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利用交错延伸剪接PCR技术扩增油菜花粉育性基因MS2 Bnap全长cDNA序列 被引量:3
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作者 李德谋 罗小英 +3 位作者 侯磊 裴炎 方卫国 杨光伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期553-555,共3页
交错延伸剪接PCR是一种用于分子进化研究的DNA改组技术。本实验利用其原理 ,将已获得的油菜花粉育性基因MS2Bnap有部分序列重叠的三段PCR产物作为模板进行扩增 ,获得了花粉育性基因MS2Bnap的全长cD NA序列。
关键词 交错延伸剪接pcr 花粉育性基因MS2Bnap 全长CDNA序列 油菜 植物
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油茶FAD2基因全长cDNA的克隆和序列分析 被引量:39
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作者 谭晓风 陈鸿鹏 +6 位作者 张党权 曾艳玲 李魏 蒋瑶 谢禄山 胡孝义 胡芳名 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期70-75,共6页
FAD2基因控制油酸转化为亚油酸,是油茶油脂合成代谢的关键酶基因。在构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶FAD2基因的全长cDNA克隆。该基因序列长1682bp,开放阅读框为1149bp,编码382个氨基酸,并且具有FAD2... FAD2基因控制油酸转化为亚油酸,是油茶油脂合成代谢的关键酶基因。在构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶FAD2基因的全长cDNA克隆。该基因序列长1682bp,开放阅读框为1149bp,编码382个氨基酸,并且具有FAD2特有的保守序列和相关特征。经过比对分析,发现油茶的FAD2基因与其他植物的FAD2基因具有较高的相似性。 展开更多
关键词 油茶 EST文库 FAD2基因 RACE 交错延伸pcr 基因克隆
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油茶丙酮酸激酶基因全长cDNA克隆及序列分析 被引量:2
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作者 罗茜 谢禄山 +1 位作者 谭晓风 田晓明 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期85-90,共6页
丙酮酸激酶是糖酵解途径的关键酶,在油料作物脂肪酸合成中有重要作用。在实验室构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶PK基因的全长cDNA克隆。该基因序列长2 114 bp,开放读码框为1 737 bp,编码579个氨基酸,... 丙酮酸激酶是糖酵解途径的关键酶,在油料作物脂肪酸合成中有重要作用。在实验室构建的油茶EST文库基础上,采用5′RACE和交错延伸PCR技术获得了油茶PK基因的全长cDNA克隆。该基因序列长2 114 bp,开放读码框为1 737 bp,编码579个氨基酸,蛋白分子量为63 766.5 Da,分子式为C2774H4470N784O875S30,与其他植物的PK基因具有较高的相似性。PK基因系统进化树表明,油茶与蓖麻、杨树、葡萄的亲缘关系最近。 展开更多
关键词 经济林学 油茶 丙酮酸激酶基因 基因克隆 RACE 交错延伸pcr
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胡萝卜抗冻蛋白的快速大量突变及原核表达 被引量:2
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作者 张党权 谭晓风 +1 位作者 仲健 王金发 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期15-19,共5页
胡萝卜抗冻(DcAFP)具有典型的LRR特征,由约24个氨基酸残基组成重复单元,其中的保守基序是:P×××××L××L××L×LS×N×L×G×I,其中的保守天冬酰胺在与冰晶表面结合中起... 胡萝卜抗冻(DcAFP)具有典型的LRR特征,由约24个氨基酸残基组成重复单元,其中的保守基序是:P×××××L××L××L×LS×N×L×G×I,其中的保守天冬酰胺在与冰晶表面结合中起着关键的作用.为了探明该关键氨基酸对DcAFP重要性,需要对其进行一系列突变,以检测这些突变体的热滞可能发生的变化,而这需要构建大量的突变体.基于此,采用定点突变技术对该基序中保守的天冬酰胺进行了一系列的疏水性缬氨酸突变和亲水性的谷氨酰胺突变,并将这一系列突变体克隆至原核表达载体pET-11a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达与初步纯化,为后续测定其热滞活性的变化和验证天冬酰胺的重要性打下了基础. 展开更多
关键词 生物技术 胡萝卜 抗冻蛋白 定点突变 交错延伸pcr 原核表达
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