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产毒素多杀性巴氏杆菌菌落双重PCR检测方法的建立 被引量：6
1
作者 李伟杰 赵耘 +2 位作者 杜昕波 康凯 陈敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期298-300,共3页
为建立快速特异的PCR方法以及同时检测并区分产毒素与非产毒素多杀性巴氏杆菌,本研究根据GenBank登录的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和toxA毒素基因序列,设计合成了2对特异引物。特异性试验表明产毒素多杀性巴氏杆菌C51-6扩增出了460bp和185... 为建立快速特异的PCR方法以及同时检测并区分产毒素与非产毒素多杀性巴氏杆菌,本研究根据GenBank登录的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和toxA毒素基因序列,设计合成了2对特异引物。特异性试验表明产毒素多杀性巴氏杆菌C51-6扩增出了460bp和1854bp的2条目的片段,而不产毒素多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌和鸡白痢沙门菌的扩增均为阴性;敏感性试验表明该PCR方法能从含450CFU的菌液中扩增出相应的目的片段。同时用豚鼠皮肤坏死试验和小鼠致死试验对该PCR方法进行了验证。 展开更多
关键词 产毒素多杀性巴氏杆菌 双重PCR KMT1基因 toxA基因
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应用巢氏PCR方法快速检测猪鼻拭子样品中产毒素多杀性巴氏杆菌 被引量：5
2
作者 汤细彪 吴斌 +4 位作者 刘国平 杨明柳 罗勇 卢顺 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1083-1087,共5页
根据产毒素多杀性巴氏杆菌的toxA基因序列,设计了2对特异性引物,扩增的片段大小分别为864和447 bp,从而建立了一种能直接从猪鼻拭子中快速检测产毒素多杀性巴氏杆菌的巢氏PCR方法。该方法能检出26CFU菌量以上的模板DNA,且不能从猪的其它... 根据产毒素多杀性巴氏杆菌的toxA基因序列,设计了2对特异性引物,扩增的片段大小分别为864和447 bp,从而建立了一种能直接从猪鼻拭子中快速检测产毒素多杀性巴氏杆菌的巢氏PCR方法。该方法能检出26CFU菌量以上的模板DNA,且不能从猪的其它7种常见病原菌扩增到特异性条带。通过对5个不同地区阳性猪群中采集的146份临床鼻拭子样品进行巢氏PCR检测和细菌分离鉴定,结果2种方法同时为阳性的样品有44份,同时为阴性的样品有97份,另有5份样品只有巢氏PCR检测为阳性,巢氏PCR检测与细菌分离鉴定的符合率为96.58%。试验表明:巢氏PCR方法能快速、灵敏地从猪鼻拭子样品中检出产毒素多杀性巴氏杆菌,适合临床进行大规模病原学检测,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 产毒素多杀性巴氏杆菌 toxA 鼻拭子 巢氏PCR
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产毒素多杀性巴氏杆菌的鉴定 被引量：2
3
作者 李伟杰 赵耘 +2 位作者 杜昕波 康凯 陈敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第1期149-151,共3页
采用菌落多重PCR方法对分离保存的28株多杀性巴氏杆菌进行种型和毒素基因的检测,结果表明,菌株C51-6、M-4和P-2237为产毒素多杀性巴氏杆菌,菌株C51-6和P-2237为荚膜血清D型,菌株M-4为荚膜血清A型。同时用金黄色葡萄球菌抑制试验、中性... 采用菌落多重PCR方法对分离保存的28株多杀性巴氏杆菌进行种型和毒素基因的检测,结果表明,菌株C51-6、M-4和P-2237为产毒素多杀性巴氏杆菌,菌株C51-6和P-2237为荚膜血清D型,菌株M-4为荚膜血清A型。同时用金黄色葡萄球菌抑制试验、中性吖啶黄沉淀试验和豚鼠皮肤坏死试验对PCR方法进行了验证。基于对甘露醇、卫茅醇、山梨醇、海藻糖的发酵能力和产生鸟氨酸脱羧酶的特性,3株菌株鉴定为多杀性巴氏杆菌多杀亚种。 展开更多
关键词 产毒素多杀性巴氏杆菌 多重PCR 皮肤坏死毒素
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福建省产毒素多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及致病性研究 被引量：3
4
作者 饶秋华 刘洋 +2 位作者 周伦江 罗土炎 王隆柏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1174-1177,共4页
为探究2019年4月引起福建省南平市某猪场的育肥猪出现鼻塞、流鼻涕、呼吸时伴有鼾声、鼻梁弯曲变形等症状的病原,本研究通过采集30份发病猪的鼻腔拭子进行细菌分离纯化、鉴定以及采用特异性PCR对分离菌分型鉴定,同时分析其致病性。结果... 为探究2019年4月引起福建省南平市某猪场的育肥猪出现鼻塞、流鼻涕、呼吸时伴有鼾声、鼻梁弯曲变形等症状的病原,本研究通过采集30份发病猪的鼻腔拭子进行细菌分离纯化、鉴定以及采用特异性PCR对分离菌分型鉴定,同时分析其致病性。结果显示,从鼻腔拭子中分离出28株多杀性巴氏杆菌(Pm),分型PCR鉴定结果显示27株分离菌为荚膜D型产毒素多杀性巴氏杆菌(T^+Pm),1株分离菌为荚膜A型Pm,表明D型T+Pm为该次致猪发病的主要病原菌;利用特异性PCR方法对Pm进行脂多糖(LPS)基因型检测,鉴定结果显示该猪群感染的Pm LPS基因型全部为L6型;致病性实验结果显示该菌株能导致二元长白猪的肺脏呈熟肉样病变,病理组织切片显示有轻度水肿,少量炎性细胞浸润,伴少量散在出血。本研究获得的T+Pm对二元长白猪具有明显的致病性,为今后深入开展T+Pm致病机理、流行病学调查和防控技术的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 萎缩性鼻炎 产毒素多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 致病性
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猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达
5
作者 黄百花 刘文娟 +5 位作者 李志勇 谭春萍 周松峰 谭颖翌 罗佳 陆芹章 《广西农业科学》 CAS CSCD 2010年第6期598-601,共4页
根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克... 根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。 展开更多
关键词 猪D型产毒素多杀巴氏杆菌 毒素基因 分段 原核表达
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猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因的克隆与表达研究
6
作者 钱坤 《畜禽业》 2019年第11期27-27,共1页
多杀性巴氏杆菌可以直接引起猪肺疫、禽霍乱、牛出血性败血症、猪萎缩性鼻炎等病症,对养殖业影响非常大。据调查研究显示,皮肤坏死外毒素是产毒素多杀性巴氏杆菌的重要因此和保护性抗原。基于此,重点研究猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌tox... 多杀性巴氏杆菌可以直接引起猪肺疫、禽霍乱、牛出血性败血症、猪萎缩性鼻炎等病症,对养殖业影响非常大。据调查研究显示,皮肤坏死外毒素是产毒素多杀性巴氏杆菌的重要因此和保护性抗原。基于此,重点研究猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因克隆与表达。 展开更多
关键词 猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌 toxA基因 克隆
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猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素基因的原核表达 被引量：1
7
作者 江涛 谭春萍 +3 位作者 任灵芝 黄百花 刘文娟 陆芹章 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期64-68,共5页
参照GenBank收录的产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(AF240778),设计一对引物,从猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3 858 bp的片段,将其克隆至原核表达载体PET-32a,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行融合表达多杀性巴氏杆菌... 参照GenBank收录的产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(AF240778),设计一对引物,从猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3 858 bp的片段,将其克隆至原核表达载体PET-32a,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行融合表达多杀性巴氏杆菌毒素。SDS-PAGE和Western blot分析证实,该表达产物以包涵体形式存在,大小约175 ku。动物试验结果表明,重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性。通过间接ELISA方法检测抗毒素的猪阳性血清,表达重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性,为多杀性巴氏杆菌毒素进一步应用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪源D-型产毒素多杀巴氏杆菌 毒素基因 原核表达
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产毒素多杀性巴氏杆菌为猪萎缩性鼻炎的病原菌
8
作者 梁媛 王建林 马琳 《畜禽业》 2007年第9期46-46,共1页
广西大学动物科学技术学院梁媛等，为了解猪萎鼻的流行情况，从广西的5个规模化猪场采集了266份断奶仔猪的鼻拭子，用常规的细菌分离方法与生化鉴定得到80株多杀性巴性氏杆菌．药敏试验结果表明，这些菌株对大多数抗生素中度敏感．用豚... 广西大学动物科学技术学院梁媛等，为了解猪萎鼻的流行情况，从广西的5个规模化猪场采集了266份断奶仔猪的鼻拭子，用常规的细菌分离方法与生化鉴定得到80株多杀性巴性氏杆菌．药敏试验结果表明，这些菌株对大多数抗生素中度敏感．用豚鼠皮肤坏死试检、小鼠致死试验及PCR检测确定80株中有9株为产毒素多杀性巴氏杆菌，亦即为猪萎缩性鼻炎的病原菌。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 萎缩性鼻炎 断奶仔猪 病原菌 毒素 广西大学 规模化猪场 PCR检测
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多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)保护性抗原片段的筛选及免疫效果的评估
9
作者 庞碧寒 姚文敬 +4 位作者 王怡涤 关丽君 薛云 张俊峰 赵战勤 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期278-285,共8页
为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核... 为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核表达系统表达这8个片段,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化各重组蛋白,经SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果后,通过Image J软件计算各重组蛋白的表达量,进一步采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,分别获得了34 ku、62 ku、67 ku、70 ku、64 ku、102 ku、36 ku、60 ku的重组蛋白,其中rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5和rPMT-C7以可溶性和包涵体两种形式表达,另外4个重组蛋白均以包涵体形式表达,纯化后在上述各位置处分别出现较单一的目的条带,且各蛋白的表达量占菌体总蛋白的8.44%~35.77%。Western blot结果显示,8个重组蛋白均可与猪源T+Pm TPM-6株的猪阳性血清发生特异性反应,均具有一定的反应原性,其中rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5的反应原性较强。基于此,采用ISA201佐剂制备这4种重组蛋白的亚单位疫苗,间隔20 d对小鼠经皮下注射免疫(50μg/只)两次,观察并记录各组小鼠的临床症状及死亡数,评估该疫苗对小鼠的安全性。首免后35 d(二免后14 d)对各组小鼠分别以10 LD_(100)和30 LD_(100)的天然粗提PMT(cPMT)对小鼠攻毒,评估4种亚单位疫苗(rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b及rPMT-C5)对小鼠的免疫保护效力。安全性试验结果显示,免疫后21 d rPMT-N2a组小鼠的死亡率为2/24,rPMT-N2b组小鼠的死亡率为6/24,其余各组小鼠均无异常。ELISA结果显示,二免后各疫苗组小鼠的几何平均抗体效价分别升至1:1552、1:18820、1:1351和1:6208,表明各重组蛋白均能诱导免疫小鼠产生良好的体液免疫反应。攻毒结果显示,对照组小鼠在两种剂量的cPMT攻毒后均出现相应症状并均在24h内全部死亡,部分亚单位疫苗免疫组小鼠也出现不同程度的发病及死亡,但发病及死亡时间较对照组延长。以10LD_(100)的cPMT攻毒后,上述各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为87.5%、100%、37.5%和100%;以30 LD_(100)的cPMT攻毒后,各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为50%、85.7%、0和75%。本研究表明,rPMT-N2a、rPMT-C5具有作为T+Pm亚单位疫苗优势保护性抗原的潜力,该结果为后期T+Pm亚单位疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 toxA 多杀性巴氏杆菌毒素 重组蛋白 亚单位疫苗
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猪产毒多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的细胞毒性及其抗体的制备 被引量：3
10
作者 胡军勇 汤金梅 +4 位作者 汤细彪 杨明柳 赵战勤 吴斌 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期479-483,共5页
将猪产毒多杀性巴氏杆菌(toxigenicPasteurella multocida,T+Pm)增菌后经超声波破碎,用DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-200处理,提纯天然多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素(Pasteurella multocidatoxin,PMT)。经Western blot和细胞毒性试验... 将猪产毒多杀性巴氏杆菌(toxigenicPasteurella multocida,T+Pm)增菌后经超声波破碎,用DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-200处理,提纯天然多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素(Pasteurella multocidatoxin,PMT)。经Western blot和细胞毒性试验证实,该毒素具有良好的反应原性,且7 ng/mL的PMT能使Vero细胞病变。用该毒素制成的类毒素菌苗免疫2头健康断奶仔猪,同时设T+Pm灭活苗和PBS对照组。4次免疫后,琼脂扩散试验检测类毒素菌苗组毒素抗体效价达1∶16,而灭活苗组未见毒素抗体产生。用200μg提纯的PMT和50亿T+Pm混合液经耳静脉攻毒各组试验猪,结果发现对照组和灭活苗组试验猪在攻毒后出现明显的急性败血症状,未产生毒素抗体;类毒素菌苗组试验猪10 d后耐过,经颈动脉采血收集高免血清,效价达1∶32。 展开更多
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素 生物学活性 类毒素菌苗 毒素抗体
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自萎缩性鼻炎病猪鼻腔分离的产毒素多杀巴氏杆菌培养滤液的毒性测定
11
作者 张树成 苑士祥 +3 位作者 杨留战 杨旭夫 赵淑春 彭发泉 《中国畜禽传染病》 CSCD 1990年第5期47-49,共3页
在萎缩性鼻炎病猪鼻腔分离的产毒素多杀巴氏杆菌培养滤过液中豚鼠皮肤坏死毒素的含量随培养时间的延长而增加,15个我国分离株滤过液含毒量一般在8GPST 单位/0.1ml 以上,最强的菌株达到32GPST 单位/0,1ml;强毒性菌株滤过液在1∶32稀释时... 在萎缩性鼻炎病猪鼻腔分离的产毒素多杀巴氏杆菌培养滤过液中豚鼠皮肤坏死毒素的含量随培养时间的延长而增加,15个我国分离株滤过液含毒量一般在8GPST 单位/0.1ml 以上,最强的菌株达到32GPST 单位/0,1ml;强毒性菌株滤过液在1∶32稀释时,经腹腔注射能使小鼠全部致死;滤过液肌肉和皮下注射断奶仔猪,均可致轻度至严重的鼻甲骨萎缩,滴鼻则不引起肉眼可见的鼻甲骨病变。 展开更多
关键词 猪 产毒素 多杀氏杆菌 鼻炎 毒性
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多杀性巴氏杆菌毒素中保护性抗原肽的筛选 被引量：4
12
作者 王怡涤 庞碧寒 +4 位作者 宋吉健 关丽君 薛云 司丽芳 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1279-1286,共8页
为筛选产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其编码基因toxA分为1个全长片段和7个子片段(N端2个、C端5个),设计相应引物,分别经PCR扩增后克隆至pET-28a载体中构建... 为筛选产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其编码基因toxA分为1个全长片段和7个子片段(N端2个、C端5个),设计相应引物,分别经PCR扩增后克隆至pET-28a载体中构建各重组质粒,分别利用原核表达系统,诱导表达后经SDS-PAGE和western blot检测各重组蛋白的表达情况和反应原性。SDS-PAGE结果显示,正确表达了全长蛋白rPMT,N端rPMT-N1和rPMT-N2,以及C端rPMT-C3~rPMT-C7共8个重组蛋白;各蛋白的表达量占菌体总蛋白的6.29%~33.74%,其中rPMT以可溶性形式表达,rPMT-C5以可溶性和包涵体两种形式表达,其他6个重组蛋白均以包涵体形式表达。Western blot结果显示,8个重组蛋白均具有一定的反应原性,其中PMT C端的重组蛋白rPMT-C3、rPMT-C4、rPMT-C6和rPMT-C7的反应原性较强。因此,分别制备上述PMT C端4个重组蛋白的ISA 201佐剂疫苗,分别对小鼠进行2次免疫,并分别在小鼠首免前和二免后14 d采血、分离血清,通过rPMT-ELISA方法检测各组小鼠的抗体水平;分别以4个不同致死剂量(LD100)的天然PMT对各组小鼠进行腹腔攻毒,统计各重组蛋白制备的亚单位疫苗对小鼠的攻毒保护率。rPMT-ELISA结果显示,二免后各重组蛋白免疫组小鼠的几何平均抗体效价分别为1∶445、1∶37、1∶73和1∶256。攻毒试验结果显示,ISA201佐剂对照组和PBS对照组小鼠均于攻毒后24 h内全部死亡;rPMT-C6疫苗的保护效力最强,4个攻毒剂量对小鼠的免疫保护率均为100%(4/4);其次是rPMT-C7疫苗,除最高剂量(56 LD100)攻毒组死亡1只小鼠外,其他组小鼠均全部存活;rPMT-C3和rPMT-C4疫苗的保护力较弱,在3 LD100和15 LD100攻毒剂量时对小鼠的保护率均为100%,在30 LD100和56 LD100攻毒剂量时对小鼠的保护率分别为25%(1/4)和0。本研究经原核系统表达了PMT全长片段及7个子片段(N端2个、C端5个),首次证实PMT C端重组蛋白rPMT-C6和rPMT-C7具有作为亚单位疫苗保护性抗原的潜力,该结果为T+Pm亚单位疫苗的研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 产毒素多杀性巴氏杆菌 toxA 多杀性巴氏杆菌毒素 表达 保护效力
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产毒多杀性巴氏杆菌研究进展 被引量：9
13
作者 唐先春 吴斌 陈焕春 《动物医学进展》 CSCD 2003年第5期14-16,共3页
产毒多杀性巴氏杆菌 (T+ Pm)是引起猪传染性萎缩性鼻炎的主要病原菌。对 T+ Pm的检出及高效疫苗的研制是根除猪传染性萎缩性鼻炎的关键。产毒多杀性巴氏杆菌毒素是一种皮肤坏死毒素 ,也是一种活性很强的有丝分裂原 ,单独就可引起细胞 DN... 产毒多杀性巴氏杆菌 (T+ Pm)是引起猪传染性萎缩性鼻炎的主要病原菌。对 T+ Pm的检出及高效疫苗的研制是根除猪传染性萎缩性鼻炎的关键。产毒多杀性巴氏杆菌毒素是一种皮肤坏死毒素 ,也是一种活性很强的有丝分裂原 ,单独就可引起细胞 DNA的合成及分裂。基于此毒素的特性 ,已经建立了诸如豚鼠皮肤坏死实验、小鼠致死实验、细胞促生长实验、胎牛肺细胞毒性实验、EL ISA及 PCR等方法来检测产毒多杀性巴氏杆菌。随着人们对产毒多杀性巴氏杆菌毒素活性的研究 ,猪传染性萎缩性鼻炎的疫苗也逐渐向更安全、有效的毒素疫苗发展。文章主要对 T+ Pm的检测方法。 展开更多
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 猪 传染性萎缩性鼻炎 疫苗 毒素 生物学活性
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猪萎缩性鼻炎产毒多杀性巴氏杆菌的研究进展 被引量：15
14
作者 刘建杰 吴斌 陈焕春 《动物医学进展》 CSCD 2002年第1期10-13,共4页
产毒多杀性巴氏杆菌是引起猪进行性萎缩性鼻炎的一　种重要　的病原菌，对该菌的检出是根除净化此病的关键。本文对产毒多杀性巴氏杆菌的致病机理、　检测方法及其发展进行了综述，并初步探讨了猪萎缩性鼻炎疫苗的发展方向。
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 致病机理 检测方法 疫苗 猪 萎缩性鼻炎
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兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病(A型)三联浓缩灭活疫苗的研制
15
作者 徐为中 薛家宾 +1 位作者 王启明 诸玉梅 《江苏农业学报》 CSCD 2002年第1期56-59,共4页
通过对抗原的浓缩 ,试制成功兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )三联氢氧化铝浓缩灭活疫苗。将该三联疫苗按每只 1ml的剂量免疫家兔 ,2 1d后效力试验结果表明 ,对兔病毒性出血症的保护率为 10 0 % ;对兔巴氏杆菌... 通过对抗原的浓缩 ,试制成功兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )三联氢氧化铝浓缩灭活疫苗。将该三联疫苗按每只 1ml的剂量免疫家兔 ,2 1d后效力试验结果表明 ,对兔病毒性出血症的保护率为 10 0 % ;对兔巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )的保护率均达 80 %以上 ,且对上述 3种病的免疫期为 180～2 10d(即 6～ 7个月 )。该疫苗 4～ 8℃保存 15 0d(5个月 ) 展开更多
关键词 浓缩灭活疫苗 病毒性出血症 多杀性巴氏杆菌病 产气荚膜梭菌病 三联疫苗 研制
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产毒多杀性巴氏杆菌的生物学试验与ToxA基因鉴定 被引量：1
16
作者 鲍娟 《上海畜牧兽医通讯》 2013年第1期7-9,共3页
本试验基于T+Pm产生皮肤坏死毒素的生物学活性,采用豚鼠皮肤坏死试验检测Pm分离物所产毒素的特征并进行病理组织学观察;针对猪萎缩性鼻炎Pm菌株的toxA基因选择不同引物,鉴别T+Pm与T-Pm分离物。针对ToxA基因中的1230bp片段,将分离自有萎... 本试验基于T+Pm产生皮肤坏死毒素的生物学活性,采用豚鼠皮肤坏死试验检测Pm分离物所产毒素的特征并进行病理组织学观察;针对猪萎缩性鼻炎Pm菌株的toxA基因选择不同引物,鉴别T+Pm与T-Pm分离物。针对ToxA基因中的1230bp片段,将分离自有萎缩性鼻炎临床症状猪群的17株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)进行PCR扩增,其中4株Pm分离菌株确定为产毒多杀性巴氏杆菌(Toxingenic Pasteurella multocida,T+Pm),占23.53%(4/17)。本试验丰富了猪源多杀性巴氏杆菌的基因资源,在猪萎缩性鼻炎的诊断、防制和净化上具有应用价值。 展开更多
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 毒素 生物学特性 ToxA基因
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猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒素检测 被引量：14
17
作者 索绪峰 王建新 +4 位作者 姚德标 王大林 张嗣华 李碧思 王美燕 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期25-27,共3页
关键词 猪 多杀性巴氏杆菌 分离 鉴定 毒素检测 血清型
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猪多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的毒力及免疫原性研究 被引量：5
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作者 何海 郝成武 +3 位作者 张飞 候凤 张艳盟 贺笋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1306-1311,共6页
为研究致猪萎缩性鼻炎的主要病原体—多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素(PMT)的毒力及免疫原性,本研究从A型多杀性巴氏杆菌中提取、纯化该毒素后获得粗提的PMT,含量约为3 200μg/mL,纯度约2.2%;经纯化后纯度可达90%以上;将不同剂量的PMT感染小... 为研究致猪萎缩性鼻炎的主要病原体—多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素(PMT)的毒力及免疫原性,本研究从A型多杀性巴氏杆菌中提取、纯化该毒素后获得粗提的PMT,含量约为3 200μg/mL,纯度约2.2%;经纯化后纯度可达90%以上;将不同剂量的PMT感染小鼠,测定其半数致死量(MLD50),同时将不同剂量PMT感染仔猪,测定其致仔猪鼻甲骨萎缩的最小感染剂量。结果显示,纯化PMT对小鼠的MLD50为0.5μg/kg,对仔猪致鼻甲骨萎缩的最小感染剂量为0.15μg/kg。纯化PMT经甲醛灭活并加入氢氧化铝佐剂后制备类毒素疫苗,分别免疫小鼠和仔猪并测定其免疫原性;对免疫后的小鼠和仔猪攻毒,观察记录小鼠死亡情况与仔猪鼻甲骨萎缩程度,测定纯化PMT类毒素疫苗的保护效果。结果显示,采用纯化PMT免疫小鼠与仔猪,首免后28 d,血清经试剂盒检测抗体阳性率均达到100%;首免后28 d对小鼠攻毒,攻毒后7 d纯化PMT对小鼠提供的免疫保护率达到100%(10/10);首免后28 d对仔猪攻毒,攻毒后28 d纯化PMT对仔猪提供的免疫保护率达到100%(5/5)。本研究提取并纯化了PMT,虽然毒力较强但具有较好的免疫原性,为PMT的提取、纯化及制备灭活类毒素疫苗提供了实验依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素 纯化 毒力 免疫原性
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牛、羊、猪产气荚膜杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断 被引量：3
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作者 卢中华 侯安祖 +3 位作者 王自振 张红英 刘香仁 陈洪科 《河南畜牧兽医（综合版）》 1994年第2期35-38,共4页
1989年以来,在豫东、豫西南和安徽西部地区散发一种以、牛、羊猪突然死亡为主要特征的疾病,群众称之为家畜猝死症。 该病由候安祖等确诊为牛产气荚膜杆菌病。并于《中国兽医杂志》报导(1991)。在此基础上卢中华等又进行了深入研究,发现... 1989年以来,在豫东、豫西南和安徽西部地区散发一种以、牛、羊猪突然死亡为主要特征的疾病,群众称之为家畜猝死症。 该病由候安祖等确诊为牛产气荚膜杆菌病。并于《中国兽医杂志》报导(1991)。在此基础上卢中华等又进行了深入研究,发现除有产气荚膜杆菌外,尚有多杀性巴氏杆菌存在,遂称之为牛、羊、猪产气荚膜杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染。此病在我国尚属首次报导。 该病发生多为急性经过,常不见任何前驱症状而突然死亡。主要病理变化为全身实质器官及消化道急性出血、小肠阶段性坏死。病原菌的检查和分离较为困难,一般以心、肾涂片和接种于血滚培养基及百氧肝汤培养基可分离出该菌,动物实验可复制出该菌。 本病防治以预防注射为主,疫区使用魏氏梭菌与多杀性巴氏杆菌二联氢氧化铝灭活菌苗预防接种,其免疫期半年,一般每年春秋两季进行两次预防注射,能取得良好的预防效果。由于该病发病急,往往来不及治疗即告死亡,因此,药物治疗效果不佳,用土霉素治疗有一定效果。 展开更多
关键词 产气荚膜杆菌 多杀性巴氏杆菌 大杆菌 混合感染 血环 家兔 小杆菌 革兰氏阴性 预防注射 培养基
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猪多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素亚单位蛋白的制备及免疫原性研究 被引量：1
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作者 何海 郝成武 +3 位作者 凌晨 张飞 候凤 贺笋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期3396-3403,共8页
为获得针对猪萎缩性鼻炎主要病原体——多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的高免疫原性抗原,本试验构建、表达并验证该毒素的亚单位蛋白抗原,将猪多杀性巴氏杆菌毒素PMT基因与pMD19-T载体进行连接、转化,经序列分析鉴定后,分别使用Bam HⅠ、Hi... 为获得针对猪萎缩性鼻炎主要病原体——多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素的高免疫原性抗原,本试验构建、表达并验证该毒素的亚单位蛋白抗原,将猪多杀性巴氏杆菌毒素PMT基因与pMD19-T载体进行连接、转化,经序列分析鉴定后,分别使用Bam HⅠ、Hin dⅢ与BlpⅠ限制性内切酶将其酶切为3个基因片段。将片段1(Tox1)、片段2(Tox2)和片段3(Tox3)分别亚克隆至原核表达载体pET32-b、pET32-a和pET32-b中,构建3个重组表达载体。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,分别进行SDS-PAGE与Western blotting检测,并使用小鼠与豚鼠初步研究其免疫原性。结果显示,构建的3个基因片段长度分别为776、409与410 bp,与GenBank中相关序列具有高度同源性;3个蛋白片段表达正常,表达量分别达到379.95、447.62与459.82μg/mL,SDS-PAGE验证条带分别为75、77与53 ku;因3个片段位置不同,仅Tox3有Western blotting检测条带,与理论预测相符;使用3种表达蛋白免疫小鼠与豚鼠后,二免后14 d,血清经试剂盒检测阳性率达到100%,对二免后14 d小鼠攻毒保护率达到93%。本研究成功构建了PMT的3个亚单位活性片段,且具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌皮肤坏死毒素 亚单位活性片段 免疫原性
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