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产琥珀酸丝状杆菌1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 被引量:6
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作者 杨玉霞 张慧玲 +1 位作者 汪艳 陈勇 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期123-130,共8页
为实现瘤胃细菌产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因(FsGLU)的高效表达,开发新的饲用β-葡聚糖酶资源,根据毕赤酵母对密码子的偏爱性、G+C含量等特点,对FsGLU基因进行密码子优化,然后合成优化后的1... 为实现瘤胃细菌产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因(FsGLU)的高效表达,开发新的饲用β-葡聚糖酶资源,根据毕赤酵母对密码子的偏爱性、G+C含量等特点,对FsGLU基因进行密码子优化,然后合成优化后的1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因(FsGLUm),转化毕赤酵母GS115,以甲醇诱导表达并对重组FsGLUm的酶学特性、底物特异性和对消化酶的耐受性进行了研究。结果表明:摇瓶水平条件下,以甲醇诱导表达48 h时,重组FsGLUm酶活性提高25.1%(P〈0.05)。在10 L发酵罐中诱导96 h后,重组FsGLUm的活性为6 424 U·mL-1,菌体湿质量和干质量达到274.6和123.6 g·L-1。酶学特性分析表明:纯化后的重组FsGLUm最适反应温度为37℃,最适反应pH值为5.0,比活性为10 397 U·mg-1。在温度低于37℃、pH 5.0~6.5时该酶具有较好的稳定性。底物特异性分析表明:重组FsGLUm可水解大麦β-葡聚糖和地衣多糖,不降解燕麦木聚糖、桦木木聚糖和羧甲基纤维素钠。在胃蛋白酶和胰蛋白酶共同作用60 min后,仍保留了50.5%的酶活性。结论:FsGLU基因在毕赤酵母GS115中实现了高效表达,重组FsGLUm作为饲用酶制剂具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 产琥珀酸丝状杆菌 1 3-1 4-β-葡聚糖酶基因 毕赤酵母 基因表达 酶学性质
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瘤胃中产琥珀酸丝状杆菌的纤维素降解机制及其在秸秆饲料化中的应用 被引量:5
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作者 王喜凤 李海峰 屈建航 《饲料研究》 CAS 北大核心 2023年第5期126-130,共5页
我国是农作物秸秆生产大国,农作物秸秆资源饲料化有助于缓解我国畜牧业饲料原料不足和秸秆类废弃物污染问题。秸秆中纤维素含量约为30%~40%,致使动物对秸秆消化速率减慢,成为秸秆饲料化的难点。动物瘤胃中分离的产琥珀酸丝状杆菌(Fibrob... 我国是农作物秸秆生产大国,农作物秸秆资源饲料化有助于缓解我国畜牧业饲料原料不足和秸秆类废弃物污染问题。秸秆中纤维素含量约为30%~40%,致使动物对秸秆消化速率减慢,成为秸秆饲料化的难点。动物瘤胃中分离的产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)能够高效降解纤维素,其采用不同于游离纤维素酶降解机制和纤维小体降解机制的第三种纤维素降解机制。文章综述了产琥珀酸丝状杆菌纤维素降解机制的研究进展,为产琥珀酸丝状杆菌在秸秆饲料化中的应用提供参考。 展开更多
关键词 纤维素 秸秆饲料化 产琥珀酸丝状杆菌
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纤维素结合域的酿酒酵母表面展示及其黏附位点初探 被引量:1
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作者 张玉杰 王佳堃 +1 位作者 叶均安 刘建新 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期976-982,共7页
利用酿酒酵母表面展示系统表达产琥珀酸丝状杆菌S85纤维素结合域家族2(CBD2),分析其纤维黏附位点。将CBD2基因插入质粒pYD1的AGA2 3′端,构建pMCBD2重组质粒,化学转化pMCBD2至酿酒酵母EBY100中,2%半乳糖诱导CBD2表达于酿酒酵母表面。利... 利用酿酒酵母表面展示系统表达产琥珀酸丝状杆菌S85纤维素结合域家族2(CBD2),分析其纤维黏附位点。将CBD2基因插入质粒pYD1的AGA2 3′端,构建pMCBD2重组质粒,化学转化pMCBD2至酿酒酵母EBY100中,2%半乳糖诱导CBD2表达于酿酒酵母表面。利用免疫组化技术检测重组酵母细胞在稻草茎细胞壁上的黏附位点。结果表明:利用酿酒酵母表面展示系统可成功表达产琥珀酸丝状杆菌S85的CBD2基因;重组CBD2的pMCBD2-EBY100与稻草茎孵育后,经抗V5异硫氰酸荧光素标记抗体处理可在稻草茎的薄壁、厚壁和维管组织均检测到荧光。产琥珀酸丝状杆菌S85的CBD2黏附稻草多个组织。结果提示:酿酒酵母表面展示技术与免疫组化技术联用研究瘤胃细菌CBD的黏附位点是可行的。 展开更多
关键词 纤维素结合域 酵母表面展示系统 黏附位点 产琥珀酸丝状杆菌
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毕赤酵母不同甲醇利用表型Mut^+和Mut^s表达FsGLUm基因的比较
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作者 杨玉霞 罗艳丽 +3 位作者 张慧玲 汪艳 陈勇 裴建华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期220-224,239,共6页
将来源于产琥珀酸丝状杆菌的β-葡聚糖酶基因根据毕赤酵母的偏好性进行密码子优化,通过全基因合成该优化基因(Fs GLUm)并构建重组表达载体p PIC9K-Fs GLUm。将p PIC9K-Fs GLUm分别用SalⅠ和BglⅡ酶切线性化后电击转化入毕赤酵母GS115染... 将来源于产琥珀酸丝状杆菌的β-葡聚糖酶基因根据毕赤酵母的偏好性进行密码子优化,通过全基因合成该优化基因(Fs GLUm)并构建重组表达载体p PIC9K-Fs GLUm。将p PIC9K-Fs GLUm分别用SalⅠ和BglⅡ酶切线性化后电击转化入毕赤酵母GS115染色体DNA中,经过表型筛选和抗性筛选获得不同甲醇利用表型Mut+和Muts阳性菌株。经刚果红平板检测,在摇瓶水平下,Mut+型菌株表达产物产生的水解透明圈明显大于Muts型菌株表达产物。在发酵罐水平下,Mut+型菌株各时间段表达产物酶活性明显高于Muts型菌株。Mut+型菌株表达的酶活性在甲醇诱导96h达到最大值,为6424U/m L,比活性为2607U/mg,菌体干重为123.6g/L。Muts型菌株表达的酶活性在诱导后108h达到最大值,为119U/m L,比活性为1867U/mg,菌体干重为113.5g/L。以上结果表明,Mut+型毕赤酵母更有利于产琥珀酸丝状杆菌β-葡聚糖酶基因的表达。 展开更多
关键词 产琥珀酸丝状杆菌 Β-葡聚糖酶 毕赤酵母 甲醇利用表型
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