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产甲酸草酸杆菌细胞数群体感应系统基因hdtS克隆和功能分析
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作者 姜巨全 刘贺男 +2 位作者 肖鸿禹 付晓薇 朱光宇 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期49-56,共8页
为鉴定产甲酸草酸杆菌(Oxalobacter formigenes)是否具有细胞数群体感应(QS)系统,将费氏弧菌(Vibrio fischeri)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorences)QS系统相关基因与产甲酸草酸杆菌(O.formigenes)基因组序列进行比对,初步确定hdtS和... 为鉴定产甲酸草酸杆菌(Oxalobacter formigenes)是否具有细胞数群体感应(QS)系统,将费氏弧菌(Vibrio fischeri)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorences)QS系统相关基因与产甲酸草酸杆菌(O.formigenes)基因组序列进行比对,初步确定hdtS和AGPA为QS系统候选基因。通过PCR和T-A克隆方法分别克隆以上两个基因并将其构建成表达载体pET19-hdtS和pET19-AGPA,借助SDS-PAGE凝胶电泳证实以上两个基因均在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中高效表达,采用平板菌株报告法鉴定hdtS具有酰基高丝氨酸内酯(AHL)合成酶的功能,而AGPA则不具有该功能。这是国内外首次报道产甲酸草酸杆菌(O.formigenes)中QS系统有关基因,对该菌株QS系统了解及分析影响该菌株在人肠道内定殖因素具有重要意义。 展开更多
关键词 克隆 鉴定 产甲酸草酸杆菌 细胞数群体感应系统 hdtS AGPA
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中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因的分离、克隆和鉴定
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作者 孔德波 叶章群 +5 位作者 陈志强 杨为民 姚林方 郭辉 刘冠琳 曾令启 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期314-317,共4页
目的克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重... 目的克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染人胚肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达。被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0~72h培养液中草酸浓度的变化。结果frc基因的真核表达载体构建成功。转染293细胞后24~72h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达。转染pEGFP-frc细胞12~72h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞(P<0.05)。结论中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因;frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力。 展开更多
关键词 草酸尿 基因治疗 产甲酸草酸杆菌 甲酰辅酶A转移酶
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产甲酸草酸杆菌基因frc和OXC在人骨髓间充质干细胞中的表达 被引量:1
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作者 阳旭明 袁坚 +1 位作者 雷鸣 张泽 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第6期874-876,共3页
目的:将产甲酸草酸杆菌(OXF)草酸分解基因frc和oxc分别克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1和pBaBE-puro,共转染正常成人骨髓间充质干细胞(hMSCs),使frc和oxc基因在hMSCs中稳定表。方法:以本实验室保存的OXF基因组为模板,PCR法扩增出frc和ox... 目的:将产甲酸草酸杆菌(OXF)草酸分解基因frc和oxc分别克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1和pBaBE-puro,共转染正常成人骨髓间充质干细胞(hMSCs),使frc和oxc基因在hMSCs中稳定表。方法:以本实验室保存的OXF基因组为模板,PCR法扩增出frc和oxc基因的编码序列,采用逆转录病毒载体将frc和oxc导入hMSCs中,Q-PCR和Western blot检测其表达。结果:重组载体pLEGFP-N1-myc-frc、pBaBE-puro-flag-oxc构建成功;并检测出frc和oxc基因在hMSCs中的稳定表达。结论:逆转录病毒载体介导的frc和oxc能成功转染hMSCs,能为以后体外诱导分化为肝细胞,治疗内源性高草酸尿奠定基础,为下一步的实验提供原材料。 展开更多
关键词 草酸尿 产甲酸草酸杆菌 骨髓间充质干细胞 逆转录病毒载体
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产甲酸草酸杆菌oxc基因的克隆及其蛋白结构预测
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作者 张宇霞 李儒 吴润 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第3期1-7,共7页
参考GenBank中已公布的产甲酸草酸杆菌(Oxalobacter formigenes,OxB)的参考序列(M77128)设计了一对扩增OXC酶蛋白基因的引物,对产甲酸草酸杆菌(ATCC 35274)的DNA抽提物进行扩增,获得了特异性的扩增片段.运用Lnternet网络上的数据库及程... 参考GenBank中已公布的产甲酸草酸杆菌(Oxalobacter formigenes,OxB)的参考序列(M77128)设计了一对扩增OXC酶蛋白基因的引物,对产甲酸草酸杆菌(ATCC 35274)的DNA抽提物进行扩增,获得了特异性的扩增片段.运用Lnternet网络上的数据库及程序,对OXC酶蛋白的理化性质、结构和功能进行生物信息学分析.结果显示克隆序列与参考序列的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列的同源性达到99.9%和99.6%,预测该酶蛋白是分泌到胞外行使生物学功能的胞外酶,具有良好的抗原性和亲水性,二级结构是以α-螺旋为主的混合型蛋白而且其二级结构预测显示OXC酶蛋白属于硫胺素焦磷酸依赖酶家族,和其它酶家族成员一样能够发挥降解草酸的功能. 展开更多
关键词 产甲酸草酸杆菌 草酰辅酶A脱羧酶 oxc基因 克隆 序列分析 结构预测
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肠道菌群对草酸钙结石的影响 被引量:8
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作者 王超 董旭 +1 位作者 尹新玮 周逢海 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1285-1289,共5页
肾结石是泌尿系统常见疾病之一,其中约80%的肾结石主要由草酸钙组成。肠道菌群作为一个庞大的细菌网络,其相互作用是复杂的。肠道微生物组可能在肾结石的发病机制和预防中起重要作用。草酸钙结石患者肠道菌群有其独特分布。产甲酸草酸... 肾结石是泌尿系统常见疾病之一,其中约80%的肾结石主要由草酸钙组成。肠道菌群作为一个庞大的细菌网络,其相互作用是复杂的。肠道微生物组可能在肾结石的发病机制和预防中起重要作用。草酸钙结石患者肠道菌群有其独特分布。产甲酸草酸杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌和雷氏普罗威登斯菌等菌群与草酸钙结石有密切的关系,这为泌尿系结石的防治提供了新思路。 展开更多
关键词 肠道菌群 泌尿系结石 草酸钙结石 产甲酸草酸杆菌 益生菌
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