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绵羊十二指肠中β-防御素-1原核表达和抑菌效果分析
1
作者 王鑫 秦少杰 +3 位作者 毛伟 巩志国 王志 曹贵方 《动物医学进展》 北大核心 2025年第11期38-43,共6页
哺乳动物防御素具有抗肿瘤、广谱抗菌和免疫调节的作用,但目前防御素在大规模生产上存在一定困难而未被广泛应用。为开发利用防御素,通过构建pET-22b-SUMO-SBD-1重组质粒及诱导表达的方法表达绵羊β-防御素-1(SBD-1),从蒙古绵羊十二指... 哺乳动物防御素具有抗肿瘤、广谱抗菌和免疫调节的作用,但目前防御素在大规模生产上存在一定困难而未被广泛应用。为开发利用防御素,通过构建pET-22b-SUMO-SBD-1重组质粒及诱导表达的方法表达绵羊β-防御素-1(SBD-1),从蒙古绵羊十二指肠中提取的总RNA经PCR扩增后可获得绵羊SBD-1 cDNA基因。为了大量表达SBD-1,采用了原核表达系统,并添加了SUMO作为标签蛋白。用SalⅠ、NotⅠ双酶切分别处理原核表达载体pET-22b和阳性重组质粒pMD19-T-SUMO-SBD-1,得到约4000 bp的pET-22b和约400 bp的SBD-1。将重组质粒pET-22b-SUMO-SBD-1转化入BL21(DE3),并对转入pET-22b-SUMO-SBD-1重组质粒进行检测,得到单一条带为阳性重组菌。结果表明,在低温条件下,大肠埃希氏菌表达的SUMO-SBD-1融合蛋白的蛋白表达水平和活性可能都会提高。Western blot检测获得特异性条带,结果与预期相符。通过体外表达绵羊防御素,并研究其抗菌作用,为进一步开发利用防御素奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊β-防御素 SUMO 原核表达 抗菌肽
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β-防御素的生物学特性及其在调控动物肠道屏障中的研究进展
2
作者 王卓 赵雨薇 +2 位作者 屠焰 刁其玉 崔凯 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期995-1005,共11页
肠道黏膜屏障是阻止外来病原性物质入侵的第一道防线,其完整性对维持肠道健康至关重要。β-防御素是广泛分布于哺乳动物上皮细胞的小分子多肽,具有抗微生物、抗肿瘤、抗炎及免疫调节等生物学特性,且抗菌广谱、分子量小、不易产生耐药性... 肠道黏膜屏障是阻止外来病原性物质入侵的第一道防线,其完整性对维持肠道健康至关重要。β-防御素是广泛分布于哺乳动物上皮细胞的小分子多肽,具有抗微生物、抗肿瘤、抗炎及免疫调节等生物学特性,且抗菌广谱、分子量小、不易产生耐药性。β-防御素可以通过调节肠道菌群、肠上皮细胞紧密连接表达、肠上皮细胞抑菌物质的分泌以及肠黏膜免疫作用从而调控肠道屏障功能,维护肠道内环境的稳态。本文就β-防御素的生物学特性及作用机制、β-防御素在调控动物肠道屏障上的作用、饲料添加剂对肠道β-防御素的调节作用三大方面进行综述,以期为β-防御素在动物肠道中的应用提供参考。 展开更多
关键词 β-防御素 生物学特性 畜禽 肠道屏障
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猪防御素-1的原核表达及抑菌效应分析
3
作者 国德洋 胡慧 +1 位作者 郑雪莉 姜艳芬 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2836-2846,共11页
旨在探究原核表达的猪防御素-1(porcineβ-defensin-1)的体内外抑菌作用,为临床乳房炎的治疗提供材料和理论依据。本试验通过构建PBD-1的原核表达载体,优化诱导表达条件,过量表达纯化后测定最小抑菌浓度并绘制杀菌动力曲线。分别用E.col... 旨在探究原核表达的猪防御素-1(porcineβ-defensin-1)的体内外抑菌作用,为临床乳房炎的治疗提供材料和理论依据。本试验通过构建PBD-1的原核表达载体,优化诱导表达条件,过量表达纯化后测定最小抑菌浓度并绘制杀菌动力曲线。分别用E.coli 13-1和S.aureus 4-1构建小鼠乳房炎模型,并用不同浓度的PBD-1进行乳房内灌注治疗试验,通过乳腺组织病理变化及其载菌量观察治疗效果。结果显示,成功构建PBD-1的原核表达载体,重组PBD-1为可溶性表达,表达量为328.6 mg·mL^(-1)。体外抑菌试验显示,PBD-1对E.coli 13-1、S.aureus 4-1和S.epidermidis 25-1均有抑制作用,且MIC为82.15μg·mL^(-1)。乳房内灌注试验结果显示,1×MIC和2×MIC的PBD-1对S.aureus 4-1和E.coli 13-1小鼠乳房炎模型有一定的治疗作用。重组PBD-1对3种细菌均具有体外抑制作用,且对S.aureus 4-1和E.coli 13-1的乳房炎模型具有治疗作用。 展开更多
关键词 原核表达 乳房炎 猪防御素-1 体外抑菌 动物模型
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β-防御素yTAP对小鼠肠道形态及菌群多样性的影响
4
作者 黎小银 刘萌 +2 位作者 武新学 罗璠 高彦华 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2379-2391,共13页
【目的】探究β-防御素牦牛气管抗菌肽(yak tracheal antimicrobial peptide,yTAP)对小鼠肠道形态和微生物菌群多样性的影响,为揭示yTAP对肠道健康的作用及将其开发为新型抗菌制剂提供参考。【方法】选取24只4周龄无特定病原菌(SPF)ICR... 【目的】探究β-防御素牦牛气管抗菌肽(yak tracheal antimicrobial peptide,yTAP)对小鼠肠道形态和微生物菌群多样性的影响,为揭示yTAP对肠道健康的作用及将其开发为新型抗菌制剂提供参考。【方法】选取24只4周龄无特定病原菌(SPF)ICR小鼠,随机分为3组:对照组(CON)、5 mg/kg yTAP组(LOW)和10 mg/kg yTAP组(HIGH)(n=8)。试验组小鼠尾静脉注射相应浓度yTAP,对照组小鼠注射等体积无菌生理盐水,0.5 mL/只。给药后正常饲养7 d,称重后处死小鼠迅速收集各脏器组织并称重,计算脏器系数。采集回肠组织,通过苏木精-伊红(HE)染色观察肠道形态变化。收集小鼠结肠内容物,提取基因组DNA并基于NovaSeq 6000测序平台进行16S rRNA扩增并测序分析。【结果】5和10 mg/kg yTAP对小鼠体重及脏器系数均无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,10 mg/kg yTAP组小鼠回肠隐窝深度显著降低(P<0.05),绒毛高度/隐窝深度比值显著升高(P<0.05);5 mg/kg yTAP组小鼠结肠菌群的Shannon指数显著降低(P<0.05),10 mg/kg yTAP组小鼠结肠菌群的Shannon指数和Simpson指数均显著降低(P<0.05)。在门水平上,与对照组相比,10 mg/kg yTAP组小鼠结肠中厚壁菌门相对丰度及厚壁菌门/拟杆菌门比值(F/B)显著降低(P<0.05)。在属水平上,与对照组相比,5 mg/kg yTAP组小鼠结肠的乳杆菌属相对丰度增加(P>0.05),10 mg/kg yTAP组小鼠结肠的臭气杆菌属相对丰度显著降低(P<0.05)。与5 mg/kg yTAP组相比,10 mg/kg yTAP组小鼠结肠的乳杆菌属和拟杆菌属相对丰度显著降低(P<0.05)。LEfSe分析结果显示,5 mg/kg yTAP组小鼠结肠的优势菌为乳杆菌属和拟杆菌属,10 mg/kg yTAP组小鼠结肠中的优势菌为葡萄球菌目。【结论】本试验条件下,yTAP对小鼠无急性毒性,其中10 mg/kg yTAP可改善小鼠回肠黏膜形态,显著降低结肠菌群的Alpha多样性;5 mg/kg yTAP能提高小鼠结肠乳杆菌属、拟杆菌属等优势菌属的相对丰度。 展开更多
关键词 β-防御素 牦牛气管抗菌肽(yTAP) 肠道形态 肠道菌群
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芍药苷促β-防御素表达在念珠菌性口炎中的作用及机制研究
5
作者 肖丽君 潘燕 杨建堂 《口腔医学研究》 北大核心 2025年第8期700-706,共7页
目的:探讨芍药苷(paeoniflorin, PF)促进β-防御素表达在念珠菌性口炎中的作用及机制。方法:采用不同浓度PF处理Leuk-1细胞24、48、72 h, CCK-8试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,筛选后续实验PF浓度与作用时间;建立白... 目的:探讨芍药苷(paeoniflorin, PF)促进β-防御素表达在念珠菌性口炎中的作用及机制。方法:采用不同浓度PF处理Leuk-1细胞24、48、72 h, CCK-8试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,筛选后续实验PF浓度与作用时间;建立白色念珠菌(Candida albcians, C.a)感染口腔黏膜上皮细胞系Leuk-1的念珠菌性口炎体外模型,检测PF的抗菌能力;实时荧光定量PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, RT-qPCR)、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assays, ELISA)检测PF处理口腔黏膜上皮细胞后β-防御素(human β-defensin, HBD-1、HBD-2、HBD-3)基因和蛋白的表达水平;Western blot检测核因子-κB(NF-κB)信号通路中磷酸化P65蛋白活化情况。结果:CCK-8结果显示,5μmol/L、10μmol/L为PF作用Leuk-1细胞的最佳浓度,可明显降低细胞模型中C.a的黏附率(P<0.05)。PF能够诱导Leuk-1中HBD-1、HBD-2、HBD-3基因和蛋白的表达,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.01),且C.a的生存率显著下降。PF作用细胞后,p-P65/P65蛋白相对表达量升高,阻断P65-NF-κB信号通路后,HBDs的基因、蛋白表达量明显降低(P<0.05),同时C.a的生存率显著下降(P<0.0001)。结论:PF可通过激活P65-NF-κB通路蛋白,有效诱导Leuk-1细胞合成分泌β-防御素,进而抑制C.a菌丝生长、控制C.a的感染与侵袭,为PF防治念珠菌性口炎和口腔黏膜疾病提供依据。 展开更多
关键词 芍药苷 念珠菌性口炎 β-防御素
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双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素2(hBD-2)mRNA的表达
6
作者 王国兴 吴琦 +2 位作者 黄宁 汪宇辉 王伯瑶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1564-1565,共2页
关键词 双歧杆菌 胞壁蛋白 人肠腺上皮细胞 β-防御素2 hbd-2 MRNA表达 激活作用 活性组分
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意大利蜜蜂防御素-2蛋白序列分析及表达特性研究
7
作者 邓晓银 于点点 +3 位作者 王珏 张旭凤 郭媛 郭丽娜 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1454-1462,共9页
【目的】对意大利蜜蜂(Apis mellifera)防御素-2蛋白(Defensin-2,Def-2)进行蛋白序列分析和表达特性研究,以期为意大利蜜蜂防御素基因的免疫防御机制、发育和代谢途径研究提供理论基础。【方法】利用生物信息学在线网站及软件对Def-2蛋... 【目的】对意大利蜜蜂(Apis mellifera)防御素-2蛋白(Defensin-2,Def-2)进行蛋白序列分析和表达特性研究,以期为意大利蜜蜂防御素基因的免疫防御机制、发育和代谢途径研究提供理论基础。【方法】利用生物信息学在线网站及软件对Def-2蛋白进行预测分析,并采用实时荧光定量PCR对意大利蜜蜂不同发育时期(幼虫期、蛹期及1、5、10、15、20、25和30 d成年期工蜂)的基因相对表达量进行检测分析。【结果】意大利蜜蜂防御素-2基因(Def-2)编码104个氨基酸残基,相对分子量为11858.90 Da,理论等电点(pI)为8.54,为两性不稳定蛋白。该蛋白N-末端有一段含21个氨基酸的信号肽,存在1个跨膜结构域,亚细胞主要定位于内质网、液泡和高尔基体,无糖基化位点,存在15个磷酸化位点,其二级结构以无规卷曲(54.81%)为主、延伸链(28.85%)分布较多,α-螺旋(16.35%)分布较少,蛋白序列高度保守,与Def-1、GB44032-PA、Dl-2、Imd等蛋白存在基因互作关系,具有防御蛋白样结构域(DEFL),结构域采用以半胱氨酸稳定的α/β支架为特征的结构,亲缘关系与小蜜蜂极为相近。Def-2基因在意大利蜜蜂不同发育时期的表达水平存在差异且随日龄增大而升高,30 d的相对表达量显著高于其他日龄(P<0.05)。【结论】意大利蜜蜂Def-2蛋白属于两性不稳定蛋白,参与细胞间信号传输并维持细胞正常形态;蛋白序列高度保守,亲缘关系与小蜜蜂最近,且该基因在30 d成年期工蜂中高丰度表达,推测其可能调节免疫基因转运而影响蜜蜂的免疫识别过程。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 防御素-2蛋白 表达差异 实时荧光定量PCR
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朱鹮β-防御素基因的血液表达谱及相关性分析
8
作者 邱国强 黄韵怡 +4 位作者 俞越 石坚 刘小甜 何珂 方盛国 《浙江林业科技》 2024年第6期1-7,共7页
由于种群瓶颈效应,出现朱鹮Nippion nippion人工育种受精率低和雏鸟存活率低等现象,从而限制了其重引入工作,亟须从分子层面对朱鹮的免疫情况作进一步研究。防御素是重要的免疫效应分子,在生物体抗菌及适应环境的过程中发挥着重要作用,... 由于种群瓶颈效应,出现朱鹮Nippion nippion人工育种受精率低和雏鸟存活率低等现象,从而限制了其重引入工作,亟须从分子层面对朱鹮的免疫情况作进一步研究。防御素是重要的免疫效应分子,在生物体抗菌及适应环境的过程中发挥着重要作用,但目前缺少对朱鹮种群β-防御素基因表达的研究。本研究以浙江德清下渚湖朱鹮繁育基地的74只朱鹮为研究对象,以其外周血为研究样品,通过实时荧光定量PCR检测了朱鹮11个β-防御素基因的血液表达水平,构建了浙江朱鹮种群血液β-防御素基因表达谱,并对广泛表达的AvBD1α、AvBD2、AvBD3、AvBD4及AvBD7基因表达情况进行分析。结果表明:(1)5个广泛表达的AvBD基因相对表达水平在两两之间呈现极显著的正相关(P<0.01);(2)朱鹮幼鸟血液的AvBD的相对表达水平高于亚成体及成鸟,推测其在幼鸟生长发育和适应环境中发挥重要作用;(3)亲代朱鹮与子代朱鹮的AvBD表现出中度至高度的正相关。本研究结果对于筛选具有较强免疫力的朱鹮个体、组建野化放归种群具有指导意义。 展开更多
关键词 β-防御素 朱鹮 种群 表达谱
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鸡β-防御素-1 cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达 被引量：11
9
作者 张辉华 毕英佐 +1 位作者 曹永长 马静云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期767-772,共6页
从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡β-防御素-1(Gallinacin-1,Gal-1)cDNA,将扩增产物与pGEM-TEasy载体相连,经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp,与报道的Gal-1cDNA编码区碱基序列完全相同。分析核苷酸... 从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过反转录PCR(RT-PCR)扩增出鸡β-防御素-1(Gallinacin-1,Gal-1)cDNA,将扩增产物与pGEM-TEasy载体相连,经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为198bp,与报道的Gal-1cDNA编码区碱基序列完全相同。分析核苷酸序列表明Gal-1与火鸡异嗜性白细胞肽-1(Turkeyheterophilpep-tides,THP-1)具有85.4%同源性。氨基酸序列方面Gal-1与THP-1同源性最高,为72.7%。将Gal-1基因成熟肽片段插入到酵母表达载体pPICZ-αC,构建重组表达载体pPICZ-αC-gal-1,电转入表达宿主菌X-33,Zeocin抗性筛选重组菌株。挑取阳性菌株经甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4.5ku位置出现预期条带。对其抗菌活性检测发现具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细菌的活性。反相高效液相色谱表明阳性菌株表达产物与标准品在层析柱中保留时间一致。 展开更多
关键词 鸡 β-防御素-1 克隆 毕赤酵母 表达
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重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究 被引量：16
10
作者 韩宗玺 廖文艳 +2 位作者 王瑞琴 邵昱昊 马得莹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期476-480,共5页
从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序... 从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序列与鸡AvBD7氨基酸序列同源性最高,为62.7%。将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,表达的重组鸡AvBD6融合蛋白分子量约为32ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定。结果表明,重组鸡AvBD6融合蛋白对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌的抗菌活性较弱,对猪霍乱沙门氏菌无抗菌活性。重组鸡AvBD6蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度范围为31.25μg/mL～250μg/mL。此外,重组鸡AvBD6蛋白对温度和酸碱度有较高的稳定性。 展开更多
关键词 鸡β-防御素-6 遗传进化 抗菌活性
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沙葱黄酮对肉羊生产性能和肠道组织β-防御素基因表达的影响 被引量：14
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作者 陈圣阳 敖长金 +4 位作者 郑彦楷 陈仁伟 刘旺景 木其尔 白晨 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期1095-1102,共8页
本试验旨在研究沙葱黄酮对肉羊生产性能和肠道组织免疫因子β-防御素-1(sBD-1)和β-防御素-2(sBD-2)基因表达的影响。选取60只健康、体重[(39.9±3.2)kg]相近的6月龄小尾寒羊羯羊,采用单因素完全随机区组设计,共分为4组,每组15只。... 本试验旨在研究沙葱黄酮对肉羊生产性能和肠道组织免疫因子β-防御素-1(sBD-1)和β-防御素-2(sBD-2)基因表达的影响。选取60只健康、体重[(39.9±3.2)kg]相近的6月龄小尾寒羊羯羊,采用单因素完全随机区组设计,共分为4组,每组15只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加11(低浓度黄酮组)、22(中浓度黄酮组)和33 mg/kg沙葱黄酮(高浓度黄酮组)的试验饲粮,共饲喂70 d,其中预试期15 d,正试期60 d。每天记录各组羊的采食量,每隔15 d晨饲前空腹称重1次。试验结束后每组随机选取3只羊进行屠宰,采集十二指肠、空肠、回肠组织样,应用实时荧光定量PCR进行sBD-1和s B-2基因相对表达量的测定。结果表明:1)试验第30~45天以及第45~60天,各试验组肉羊的平均日采食量均显著高于对照组(P<0.05),其中以高浓度黄酮组肉羊的平均日采食量最高;试验第45~60天,与对照组相比,各试验组肉羊的平均日增重显著提高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05),其中以中浓度黄酮组肉羊的平均日增重最高,高浓度黄酮组料重比最低。2)与对照组相比,饲粮添加33 mg/kg的沙葱黄酮显著提高了sBD-1基因在空肠和回肠中及sBD-2基因在空肠中的相对表达量(P<0.05),饲粮添加22 mg/kg的沙葱黄酮显著提高了sBD-2基因在十二指肠中的相对表达量(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加22~33 mg/kg的沙葱黄酮能够显著提高肉羊生产性能和β-防御素(sBD-1、sBD-2)基因在肠道组织中的表达。 展开更多
关键词 沙葱黄酮 肉羊 生产性能 免疫 β-防御素 基因表达
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鸡β-防御素基因的克隆、序列分析及其在组织中的分布 被引量：13
12
作者 马得莹 刘胜旺 +1 位作者 李一经 单安山 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1033-1039,共7页
本研究采用RT-PCR法,分别从鸡肝脏和舌组织中扩增到鸡β-防御素(Gallinacin,Gal)Gal-6、Gal-8与Gal-9基因,经序列测定表明,Gal-6、Gal-8和Gal-9大小分别为201、204和201 bp,其成熟肽分别由67、68和67个氨基酸残基组成。组织表达分析表明... 本研究采用RT-PCR法,分别从鸡肝脏和舌组织中扩增到鸡β-防御素(Gallinacin,Gal)Gal-6、Gal-8与Gal-9基因,经序列测定表明,Gal-6、Gal-8和Gal-9大小分别为201、204和201 bp,其成熟肽分别由67、68和67个氨基酸残基组成。组织表达分析表明,Gal-6基因在鸡体内各组织器官中广泛地表达,在鸡皮肤、舌、心脏、小肠、胸肌、肝脏、肾脏、法氏囊、脾脏和胰腺中表达量较高;在肺脏、睾丸和骨髓中也有一定量表达。相比之下,Gal-8在鸡体内的表达较为局限,Gal-8基因仅在舌、小肠、肺脏和肝脏中大量表达。Gal-9基因在鸡体内组织中分布也较广泛,在舌和小肠中大量表达,在气管、肺脏、肝脏、肾脏、骨髓和胸腺有少量表达。 展开更多
关键词 抗菌肽 β-防御素 鸡 基因表达
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枯草芽孢杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响 被引量：19
13
作者 王佩 范燕茹 +1 位作者 金鑫 杨银凤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期760-767,共8页
选用益生枯草芽孢杆菌研究其对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的调节作用。首先,在体外成功培养绵羊瘤胃上皮细胞,然后用枯草芽孢杆菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞进行不同浓度、不同时间的刺激,利用荧光定量PCR技术(Real-ti... 选用益生枯草芽孢杆菌研究其对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的调节作用。首先,在体外成功培养绵羊瘤胃上皮细胞,然后用枯草芽孢杆菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞进行不同浓度、不同时间的刺激,利用荧光定量PCR技术(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)从mRNA水平检测刺激后上皮细胞中绵羊β-防御素-1(Sheep beta-defensin-1,SBD-1)基因表达水平的差异。结果表明:当菌液浓度为1010 cfu·mL-1刺激上皮细胞8h后,SBD-1的表达量达到最高;不同的菌液浓度诱导下SBD-1的表达量均有显著增加,109、1010、1011 cfu·mL-1菌液浓度刺激下,SBD-1的表达量与空白相比差异极显著(P<0.01)。结果表明,枯草芽孢杆菌能够诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1基因的表达。 展开更多
关键词 β-防御素-1 瘤胃上皮细胞 枯草芽孢杆菌 荧光定量PCR
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鼠李糖乳酸杆菌LG_A对鸡小肠上皮细胞β-防御素-9基因表达的影响 被引量：14
14
作者 黎观红 洪智敏 +3 位作者 贾永杰 易中华 瞿明仁 刘思国 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期634-641,共8页
本研究旨在研究益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞β-防御素-9(AvBD9)表达的调节作用。选用鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞进行剂量依赖性及时间依赖性刺激实验,利用实时荧光定量PCR(fluorescence quant... 本研究旨在研究益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞β-防御素-9(AvBD9)表达的调节作用。选用鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞进行剂量依赖性及时间依赖性刺激实验,利用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)从mRNA水平研究刺激后上皮细胞AvBD9基因表达水平的差异。结果表明,不同浓度(2×105、2×106、2×107 cfu.mL-1)鼠李糖乳酸杆菌LGA均能上调AvBD9mRNA的表达,且在不同细菌浓度之间AvBD9mRNA的表达存在差异。热灭活鼠李糖乳杆菌LGA亦能上调AvBD9基因表达,且上调值显著高于活菌(P<0.05)。鼠李糖乳杆菌LGA刺激上皮细胞后AvBD9表达存在时间依赖关系,12h时AvBD9的表达达到峰值。Western blot检测结果显示,鼠李糖乳杆菌LGA刺激后的上皮细胞培养上清中存在AvBD9蛋白表达,表明AvBD9蛋白可以分泌到细胞外而发挥其生物学功能。益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA与鸡肠道上皮细胞的相互作用过程中,鼠李糖乳酸杆菌LGA能够促进上皮细胞抗菌肽β-防御素-9的表达。本研究结果提示益生性乳杆菌可能通过促进肠道上皮抗菌肽的表达而发挥其益生作用。 展开更多
关键词 β-防御素-9 鸡小肠上皮细胞 鼠李糖乳酸杆菌LGA 荧光定量PCR
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β-防御素在金华猪和长白猪肠道中表达规律的研究 被引量：10
15
作者 安沙 韩菲菲 +2 位作者 高彦华 刘倚帆 汪以真 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1762-1768,共7页
本试验旨在研究金华猪和长白猪从初生到60日龄不同肠段中3种β-防御素[β-防御素-1(pBD-1)、β-防御素-2(pBD-2)和β-防御素-3(pBD-3)]基因表达规律,并比较β-防御素基因在2个品种之间的表达差异。选取初生、20、40和60日龄的金华猪和... 本试验旨在研究金华猪和长白猪从初生到60日龄不同肠段中3种β-防御素[β-防御素-1(pBD-1)、β-防御素-2(pBD-2)和β-防御素-3(pBD-3)]基因表达规律,并比较β-防御素基因在2个品种之间的表达差异。选取初生、20、40和60日龄的金华猪和长白猪各3头,屠宰后取十二指肠、空肠、回肠和结肠组织,实时定量PCR法检测各肠段pBD-1、pBD-2和pBD-3基因的表达量。结果表明:1)从初生到60日龄,随日龄的增加pBD-1和pBD-3基因在猪肠道中的表达量升高,pBD-2基因在十二指肠和空肠中的表达量升高,而在猪结肠和回肠中的表达量先下降后上升。2)在20、40和60日龄时,金华猪各肠段中3种β-防御素基因的表达量均高于长白猪。3)初生和20日龄,金华猪十二指肠pBD-1基因表达量极显著高于长白猪(P<0.01);60日龄pBD-1基因在空肠、回肠和结肠中的表达量,金华猪显著高于长白猪(P<0.05),pBD-2基因在十二指肠、回肠和结肠的表达量,金华猪显著高于长白猪(P<0.05),金华猪pBD-3基因在十二指肠、空肠和回肠的表达量显著高于长白猪(P<0.05),结肠中的表达量极显著高于长白猪(P<0.01)。结果显示,初生到60日龄,pBD-1和pBD-3基因在猪肠道中的表达呈上升趋势,金华猪肠道中3种β-防御素的表达水平在20、40和60日龄均高于长白猪。 展开更多
关键词 β-防御素 金华猪 长白猪 肠道 基因表达
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鸡β-防御素-3的克隆与诱导表达 被引量：10
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作者 张辉华 毕英佐 +1 位作者 曹永长 马静云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期401-404,435,共5页
利用反转录PCR(RT-PCR)与套式PCR技术检测Gal-3基因在鸡体不同组织的分布表达。实验结果表明Gal-3基因在法氏囊、皮肤、舌头、肺脏、骨髓、气管等组织中广泛分布,在肾脏、脾脏、肝脏、胰脏等组织中没有检测到。对从鸡骨髓中扩增出来的β... 利用反转录PCR(RT-PCR)与套式PCR技术检测Gal-3基因在鸡体不同组织的分布表达。实验结果表明Gal-3基因在法氏囊、皮肤、舌头、肺脏、骨髓、气管等组织中广泛分布,在肾脏、脾脏、肝脏、胰脏等组织中没有检测到。对从鸡骨髓中扩增出来的β-防御素(Gal-3)cDNA进行克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为297bp,与GenBank中的Gal-3cDNA序列完全相同。核苷酸序列比较表明在同源性上,Gal-3与Gal-1、Gal-2基因核苷酸相似性分别为75%、50%,同火鸡GPV-1基因同源性最高,达91%。体外诱导表达实验表明在气管上皮细胞中LPS与灭活卡介苗可以诱导Gal-3的表达;Gal-3在法氏囊细胞、肺上皮细胞的表达为持续性表达。 展开更多
关键词 β-防御素-3(Gallinacin-3) 克隆 诱导表达
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β-防御素在天然免疫中的作用 被引量：12
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作者 孙岩 王路 +3 位作者 温俊歌 薄联锋 徐志坤 张德礼 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期120-123,共4页
天然免疫系统是宿主抵抗外界病原微生物入侵的重要组织系统。β-防御素是一类富含半胱氨酸和精氨酸的内源性阳离子低分子抗微生物短肽,主要分布于牛的骨髓以及人和多种动物的胃肠道、呼吸道、舌、牙龈、肾、皮肤的的上皮中,是先天性免... 天然免疫系统是宿主抵抗外界病原微生物入侵的重要组织系统。β-防御素是一类富含半胱氨酸和精氨酸的内源性阳离子低分子抗微生物短肽,主要分布于牛的骨髓以及人和多种动物的胃肠道、呼吸道、舌、牙龈、肾、皮肤的的上皮中,是先天性免疫的重要组成部分。β-防御素具有十分广泛的生物活性,对细菌、真菌、病毒、寄生虫等多种病原体都具有杀伤作用,还对免疫细胞有趋化功能,并参与免疫调节,在天然免疫中发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 天然免疫 β-防御素 病原体 趋化功能
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鸡β-防御素-3在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定 被引量：5
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作者 赵绪永 马辉 +2 位作者 赵丽 朱礼倩 李清州 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期24-27,共4页
采用RT-PCR方法从鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡β-防御素-3成熟肽基因,将其克隆到酵母表达载体pPICZα-A的分泌信号肽基因下游。线性化后的重组质粒电击转化毕赤酵母宿主菌GS115,经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定后,得到重组酵母菌。阳性转化... 采用RT-PCR方法从鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡β-防御素-3成熟肽基因,将其克隆到酵母表达载体pPICZα-A的分泌信号肽基因下游。线性化后的重组质粒电击转化毕赤酵母宿主菌GS115,经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定后,得到重组酵母菌。阳性转化菌经甲醇诱导后,SDS-PAGE和western blot鉴定结果表明,在毕赤酵母中得到分泌性表达产物,分子量约为8.9ku,活性检测表明其具有显著的抑菌活性。 展开更多
关键词 鸡 β-防御素-3 毕赤酵母 分泌表达
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鸡β-防御素及其基因工程研究进展 被引量：4
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作者 石建州 康相涛 +2 位作者 孙桂荣 田亚东 齐珂珂 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2007年第1期103-106,共4页
鸡β-防御素作为鸡重要的天然免疫屏障,对于细菌、真菌乃至某些被膜病毒有广谱高效杀伤作用.该文着重描述了鸡β-防御素的分子结构、抗菌机理、生物活性及其基因工程研究进展,并从原核系统和真核系统的基因克隆与表达的研究现状进行了综述.
关键词 β-防御素 基因工程 克隆 表达
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鸡β-防御素-1对鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用 被引量：6
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作者 张辉华 杨小梅 +4 位作者 谢青梅 马静云 罗艳娜 曹永长 毕英佐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期402-408,共7页
本文旨在研究鸡β-防御素-1(AvBD1)对鸡IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用。通过基因工程技术,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2。14日龄岭南黄肉鸡随机分成5组,分别免疫PBS、空质粒载体pcDNA3.1(+)、重组质粒pcDNA3... 本文旨在研究鸡β-防御素-1(AvBD1)对鸡IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫佐剂作用。通过基因工程技术,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2。14日龄岭南黄肉鸡随机分成5组,分别免疫PBS、空质粒载体pcDNA3.1(+)、重组质粒pcDNA3.1(+)-VP2、重组质粒pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcD-NA3.1(+)-VP2联合免疫、IBD弱毒苗。收集免疫后不同时期的外周血血清样本,用ELISA方法检测血清中IB-DV VP2特异性抗体水平,通过流式细胞仪检测CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量。结果表明,联合免疫组(即pcDNA3.1(+)-AvBD1与pcDNA3.1(+)-VP2共同免疫)VP2特异性抗体水平显著高于其他组;单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组VP2特异性抗体水平与免疫IBD弱毒苗组相当,显著高于PBS组与空质粒载体pcD-NA3.1(+)组。在二免后第7天,联合免疫组外周血中CD3+、CD4+与CD8+T淋巴细胞的含量也显著高于单独免疫质粒pcDNA3.1(+)-VP2组,其它时间无显著性差异。IBDV攻毒后的保护率也是联合免疫组高于单独免疫pcDNA3.1(+)-VP2组。这些结果表明,鸡AvBD1可以作为一种免疫佐剂用于增强IBDVVP2基因DNA疫苗的免疫力。 展开更多
关键词 鸡β-防御素-1(AvBD1) 免疫佐剂 IBDV DNA疫苗
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