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产单核细胞李斯特菌溶血素的纯化 被引量:11
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作者 陈希 徐亮 +3 位作者 胡格 索占伟 许剑琴 穆祥 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期605-607,共3页
本文旨在探讨产单核细胞李斯特菌溶血素(LLO)的纯化方法。将产单核细胞李斯特菌(LM)接种于BHI液体培养基中培养,得到含LLO的培养液上清(LLO1),再经70%饱和硫酸铵沉淀、透析,得到溶血素粗提物(LLO2),LLO2经凝胶过滤层析,聚乙二醇浓缩,得... 本文旨在探讨产单核细胞李斯特菌溶血素(LLO)的纯化方法。将产单核细胞李斯特菌(LM)接种于BHI液体培养基中培养,得到含LLO的培养液上清(LLO1),再经70%饱和硫酸铵沉淀、透析,得到溶血素粗提物(LLO2),LLO2经凝胶过滤层析,聚乙二醇浓缩,得到活性峰收集液(LLO3)。通过以上三步的纯化,溶血素的比活提高160倍,纯化蛋白在SDS-PAGE中呈现一条带,达电泳级纯度。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 溶血素 纯化
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沙门菌、产单核细胞李斯特菌多重PCR检测方法的建立及应用 被引量:8
2
作者 黄金林 潘志明 +4 位作者 颜卫 朱冬冬 殷月兰 孙林 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1121-1123,共3页
目的建立沙门菌、产单核细胞李斯特菌多重PCR检测方法,提高检测效率和敏感性。方法选择沙门菌组氨酸转运操纵子基因、产单核细胞李斯特菌溶血素基因序列设计引物,在单一PCR方法基础上,建立检测两种病原菌的多重PCR技术。结果在495bp和85... 目的建立沙门菌、产单核细胞李斯特菌多重PCR检测方法,提高检测效率和敏感性。方法选择沙门菌组氨酸转运操纵子基因、产单核细胞李斯特菌溶血素基因序列设计引物,在单一PCR方法基础上,建立检测两种病原菌的多重PCR技术。结果在495bp和850bp处分别出现预期的特异性DNA扩增条带,敏感性试验显示该体系能检测出32pg的沙门菌DNA和274pg的李斯特菌DNA,样品检测表明该方法与单一PCR和国标方法的符合率达100%。结论本研究建立了能同时检测沙门菌和产单核细胞李斯特菌的多重PCR技术,为主要食源性病原菌快速检测提供了新方法。 展开更多
关键词 沙门 单核细胞李斯特 多重PCR
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产单核细胞李斯特菌溶血素基因的克隆及原核表达 被引量:4
3
作者 张衍海 白艳艳 +3 位作者 张彦明 郑增忍 张宝 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期870-874,共5页
利用PCR方法扩增产单核细胞李斯特菌(LM)的溶血素基因hlyA,获得一条大小约为1600bp的目的片段,将其与pMD18-T载体连接,经酶切、PCR鉴定,命名为pMD18-T-hlyA。测序结果显示所扩增的hlyA基因与GenBank中发表的hlyA的序列同源性为99%。利... 利用PCR方法扩增产单核细胞李斯特菌(LM)的溶血素基因hlyA,获得一条大小约为1600bp的目的片段,将其与pMD18-T载体连接,经酶切、PCR鉴定,命名为pMD18-T-hlyA。测序结果显示所扩增的hlyA基因与GenBank中发表的hlyA的序列同源性为99%。利用含有BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点引物B从pMD18-T-hlyA扩增不含信号肽序列的目的片段B,获得了大小约为1500bp的基因片段,该片段与pET32a表达载体经BamHⅠ/XhoⅠ处理后进行连接,转化BL21受菌体。通过酶切、PCR鉴定及序列测定后获得阳性pET32a-hlyA表达重组质粒,将重组菌用终浓度为0.1mmol/L的IPTG进行诱导表达,结果表明重组菌在诱导2h~3h表达量最高,融合蛋白约占菌体的40%,分子量大小约为80ku;利用LM的阳性血清进行Western blot分析,证实该融合蛋白可以被LM阳性血清所识别,为今后研制针对该蛋白的单克隆抗体和建立间接ELISA诊断方法提供了条件。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 溶血素 hlyA 克隆 表达
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产单核细胞李斯特菌的分子鉴定与亚分型研究 被引量:31
4
作者 周晓辉 焦新安 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期44-47,共4页
目的 建立产单核细胞李斯特菌的分子检测方法及其亚分型体系。方法 对LM菌株进行hly基因的PCR检测 ,并扩增其中 10株PCR检测阳性菌株的actA基因 3’末端的 82 7bp的DNA片段 ,对扩增的片段进行测序。利用遗传进化树分析软件分析。结果... 目的 建立产单核细胞李斯特菌的分子检测方法及其亚分型体系。方法 对LM菌株进行hly基因的PCR检测 ,并扩增其中 10株PCR检测阳性菌株的actA基因 3’末端的 82 7bp的DNA片段 ,对扩增的片段进行测序。利用遗传进化树分析软件分析。结果  2 4株LM的hly基因扩增均出现 85 0bp左右特异性片段 ,而非LM株未出现该特异性片段。所建立的分子亚分型方法将 10株LM归为两个遗传谱系。结论 新建立的PCR法检测LM具有较高的灵敏性与特异性 ,LM分子亚分型体系的建立为进一步研究不同LM分离株的群体遗传学、流行病学及生态学奠定了技术基础。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 分子鉴定 分子亚分型 PCR 检测
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产单核细胞增生性李斯特氏菌致病机制的研究进展 被引量:10
5
作者 萨仁高娃 胡文忠 +2 位作者 姜爱丽 马杰 冯可 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期372-376,共5页
产单核细胞增生性李斯特氏菌是一类人畜共患的食源性致病菌。本文阐述了产单核细胞增生性李斯特氏菌的生物学特性、毒力因子及流行病学,旨在为产单核细胞增生性李斯特氏菌的致病机制提供理论依据。
关键词 单核细胞增生性李斯特 生物学特性 毒力因子 流行病学
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卡博替尼抑制产单核细胞李斯特菌侵袭Caco-2细胞的机制 被引量:2
6
作者 杜蕾 曾庆 +7 位作者 何肖龙 邱嘉文 宋豪语 吴同薇 蔡丹娴 龙敏 罗军 曹虹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期226-231,共6页
目的探讨c-Met受体阻断剂卡博替尼(Cabozantinib,XL-184)能否抑制产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)进入Caco-2细胞并降低对细胞的损伤。方法通过侵袭实验研究XL-184在抑制LM进入Caco-2细胞中的作用,并研究剂量及时间与侵... 目的探讨c-Met受体阻断剂卡博替尼(Cabozantinib,XL-184)能否抑制产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)进入Caco-2细胞并降低对细胞的损伤。方法通过侵袭实验研究XL-184在抑制LM进入Caco-2细胞中的作用,并研究剂量及时间与侵袭率的关系;Caco-2细胞种植于Transwell上室,LM感染单层Caco-2细胞,然后在上室中加入辣根过氧化物酶(HRP),通过测定跨上皮细胞电阻(TEER)值及计数从上室渗透到下室的LM数量和HRP浓度,预测X-184对单层细胞通透性的保护作用;检测乳酸脱氢酶(LDH)释放水平推测细胞膜的渗透性;荧光染色鉴定细胞活性。结果相比对照组,侵袭实验显示,XL-184处理组的LM侵袭率明显降低(P=0.000),且侵袭率随XL-184浓度和作用时间的增加而显著降低,联合用药效果优于单独用药(P<0.05)。细胞通透性实验表明,XL-184可明显抑制LM诱导的跨上皮细胞电阻(TEER)的降低(P<0.05),并可降低辣根过氧化物酶和细菌介导的细胞通透性(P=0.000);细胞活性实验表明,XL-184可提高细胞存活率(P<0.01);同时,可显著降低LM诱导的LDH释放(P<0.05)。结论 XL-184可能在抑制LM侵袭Caco-2及降低LM诱导的Caco-2损伤中起重要作用。因此,XL-184有望成为潜在的治疗和预防李斯特菌感染的有效药物。 展开更多
关键词 卡博替尼 单核细胞李斯特 CACO-2细胞 侵袭 细胞通透性
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产单核细胞李斯特菌毒力因子及免疫预防研究进展 被引量:13
7
作者 王俊霞 王兴龙 秦兰柱 《动物医学进展》 CSCD 2007年第2期78-81,共4页
产单核细胞李斯特菌在病原学上已被公认为一种人兽共患病和食源性疾病的致病菌,在各国已引起食品加工部门、公共卫生部门的高度重视和研究者的兴趣。文章就该菌的毒力因子及免疫预防研究做一简述。
关键词 单核细胞李斯特 毒力因子 免疫预防
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产单核细胞李斯特菌减毒候选菌株分子生物学特性研究 被引量:1
8
作者 殷月兰 焦新安 +3 位作者 许海燕 焦红梅 潘志明 黄金林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期514-517,共4页
目的为了确定用于减毒的产单核细胞李斯特菌菌株,对初筛入选的血清型为1/2a菌株Lm1、Lm2、Lm3和Lm4的分子生物学特性进行了比较研究。方法利用PCR技术均成功地扩增出4株菌株的hly基因及actA和plcB基因片段。以LD50的测定试验作为菌株毒... 目的为了确定用于减毒的产单核细胞李斯特菌菌株,对初筛入选的血清型为1/2a菌株Lm1、Lm2、Lm3和Lm4的分子生物学特性进行了比较研究。方法利用PCR技术均成功地扩增出4株菌株的hly基因及actA和plcB基因片段。以LD50的测定试验作为菌株毒力指征,对4株菌株的毒力进行了测定。结果4株菌株均为强毒菌株,其中菌株Lm4的毒力最强,用BALB/c小鼠测得的LD50为1.47×104CFU。结论确定以Lm4作为候选菌株。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 hly ACTA plcB LD50
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产单核细胞李斯特菌plcB基因的克隆与原核表达 被引量:1
9
作者 田德斌 袁舟 +3 位作者 殷月兰 黄金林 董慧 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期652-655,共4页
目的克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因。方法利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因。采用T-A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒,BamHI、XhoI双酶切pGEM-T-plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核... 目的克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因。方法利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因。采用T-A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒,BamHI、XhoI双酶切pGEM-T-plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核表达载体,获得pGEX-6p-1-plcB重组表达质粒并在表达宿主菌BL21中诱导表达。对表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western-blotting、磷脂酶活性实验分析。结果克隆的plcB基因长834bp,与GenBank上公布的序列完全相同;表达的与GST标签蛋白融合的广谱磷脂酶C蛋白(GST-PC-PLC)具有磷脂酶生物活性和免疫原性。结论成功构建产单核细胞李斯特菌plcB基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,这为进一步研究PC-PLC蛋白的致病与免疫机理奠定了基础。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 plcB基因 广谱磷脂酶C 原核表达
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肺癌化疗后产单核细胞李斯特菌血流感染1例 被引量:3
10
作者 王珊 郭玉金 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期485-486,共2页
1临床资料 患者,女,41岁,因右肺癌于2014年7月16—23日在我院行紫杉醇联合顺铂(T P )方案化疗,出院第2天出现恶心伴呕吐,症状明显,伴右胸痛加重,于7月26日再次收入院,并给予对症止吐、止痛治疗。7月27日,患者无明显诱因出... 1临床资料 患者,女,41岁,因右肺癌于2014年7月16—23日在我院行紫杉醇联合顺铂(T P )方案化疗,出院第2天出现恶心伴呕吐,症状明显,伴右胸痛加重,于7月26日再次收入院,并给予对症止吐、止痛治疗。7月27日,患者无明显诱因出现发热,体温38.2℃,仍伴恶心呕吐,血常规示:中性粒细胞比例0.895,余正常。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 血流感染 化疗 青霉素
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山羊源产单核细胞李斯特菌的分离与鉴定 被引量:1
11
作者 马光强 刘丽娟 +3 位作者 文明 王开功 程振涛 周碧君 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期33-38,共6页
从贵州省盘县某养羊场病例组织样本中分离出1株疑似产单核细胞李斯特菌(Lm)。通过革兰染色、生化鉴定、PCR扩增hly基因、克隆、测序、序列分析及药敏试验等方法对可疑菌株进行分析鉴定。结果显示,该分离菌的培养特性、菌落形态、菌体... 从贵州省盘县某养羊场病例组织样本中分离出1株疑似产单核细胞李斯特菌(Lm)。通过革兰染色、生化鉴定、PCR扩增hly基因、克隆、测序、序列分析及药敏试验等方法对可疑菌株进行分析鉴定。结果显示,该分离菌的培养特性、菌落形态、菌体形状特征、生理生化特征均与文献报道的产单核细胞李斯特菌相同,并从该分离菌株基因组中扩增到大小约850bp的Lm的特异性DNA片段,其序列与GenBank中其他Lm地方株核苷酸同源性在39.1%~99.7%之间,其中与从发病动物分离到的加拿大、瑞士参考株同源性最高,均达到99.7%,与其他途径分离到的参考菌株同源性都很低,分子水平上进一步证实分离菌株为产单核细胞李斯特菌,且从不同途径分离的地方株hly基因差异大。研究结果为本病临床防控与治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 分离鉴定 hly基因 序列分析 山羊
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合肥市市售猪肉产单核细胞李斯特菌分离及hly基因序列分析
12
作者 李郁 焦新安 +2 位作者 魏建忠 凌英济 王桂军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期611-613,共3页
目的了解市售猪肉中产单核细胞李斯特菌(Lm)的污染状况及Lm分离菌株hly基因部分序列的分析比较。方法菌株分离鉴定应用多聚酶链反应(PCR);PCR产物直接测序,对780bp片段作序列分析。结果市售猪肉产单核细胞李斯特菌的污染率为1.17%(2/17... 目的了解市售猪肉中产单核细胞李斯特菌(Lm)的污染状况及Lm分离菌株hly基因部分序列的分析比较。方法菌株分离鉴定应用多聚酶链反应(PCR);PCR产物直接测序,对780bp片段作序列分析。结果市售猪肉产单核细胞李斯特菌的污染率为1.17%(2/170);分离菌株WLD1和FCY1与国内外14个参考菌株的同源性分别为96.4~98.6%和95.0%~97.2%,而两者之间的同源性仅为95.9%。结论合肥市市售猪肉中有一定程度产单核细胞李斯特菌的污染,且存在李斯特菌病的可能性和食物中毒的潜在危险;分离菌株WLD1和FCY1,尤其是FCY1分化程度较高,Lmhly基因核苷酸序列差异的距离与地理分布、菌株的样品来源无一定的相关性。 展开更多
关键词 市售猪肉 单核细胞李斯特 分离 hly基因 序列分析
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用四重PCR检测方法检测产单核细胞李斯特菌
13
作者 葛菲菲 徐锋 +2 位作者 邱亚峰 沈莉萍 王建 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期28-31,共4页
为了同时快速准确的检测产单核细胞李斯特菌以及是否为有毒力的产单核细胞李斯特菌,根据相关文献报道的四重PCR方法,针对该菌的种特异性基因inl A基因进行引物设计,扩增片段大小为800bp,结果应用该PCR法可特异性的扩增出目的基因片段,与... 为了同时快速准确的检测产单核细胞李斯特菌以及是否为有毒力的产单核细胞李斯特菌,根据相关文献报道的四重PCR方法,针对该菌的种特异性基因inl A基因进行引物设计,扩增片段大小为800bp,结果应用该PCR法可特异性的扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为97.3%。同时通过对毒力基因inlB,inlC和inlJ的检测用来判断菌株的相关毒力。而同一属的其他菌种无害李斯特菌(L.innocua),韦氏李斯特菌(L.welshimeri)均无特异条带,嗜水气单胞菌(J-1),产气荚膜梭菌(C57-13),大肠埃希菌(ATCC 25922),鼠伤寒沙门菌(C79-32),金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)结果均为阴性。对临床上送检的23份样品进行四重PCR方法检测并同时与国家标准GB/T22429-2008食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,均检测出7份阳性样品。并且四重PCR法表明这7份阳性样品中的产单核细胞李斯特菌均携带有3种毒力因子(inlB,inlC和inlJ),因此该四重PCR法可用于快速鉴定是否是有毒力的产单核细胞李斯特菌,为有效预防控制产单核细胞李斯特菌污染提供技术支撑。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 四重PCR 检测
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产单核细胞李斯特菌的污染状况监测
14
作者 颜卫 王禹 黄金林 《山东畜牧兽医》 2009年第10期12-13,共2页
应用PCR快速检测方法对生猪屠宰加工流通环节的产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)进行分子流行病学监测,结果表明,市场生鲜肉污染率为5%,而宰前猪毛、大肠及入冷库前猪肉样品未被污染。
关键词 单核细胞李斯特 生猪屠宰 流通 流行病学
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卡博替尼阻断小鼠体内产单核细胞李斯特菌感染的实验研究 被引量:3
15
作者 肖晴 何肖龙 +3 位作者 张文炳 罗军 龙敏 曹虹 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期56-60,共5页
目的探讨c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂卡博替尼作为抗产单核细胞李斯特菌(Lis te ria monocytoge ne s,LM)感染新型药物的可能性。方法 6周龄C57BL/6小鼠随机分为卡博替尼组、氨苄青霉素(Amp)组、卡博替尼和氨苄青霉素联合用药组和PBS对... 目的探讨c-Met受体酪氨酸激酶抑制剂卡博替尼作为抗产单核细胞李斯特菌(Lis te ria monocytoge ne s,LM)感染新型药物的可能性。方法 6周龄C57BL/6小鼠随机分为卡博替尼组、氨苄青霉素(Amp)组、卡博替尼和氨苄青霉素联合用药组和PBS对照组。腹腔注射LM菌液后,再分别灌胃给予卡博替尼20μg/g、腹腔注射氨苄青霉素20μg/g、卡博替尼和氨苄青霉素联合用药、以及腹腔注射等量PBS,比较4组小鼠的生存曲线、血液和脑组织细菌载量、血清IL-10和脑脊液中NF-κB p65含量、脑组织中依文思蓝(EB)含量以及脑组织病理变化。结果卡博替尼组比对照组小鼠生存率增高、血液和脑组织的细菌载量明显减少(P<0.05,P<0.001);血清IL-10和NF-κB p65含量显著降低(P<0.05,P<0.01);脑组织EB量降低(P<0.001),脑组织病理变化减轻。联合用药组比卡博替尼单独用药组小鼠血液和脑细菌载量(P均<0.001)、血清IL-10和NF-κB p65含量(P<0.01,P<0.001)、脑组织EB量均明显减少(P<0.001)。结论酪氨酸激酶抑制剂卡博替尼对LM感染具有阻断作用,为研发新型抗胞内感染药物提供重要理论依据。 展开更多
关键词 卡博替尼 单核细胞李斯特 C57BL/6小鼠 c-Met受体
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食品中产单核细胞李斯特菌PCR检测方法的建立 被引量:2
16
作者 白艳艳 张彦明 +3 位作者 郑增忍 张衍海 龚振华 张宝 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第1期29-30,45,共3页
根据产单核细胞李斯特菌hlyA基因设计引物,进行PCR扩增,检测该方法的特异性和灵敏度。人工污染样品经Half-fraser和Fraser增菌后进行PCR检测。结果表明,产单核细胞李斯特菌扩增出234bp的条带,对照菌未扩增出目的条带。该方法的灵敏度为1... 根据产单核细胞李斯特菌hlyA基因设计引物,进行PCR扩增,检测该方法的特异性和灵敏度。人工污染样品经Half-fraser和Fraser增菌后进行PCR检测。结果表明,产单核细胞李斯特菌扩增出234bp的条带,对照菌未扩增出目的条带。该方法的灵敏度为104cfu/mL。人工污染样品的检出限为8cfu/25g,说明PCR方法检测食品中产单核细胞李斯特菌具有快速、特异、敏感等特点,具有较高的实用价值。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 PCR 检测
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免疫功能正常的儿童产单核细胞李斯特菌脑膜炎3例并文献复习 被引量:4
17
作者 高慧 周明明 +2 位作者 刘娟娟 池丹 沈红强 《海南医学院学报》 CAS 2020年第9期708-711,共4页
目的:总结3例免疫功能正常儿童产单核李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)脑膜炎的临床特征和抗生素治疗效果,提高对该疾病的认知。方法:回顾性分析2016年1月~2019年5月浙江大学医学院附属儿童医院收治的3例免疫功能正常的儿童李斯特... 目的:总结3例免疫功能正常儿童产单核李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)脑膜炎的临床特征和抗生素治疗效果,提高对该疾病的认知。方法:回顾性分析2016年1月~2019年5月浙江大学医学院附属儿童医院收治的3例免疫功能正常的儿童李斯特菌脑膜炎患儿的临床特征和治疗方案,并进行相关文献复习,对比分析国内儿童Lm脑膜炎病例报道中抗生素使用情况。结果:患儿均有发热、呕吐等症状,脑脊液细胞学为典型化脓性脑膜炎表现,治疗上对头孢类药物不敏感,氨苄西林仍然作为首选药,美罗培南和利奈唑胺可作为临床选择用药。结论:对于脑膜炎患儿,经验性抗感染治疗无效时,需考虑Lm脑膜炎的可能,及时开展可有效覆盖李斯特菌的抗生素治疗。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 脑膜炎 儿童
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产单核细胞李斯特菌溶血素O单克隆抗体的制备与鉴定
18
作者 孔德壮 张衍海 +4 位作者 龚振华 李葳 郑增忍 李玉清 张彦明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第7期39-43,共5页
【目的】制备抗产单核细胞李斯特菌溶血素O(LLO)的特异性单克隆抗体。【方法】用LLO重折叠的原核表达产物LLO-his免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞,与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选、多克隆及单克隆分离出阳性细胞株后,再... 【目的】制备抗产单核细胞李斯特菌溶血素O(LLO)的特异性单克隆抗体。【方法】用LLO重折叠的原核表达产物LLO-his免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞,与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选、多克隆及单克隆分离出阳性细胞株后,再用体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定其效价及相对亲和常数;用HBT单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定抗体亚型;常规方法制备染色体,观察细胞株染色体数目及标志染色体;Western blot检测抗体的特异性。【结果】获得了2株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为3F5-G3和2B4-C8,其腹水效价分别为1∶(1×105)和1∶(1×107);染色体分别为97±5和93±8条,且观察到标志染色体;相对亲和常数分别为0.49和0.26μg/mL;抗体亚类均为IgG1,轻链均为κ链。特异性鉴定结果表明,2种单克隆抗体均可与LLO蛋白发生特异性反应,而与载体蛋白不发生反应。【结论】获得了抗LLO的特异性单克隆抗体。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 李斯特溶血素O 单克隆抗体
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绵羊产单核细胞李斯特菌的分离及鉴定
19
作者 张杰 李辉 +3 位作者 孙晓林 骆学农 郑亚东 伏小平 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第2期22-25,共4页
采用生化反应、溶血试验、致病力试验等常规方法对从疑似产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)患病羊脑组织分离的病原作了初步鉴定.通过PCR扩增hlyA基因部分保守序列,测序证实其与已报道的核苷酸序列的同源性达到100%,从而... 采用生化反应、溶血试验、致病力试验等常规方法对从疑似产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)患病羊脑组织分离的病原作了初步鉴定.通过PCR扩增hlyA基因部分保守序列,测序证实其与已报道的核苷酸序列的同源性达到100%,从而确诊该菌为产单核细胞李斯特菌. 展开更多
关键词 绵羊 单核细胞李斯特 PCR鉴定
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围产期母婴李斯特菌病13例临床分析 被引量:29
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作者 贾忠兰 许丽风 +1 位作者 王青 高志慧 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期33-40,共8页
目的探讨围产期孕产妇及新生儿感染李斯特菌病的临床特征、治疗和预后,提高临床对该病的认识和重视,做到早预防、早诊断、早治疗,降低新生儿的发病率和死亡率。方法回顾性分析北京市海淀区妇幼保健院2008年1月1日—2013年12月31日分娩... 目的探讨围产期孕产妇及新生儿感染李斯特菌病的临床特征、治疗和预后,提高临床对该病的认识和重视,做到早预防、早诊断、早治疗,降低新生儿的发病率和死亡率。方法回顾性分析北京市海淀区妇幼保健院2008年1月1日—2013年12月31日分娩的13例感染李斯特菌孕产妇产前、产后和对应新生儿的发病状况、临床表现、实验室指标、病情严重程度、治疗及预后的情况,结合相关文献对围产期孕产妇和新生儿李斯特菌病的临床特点进行探讨。结果 13例李斯特菌感染孕产妇患者均有临床症状,但症状不典型不特异。53.8%患者有高热症状,84.6%诉腹痛,100%引起胎儿宫内窘迫,白细胞总数(12.1×109~26.9×109/L)、中性粒细胞比率(0.650~0.898)和C反应蛋白(10.00~103.00 mg/L)都有不同程度升高;对应13例感染新生患儿均为早发感染,新生儿血流感染8例、新生儿肺炎4例、新生儿颅内出血4例、化脓性脑膜炎3例、新生儿感染性胃肠炎2例,新生儿死亡2例;感染的新生儿白细胞总数(4.7×109~27.6×109/L)、中性粒细胞比率(0.505~0.819)、血小板(79×109~280×109/L)和C反应蛋白(7.00~120.80 mg/L),单核细胞比率(0.042~0.116),白细胞总数大部分正常,少部分降低或升高,C反应蛋白和单核细胞比率多数升高,血小板部分降低。孕产妇患者预后良好,新生患儿多预后不良,有2例新生儿死亡。结论产单核细胞李斯特菌极易感染细胞免疫相对低下的孕产妇,通过母婴垂直传播感染新生儿,对新生儿造成严重的不良后果。早预防、早诊断、早治疗可有效降低新生儿发病率和病死率。最为重要的是在孕早期对孕产妇进行食品安全性宣传教育,减少妊娠期感染,是降低新生儿李斯特菌病的重要预防措施。 展开更多
关键词 单核细胞李斯特 李斯特 新生儿 感染
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