 肺癌 基因表达 HPV
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人乳头瘤病毒致癌特性及其E6和E7蛋白致癌机制的研究进展 被引量:7
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作者 薛亚娟 符兆英 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1096-1099,共4页
人乳头瘤病毒(HPV)是一种感染人的乳头瘤病毒科病毒,主要感染上皮细胞,其高危型别(主要是16和18型)可引起恶性肿瘤。高危型HPV感染上皮细胞后,其DNA能整合入细胞基因组,并由于其E2基因表达障碍不能有效抑制E6、E7基因转录而持续高表达E6... 人乳头瘤病毒(HPV)是一种感染人的乳头瘤病毒科病毒,主要感染上皮细胞,其高危型别(主要是16和18型)可引起恶性肿瘤。高危型HPV感染上皮细胞后,其DNA能整合入细胞基因组,并由于其E2基因表达障碍不能有效抑制E6、E7基因转录而持续高表达E6和E7 2种癌蛋白。E6和E7蛋白可分别抑制P53蛋白和pRb蛋白的作用而使细胞周期失控,在细胞基因组受到损伤时细胞周期仍然向前进展;E6蛋白能通过影响多种凋亡调节蛋白或因子的表达而抑制细胞凋亡;E6蛋白和E7蛋白能协同作用上调端粒酶的表达而使细胞永生化;以上机制最终导致受感染细胞发生恶性转化或癌变。本文对HPV的致癌特性及其所表达的E6蛋白和E7蛋白扰乱细胞周期、抑制细胞凋亡并活化端粒酶使细胞永生化的致癌机制的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 人乳头病毒 e6蛋白 e7蛋白 细胞周期 细胞凋亡 端粒酶
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人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA与宫颈病变关系的研究进展 被引量:2
10
作者 张生枝 邵华江 马建婷 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期754-758,共5页
人乳头瘤病毒与子宫颈癌的发生和发展密切相关,其中病毒癌基因E6、E7的表达是致癌的关键,当病毒基因整合进入宿主基因后,E6、E7基因过度表达,最终导致子宫颈癌的发生。文章对E6、E7基因转录产物E6/E7 mRNA的研究进展进行综述。
关键词 人乳头病毒 e6/e7 MRNA 宫颈病变
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稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的B16细胞系的建立 被引量:2
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作者 王鹤 于继云 李力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1088-1092,共5页
目的:构建pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达HPV58E6E7基因的B16细胞系。方法:采用PCR方法扩增出HPV58E6E7融合基因的全长序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加... 目的:构建pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达HPV58E6E7基因的B16细胞系。方法:采用PCR方法扩增出HPV58E6E7融合基因的全长序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×his标签,构建重组真核表达质粒pIRES-neo-HPV58E6E7。利用阳离子脂质体介导法将其转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出稳定转染的阳性克隆。利用Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证HPV58E6E7融合基因在稳定转染的B16细胞株中的表达。结果:经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析,pIRES-neo-HPV58E6E7重组质粒构建正确,转染B16细胞株后,经过Western blot、流式细胞术和免疫荧光等检测显示B16细胞株能够稳定、高效表达HPV58E6E7融合基因,表明B16-HPV58E6E7稳定转染细胞系构建成功。结论:成功构建了pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,建立了可以高效、稳定表达HPV58E6E7融合基因的B16细胞系。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究HPV58治疗性基因疫苗的功能提供了良好的靶细胞,为其在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。 展开更多
关键词 人乳头病毒58型 e6e7基因 稳定转染 小鼠黑色素细胞
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人乳头瘤病毒16型E6和E7癌基因对鸡前脂肪细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 王宁 于莹莹 +4 位作者 王珊珊 乔书培 王伟 闫晓红 李辉 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期47-52,共6页
人乳头瘤病毒的16型E6和E7癌基因已广泛用于建立哺乳动物的永生化细胞,但能否用于建立鸡的永生化细胞尚不清楚。试验究克隆人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7癌基因,分别构建这两个病毒癌基因的逆转录病毒表达载体,包装成逆转录病毒颗粒,... 人乳头瘤病毒的16型E6和E7癌基因已广泛用于建立哺乳动物的永生化细胞,但能否用于建立鸡的永生化细胞尚不清楚。试验究克隆人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7癌基因,分别构建这两个病毒癌基因的逆转录病毒表达载体,包装成逆转录病毒颗粒,感染鸡前脂肪细胞后,采用MTT比色法检测E6和E7基因对鸡前脂肪细胞增殖的影响。结果表明,与对照组相比,E7基因显著促进鸡前脂肪细胞增殖,而E6基因则作用不明显。本研究为E6和E7基因在鸡细胞永生化研究奠定基础。 展开更多
关键词 人乳头病毒 e6癌基因 e7癌基因 细胞增殖
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人乳头瘤病毒6型E7与结核杆菌热休克蛋白70融合基因的构建及原核表达 被引量:1
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作者 党育平 王刚 +3 位作者 范雪莉 沈柱 樊建勇 刘玉峰 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期208-210,共3页
目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插... 目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插入HSP70基因的5'端,构建HPV6E7与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E7-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,进行诱导表达和分离纯化。结果:成功地构建了pGEX-E7-HSP70原核表达质粒;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,经异丙醇-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达相对分子质量约为108000的蛋白;经谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达系统纯化,得到E7与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论:成功获得HPV6型E7与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究该融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头病毒6 e7蛋白 结核杆菌 热休克蛋白70 融合基因 原核表达
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人乳头瘤病毒16型E7抗原细胞毒性T细胞预测表位的分子模拟研究 被引量:1
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作者 徐云升 郝飞 +2 位作者 耿淼 叶庆佾 钟白玉 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期545-547,共3页
对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的预测表位从理论上分析其与HLA-A2分子结合的情况,推测成为HLA-A2限制性表位的可能性。通过计算机分子模拟,确立各表位及其与HLA-A2分子结合形成复合物的模拟结构。结果发现,各表位的三维结构符合HLA-A2... 对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的预测表位从理论上分析其与HLA-A2分子结合的情况,推测成为HLA-A2限制性表位的可能性。通过计算机分子模拟,确立各表位及其与HLA-A2分子结合形成复合物的模拟结构。结果发现,各表位的三维结构符合HLA-A2限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位的结构要求,能较好地与HLA-A2分子结合。根据分子模拟提供的理论支持,各预测表位均符合要求,提示可在后续实验中进行表位合成、筛选、鉴定和多肽疫苗的研制。 展开更多
关键词 人乳头病毒 e7抗原 细胞毒性T细胞表位 分子模拟
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DH3-HPV DNA与Aptima HPV E6/E7 mRNA检测在子宫颈病变中的对比研究
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作者 顾雨佳 吕炳建 《实用妇产科杂志》 北大核心 2025年第4期336-340,共5页
目的:探究DH3-人乳头瘤病毒(HPV)DNA和Aptima HPV E6/E7 mRNA检测在发现子宫颈病变中的应用价值。方法:回顾性收集2022年1月1日至2023年12月31日在浙江大学医学院附属妇产科医院行DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测病例各1254、8... 目的:探究DH3-人乳头瘤病毒(HPV)DNA和Aptima HPV E6/E7 mRNA检测在发现子宫颈病变中的应用价值。方法:回顾性收集2022年1月1日至2023年12月31日在浙江大学医学院附属妇产科医院行DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测病例各1254、8263例,均有子宫颈活检病理随访结果。以子宫颈活检病理结果为金标准,比较DH3-HPV DNA和Aptima HPV E6/E7 mRNA检测低级别鳞状上皮内病变及以上子宫颈病变(LSIL^(+))、高级别鳞状上皮内病变及以上子宫颈病变(HSIL+)的敏感度和特异度。结果:DH3-HPV DNA检测阳性率75.44%(946/1254),Aptima HPV E6/E7 mRNA检测阳性率79.29%(6552/8263)。在年龄≥55岁女性人群中,Aptima HPV E6/E7 mRNA检测阳性率显著高于DH3-HPV DNA[84.70%(1583/1869)vs.76.34%(200/262),P<0.05]。DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测LSIL^(+)的敏感度分别为90.63%(493/544)、91.79%(2953/3217),差异无统计学意义(P>0.05)。DH3-HPV DNA 16/18、Aptima HPV E6/E7 mRNA 16/18/45分型检测LSIL^(+)特异度分别为83.94%(596/710)、85.67%(4323/5046),差异无统计学意义(P>0.05)。DH3-HPV DNA、Aptima HPV E6/E7 mRNA检测HSIL+的敏感度分别为93.94%(124/132)、97.51%(782/802),差异无统计学意义(P>0.05)。Aptima HPV E6/E7 mRNA 16/18/45分型检测HSIL+特异度83.50%(6230/7461),显著高于DH3-HPV DNA 16/18分型检测81.02%(909/1122),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DH3-HPV DNA与Aptima HPV E6/E7 mRNA检测子宫颈病变中敏感度相似,而Aptima HPV E6/E7 mRNA分型检测HSIL+的特异度高于DH3-HPV DNA分型检测;55岁以上女性,Aptima HPV E6/E7 mRNA检测阳性率高于DH3-HPV DNA,可能提示该年龄段人群HPV整合率较高。 展开更多
关键词 子宫颈癌 上皮内病变 人乳头病毒e6/e7 mRNA 人乳头病毒分型 人乳头病毒DNA
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人乳头瘤病毒16型早期基因E7的克隆及其在原核细胞中的表达
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作者 刘朝奇 司静懿 +3 位作者 刘世德 许雪梅 宋国兴 李昆 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期168-172,共5页
目的进一步研究与宫颈癌密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的生物学活性。方法采用PCR法从中国妇女宫颈癌标本中扩增HPV16早期基因E7,测序分析其DNA的序列。结果克隆的HPV16E7基因与标准型进行比较表明,前者无核苷酸突变。将此... 目的进一步研究与宫颈癌密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的生物学活性。方法采用PCR法从中国妇女宫颈癌标本中扩增HPV16早期基因E7,测序分析其DNA的序列。结果克隆的HPV16E7基因与标准型进行比较表明,前者无核苷酸突变。将此基因装入原核表达载体,能在E.Coli中高效表达出谷胱甘肽S-转移酶(GST)-E7蛋白。Western印迹分析表明,此融合蛋白能与E7抗体特异地结合。结论克隆的HPV16E7基因及其表达的蛋白可为今后分子流行病学调查及疫苗研制提供有用的资料。 展开更多
关键词 e7基因 克隆 原核表达 人乳头病毒
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人乳头瘤病毒16型E7C端亚基因片段的克隆与表达
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作者 徐建青 司静懿 +3 位作者 宋国兴 刘世德 李昆 陈浩 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期373-378,共6页
目的旨在获得无转化活性而保留抗原性的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7C端,为进一步研制抗HPV16疫苗打下基础。方法应用自行设计合成的引物进行PCR扩增HPV16E7C端亚基因片段,并克隆入真核表达载体pLNCX... 目的旨在获得无转化活性而保留抗原性的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7C端,为进一步研制抗HPV16疫苗打下基础。方法应用自行设计合成的引物进行PCR扩增HPV16E7C端亚基因片段,并克隆入真核表达载体pLNCX。结果准确获得含有E7C亚基因片段的重组质粒pLNCE7C,将pLNCE7C转染B16细胞。对Southern杂交阳性克隆应用E7多抗进行免疫组织化学方法检测,检出E7C的表达。结论所构建的表达质粒适于DNA疫苗的制备。 展开更多
关键词 人乳头病毒16 e7C亚基因 DNA疫苗
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宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的DNA改组
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作者 李艳佳 张佃财 焦建丽 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期420-422,共3页
目的利用DNA改组技术进化人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因,建立HPV16E7基因突变体库。方法从宫颈癌标本中扩增出HPV16E7基因,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)碎片化该基因,切割成50 bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PC... 目的利用DNA改组技术进化人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因,建立HPV16E7基因突变体库。方法从宫颈癌标本中扩增出HPV16E7基因,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)碎片化该基因,切割成50 bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮普通PCR扩增。结果电泳切胶回收获得与原片段大小相当的基因片段,改组结果较为成功。结论DNA改组在HPV16E7改组中的应用并成功,有利于从HPV16E7基因突变题库中筛选出高免疫原性的基因型别,并为进一步构建HPV治疗性疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 人乳头病毒16e7基因 DNA改组 宫颈癌 人乳头病毒疫苗
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人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7蛋白在NIH/3T3细胞中的表达和定位
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作者 盛德乔 伍欣星 赵文先 《西安医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期5-6,33,共3页
目的 将带有人乳头瘤病毒 1 6型 (湖北株 )E7基因的真核表达载体 pL(E7 HB)SN导入NIH/3T3细胞进行瞬时表达。方法 重组质粒转染 3T3细胞通过DNA 磷酸钙共沉淀法 ;E7基因表达的检测采用RT PCR和间接免疫荧光实验。结果 E7基因导入真... 目的 将带有人乳头瘤病毒 1 6型 (湖北株 )E7基因的真核表达载体 pL(E7 HB)SN导入NIH/3T3细胞进行瞬时表达。方法 重组质粒转染 3T3细胞通过DNA 磷酸钙共沉淀法 ;E7基因表达的检测采用RT PCR和间接免疫荧光实验。结果 E7基因导入真核细胞后能有效转录并表达E7蛋白 ,通过免疫荧光染色可看到E7蛋白主要定位在胞浆中 ,细胞核中也有 ,但量较少。结论 这可能和湖北株HPV1 6E7基因发生突变有关。 展开更多
关键词 人乳头病毒 定位 HPV16 e7基因 基因表达 NIH/3T3细胞 重组质粒
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早期有丝分裂抑制因子1对DNA损伤后人乳头瘤病毒16亚型E7基因介导的DNA重复复制的调控作用 被引量:2
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作者 刘亚飞 沈彦军 +2 位作者 杨阳 晁岚 杨芳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期485-490,共6页
目的探索DNA损伤后人乳头瘤病毒16亚型E7致癌基因(HPV-16 E7)引起的DNA重复复制的分子机制。方法首先在稳定表达HPV-16 E7的RPE1 E7细胞及对照空载细胞RPE1 Vector中利用流式细胞术检测DNA损伤前后细胞周期改变情况;然后利用免疫印迹检... 目的探索DNA损伤后人乳头瘤病毒16亚型E7致癌基因(HPV-16 E7)引起的DNA重复复制的分子机制。方法首先在稳定表达HPV-16 E7的RPE1 E7细胞及对照空载细胞RPE1 Vector中利用流式细胞术检测DNA损伤前后细胞周期改变情况;然后利用免疫印迹检测DNA损伤前后早期有丝分裂抑制物1(Emi1)在RPE1 E7及RPE1 Vector细胞中的蛋白表达水平;最后在DNA损伤后的RPE1 E7细胞中利用小干扰RNA干扰Emi1的表达后,通过流式细胞术检测细胞多倍体的比例变化。结果与对照细胞相比,DNA损伤后的RPE1 E7细胞中多倍体比例显著增高(t=6.397,P=0.0031);在DNA损伤后的RPE1 E7细胞中Emi1的蛋白表达水平显著增高(t=8.241,P=0.0012);在DNA损伤后的RPE1 E7细胞中应用2条独立的小干扰RNA干扰Emi1的表达后,多倍体细胞比例均显著降低(t=2.916,P=0.0434;t=3.452,P=0.0260)。结论DNA损伤后HPV-16 E7可通过Emi1介导DNA重复复制。 展开更多
关键词 人乳头病毒16亚型 e7 早期有丝分裂抑制因子1 DNA重复复制
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