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番茄SlMYB 52基因鉴定、亚细胞定位及表达分析
1
作者 狄延翠 嵇泽琳 +8 位作者 王媛媛 娄世浩 张涛 国志信 申顺善 朴凤植 杜南山 董晓星 董韩 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第4期808-819,共12页
MYB转录因子在植物逆境应答过程中发挥着重要的调控作用。为了挖掘更多番茄(Solanum lycopersicum L.)MYB转录因子成员信息,本研究从番茄中克隆了SlMYB52基因,采用生物信息学手段对SlMYB 52基因进行基因结构、编码蛋白信息、保守结构域... MYB转录因子在植物逆境应答过程中发挥着重要的调控作用。为了挖掘更多番茄(Solanum lycopersicum L.)MYB转录因子成员信息,本研究从番茄中克隆了SlMYB52基因,采用生物信息学手段对SlMYB 52基因进行基因结构、编码蛋白信息、保守结构域、系统进化树及启动子顺式作用元件预测等的分析,利用烟草叶片瞬时转化法分析亚细胞定位,通过qRT-PCR进行组织特异性表达及响应逆境胁迫的分析。结果表明SlMYB 52基因全长1431 bp,编码253个氨基酸,预测相对分子质量为29035.22,理论等电点9.08,属于不稳定蛋白质、亲水性蛋白质;SlMYB 52所编码蛋白质不含跨膜结构,没有潜在的信号肽位点;该蛋白质二级结构以无规卷曲为主,占比59.68%;系统进化树分析显示,SlMYB52与NtMYB4a亲缘关系最近;亚细胞定位结果显示,该SlMYB52蛋白定位在细胞核;对SlMYB 52启动子分析,发现其含有大量的逆境响应元件;qRT-PCR结果表明,SlMYB 52基因在茎中表达最高,其次是叶,在顶芽中表达量最低;SlMYB 52基因的表达受高盐、低温及辣椒疫霉菌侵染的诱导,在干旱胁迫下SlMYB 52基因的表达受到明显抑制,说明该基因可能参与逆境胁迫的应答。本研究结果为进一步研究SlMYB 52基因的生物学功能及作用机制提供理论依据。 展开更多
关键词 番茄 MYB转录因子 逆境胁迫 亚细胞定位 生物信息学分析
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玉米ZmAAP基因生物信息分析及其亚细胞定位
2
作者 王宇 张铭 +3 位作者 牛晓娜 葛均筑 赵飞 吴疆 《天津农学院学报》 2025年第1期1-6,共6页
氨基酸透性酶(Amino acid permeases,AAPs)在植物转运氨基酸过程中发挥重要的调节作用,为进一步探究玉米AAP基因(ZmAPP)相关生物学功能,本研究以玉米‘B73’为材料,克隆AAP基因(ZmAPP)对其序列进行生物信息学分析,构建绿色荧光蛋白EGFP... 氨基酸透性酶(Amino acid permeases,AAPs)在植物转运氨基酸过程中发挥重要的调节作用,为进一步探究玉米AAP基因(ZmAPP)相关生物学功能,本研究以玉米‘B73’为材料,克隆AAP基因(ZmAPP)对其序列进行生物信息学分析,构建绿色荧光蛋白EGFP表达载体pCAMBIA1300-ZmAAP-EGFP,通过农杆菌介导法转化洋葱表皮,使用荧光显微镜观察基因表达情况。结果表明,玉米AAP基因c DNA序列全长为1 407 bp,编码468个氨基酸,理论等电点(pI)为8.72,不稳定系数为36.93(<40),总平均亲水性为0.487,属于碱性稳定疏水蛋白。系统进化分析表明,ZmAAP与大麦AAP基因在氨基酸水平序列亲缘关系最近。亚细胞定位结果表明,ZmAAP定位在细胞膜。本研究为后续深入研究玉米AAP基因功能以及氨基酸转运机制提供了一定的研究基础。 展开更多
关键词 玉米 ZmAAP基因 生物信息分析 亚细胞定位
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鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用
3
作者 张蓉蓉 潘爱銮 +6 位作者 吴娟 方兵兵 汪最 卢琴 张腾飞 温国元 罗青平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5470-5478,共9页
【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核... 【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 非结构蛋白 亚细胞定位 IFN-β信号通路
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橡胶树水通道蛋白HbPIP2;7的亚细胞定位与多聚化分析 被引量：2
4
作者 邹智 郑玉皎 +1 位作者 乔雪莹 阳江华 《西南林业大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2024年第1期1-6,共6页
天然橡胶在橡胶树的乳管细胞中特异性合成。用于割胶的成熟乳管与邻近的薄壁细胞之间不存在胞间连丝,故乳管的水分转入只能通过细胞膜定位的PIP水通道蛋白来实现。为探讨乳管水分平衡的分子机制,研究对1个高丰度表达的PIP基因HbPIP2;7... 天然橡胶在橡胶树的乳管细胞中特异性合成。用于割胶的成熟乳管与邻近的薄壁细胞之间不存在胞间连丝,故乳管的水分转入只能通过细胞膜定位的PIP水通道蛋白来实现。为探讨乳管水分平衡的分子机制,研究对1个高丰度表达的PIP基因HbPIP2;7进行了克隆,在此基础上对其编码蛋白的亚细胞定位和多聚化特性进行了分析。结果表明:HbPIP2;7的编码区全长837 bp,预测编码278 AA,理论分子量为29.56 kDa、等电点为9.11、不稳定系数为29.89、总平均疏水指数为0.526,含有1个保守的MIP结构域及6个典型的跨膜螺旋,预测以四聚体的形式起作用。生物信息学预测和在烟草中的亚细胞定位分析均显示,HbPIP2;7定位在细胞膜。双分子荧光互补和酵母双杂交实验均表明,HbPIP2;7不能形成同源多聚体,推测HbPIP2;7主要通过异源互作的方式参与橡胶树乳管的水分平衡。 展开更多
关键词 橡胶树 乳管 水通道蛋白 亚细胞定位 双分子荧光互补 酵母双杂交
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瓜类褪绿黄化病毒外壳蛋白的亚细胞定位及致病作用浅析
5
作者 干射香 杨柳 +3 位作者 任春梅 缪倩 程兆榜 季英华 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期240-245,共6页
瓜类褪绿黄化病毒(cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)是近些年来出现的一种烟粉虱Bemisia tabaci传播的植物病毒,在瓜类生产中造成了严重损失。为了解该病毒外壳蛋白(coat protein,CP)在病毒侵染寄主过程中的亚细胞定位和致病作用... 瓜类褪绿黄化病毒(cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)是近些年来出现的一种烟粉虱Bemisia tabaci传播的植物病毒,在瓜类生产中造成了严重损失。为了解该病毒外壳蛋白(coat protein,CP)在病毒侵染寄主过程中的亚细胞定位和致病作用,本研究以CCYV山东黄瓜分离物为研究对象,构建了荧光表达载体CP-YFP和异源表达载体pGR-CP。浸润荧光表达载体48 h后的本氏烟Nicotiana benthamiana叶片在激光共聚焦显微镜下可以观察到荧光信号在细胞质和细胞核内均有分布;浸润异源表达载体的本氏烟植株7 d后上部叶片开始显现花叶症状,13 d后顶部新叶出现严重皱缩和坏死斑点。以上结果表明CCYV CP蛋白参与了病毒对寄主的侵染过程,可能是症状形成的致病相关因子。本研究为进一步解析该病毒的致病机理提供了初步的理论支持。 展开更多
关键词 瓜类褪绿黄化病毒 外壳蛋白 亚细胞定位 致病性 异源表达
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鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析
6
作者 王圣文 张丹 +2 位作者 邬雨倩 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期137-146,共10页
载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物... 载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位
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腰果AoCDPK26基因的克隆、亚细胞定位及表达特性分析
7
作者 秦灏 黄海杰 +3 位作者 黄伟坚 张中润 夏益华 赵丽 《中国南方果树》 北大核心 2024年第6期47-56,67,共11页
CDPK基因家族在植物非生物胁迫中发挥着重要作用,为了探究腰果Anacardium occidentale L.中AoCDPK26基因的功能和表达特性,以腰果叶片为试材,通过RT-PCR扩增技术,获得AoCDPK26基因序列,利用生物信息学分析方法对其理化性质、氨基酸序列... CDPK基因家族在植物非生物胁迫中发挥着重要作用,为了探究腰果Anacardium occidentale L.中AoCDPK26基因的功能和表达特性,以腰果叶片为试材,通过RT-PCR扩增技术,获得AoCDPK26基因序列,利用生物信息学分析方法对其理化性质、氨基酸序列、蛋白质结构进行初步分析预测,利用RT-qPCR技术测定其在腰果不同组织部位、低温和不同植物生长调节剂处理后的表达特性。在烟草中构建pEGAD-35S::AoCDPK26-GFP重组载体对AoCDPK26基因进行亚细胞定位。结果表明,腰果AoCDPK26基因编码区序列含有1692 bp的开放阅读框1个,编码氨基酸564个,系统进化树分析发现该序列与开心果具有较高的亲缘关系。AoCDPK26基因在腰果的根、茎、叶、花、果梨和果仁中均有表达,其中叶片中的表达量最高。在低温胁迫下,处理5 d后叶片AoCDPK26基因的表达量达到最高,是对照表达量的38倍;用茉莉酸甲酯(MeJA)处理腰果幼苗24 h后,叶片AoCDPK26基因表达量增幅最大。在烟草组织亚细胞定位发现,AoCDPK26定位于细胞膜和细胞核中。说明腰果AoCDPK26基因可能参与低温胁迫和内源激素响应的调控。 展开更多
关键词 腰果 AoCDPK26 基因克隆 植物生长调节剂 表达量 亚细胞定位
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陆地棉GHWAT1-35基因的克隆及亚细胞定位
8
作者 马尚洁 李生梅 +4 位作者 杨涛 王红刚 赵康 庞博 高文伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1310-1317,共8页
【目的】研究陆地棉GHWAT1-35基因在棉花纤维发育过程中的作用。【方法】选用陆地棉系9花后不同时期的纤维为材料,克隆GHWAT1-35基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学、实时荧光定量(qRT-PCR)分析及亚细胞定位。【结果】该基因全长1125 ... 【目的】研究陆地棉GHWAT1-35基因在棉花纤维发育过程中的作用。【方法】选用陆地棉系9花后不同时期的纤维为材料,克隆GHWAT1-35基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学、实时荧光定量(qRT-PCR)分析及亚细胞定位。【结果】该基因全长1125 bp,编码374个氨基酸,相对分子量为40.231 kDa,理论等电点为8.74。GHWAT1-35蛋白与亚洲棉亲缘关系最近。GHWAT1-35基因在开花后15 d表达量显著升高,亚细胞定位预测表明该蛋白定位于细胞质膜上。将GHWAT1-35基因与pCAMIA1300-35S-YFP载体重组,构建融合表达载体,利用冻融法转化农杆菌,注射到烟草后观察到GHWAT1-35蛋白定位在细胞质膜上。【结论】陆地棉系9 GHWAT1-35基因在开花后15和20 DAP的表达量显著高于其他时期,pC1300∷35S-WAT-YFP融合蛋白定位于细胞质膜上。 展开更多
关键词 陆地棉 WAT1 基因克隆 生物信息学 亚细胞定位
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不同水稻品种OsVDAC8的表达模式比较与亚细胞定位分析
9
作者 蒋晓涵 覃永华 +2 位作者 刘学群 李开 王春台 《安徽农业科学》 CAS 2024年第4期81-86,共6页
[目的]研究OsVDAC8的理化性质和表达模式,为探究OsVDAC8的功能提供基础。[方法]用生物信息学分析OsVDAC8的结构特征及表达谱,然后通过定量PCR对3个不同水稻品种日本晴(NIP)、粤泰A(YTA)、粤泰B(YTB)不同发育时期的不同组织中OsVDAC8的... [目的]研究OsVDAC8的理化性质和表达模式,为探究OsVDAC8的功能提供基础。[方法]用生物信息学分析OsVDAC8的结构特征及表达谱,然后通过定量PCR对3个不同水稻品种日本晴(NIP)、粤泰A(YTA)、粤泰B(YTB)不同发育时期的不同组织中OsVDAC8的表达模式进行分析,并通过BiFC对亚细胞定位进行验证。[结果]OsVDAC8编码区全长1014 bp,编码337 aa,生物信息学分析结果显示,OsVDAC8是具有1个结构域的稳定的定位于线粒体的亲水蛋白,通过11次跨膜形成特异的桶状结构。在ATG上游含有13个与水稻生长发育及胁迫应答相关的顺式作用元件。RiceXPro和MSU Rice Genome Annotation Project水稻基因表达数据库分析结果表明,NIP中OsVDAC8在生殖生长期的茎和花序出现前后幼穗中表达水平最高,在胚乳和根中的表达量较低。对NIP、YTA、YTB 3个水稻品种中OsVDAC8的表达谱分析结果显示,OsVDAC8在3个水稻品种四叶期的叶鞘表达水平都非常高,在花粉内容物充实期都很低,但幼穗发育的不同时期3个品种中表达水平差异很大,NIP中幼穗发育的整个时期表达量比较稳定,YTB中表达量较低,而在YTA幼穗发育的中后期表达水平逐渐下降。亚细胞定位结果显示,OsVDAC8定位于线粒体,与预测结果一致。[结论]OsVDAC8在3个水稻品种中表达模式不同,YTB中整个幼穗发育过程中表达量较低,YTA幼穗发育的中后期表达水平逐渐下降,而NIP中幼穗发育的整个时期表达量都比较稳定。OsVDAC8定位于线粒体。 展开更多
关键词 水稻 OsVDAC8 表达模式 亚细胞定位
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紫花苜蓿WRKY转录因子基因的克隆与亚细胞定位 被引量：13
10
作者 陈婷婷 杨青川 +3 位作者 丁旺 康俊梅 张铁军 张新全 《草业学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期159-167,共9页
WRKY转录因子家族在植物生长发育各个阶段发挥重要作用。本研究运用电子克隆和RT-PCR结合的方法获得1个紫花苜蓿WRKY转录因子家族成员的cDNA序列,命名为MsWRKY56。该序列长1 267bp,包含1个951bp的最大开放阅读框,编码317个氨基酸;构建... WRKY转录因子家族在植物生长发育各个阶段发挥重要作用。本研究运用电子克隆和RT-PCR结合的方法获得1个紫花苜蓿WRKY转录因子家族成员的cDNA序列,命名为MsWRKY56。该序列长1 267bp,包含1个951bp的最大开放阅读框,编码317个氨基酸;构建该基因的瞬时表达载体,通过基因枪轰击洋葱表皮的方法对编码蛋白进行亚细胞定位研究,结果表明该基因编码蛋白定位于细胞核,符合转录因子的亚细胞定位特征,为进一步研究该基因编码蛋白的结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 WRKY转录因子基因 瞬时表达载体 亚细胞定位
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绿竹BoSUT2基因的分子特征与亚细胞定位 被引量：8
11
作者 高志民 杨学文 +3 位作者 彭镇华 李雪平 牟少华 马艳军 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期45-50,共6页
植物蔗糖转运蛋白(sucrose transporter,SUT)作为一种功能性蛋白,在蔗糖运输以及蔗糖特异信号感应过程中发挥着重要的生理功能。采用RT-PCR方法从绿竹中分离1个新的编码蔗糖转运蛋白基因,cDNA长1668bp,编码555个氨基酸,命名为BoSUT2(注... 植物蔗糖转运蛋白(sucrose transporter,SUT)作为一种功能性蛋白,在蔗糖运输以及蔗糖特异信号感应过程中发挥着重要的生理功能。采用RT-PCR方法从绿竹中分离1个新的编码蔗糖转运蛋白基因,cDNA长1668bp,编码555个氨基酸,命名为BoSUT2(注册号:EU247931)。序列分析表明,BoSUT2与其他单子叶植物的蔗糖转运蛋白有着较高的一致性,其中与绿竹BoSUT1一致性最高,达92.3%。编码蛋白二级结构预测分析显示,BoSUT2具有糖运转子保守域和跨膜结构域,属于膜蛋白。组织特异性表达检测表明,BoSUT2在叶片和叶鞘中的表达丰度较高且比较接近,在根中有微弱表达。将BoSUT2置于35S启动子之下,构建了含GFP的融合表达载体,并转化烟草悬浮细胞,观察结果表明,BoSUT2主要定位到细胞质膜上。 展开更多
关键词 绿竹 蔗糖转运蛋白基因 组织特异性表达 亚细胞定位
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牛支原体武威株脂蛋白P48基因的克隆、原核表达及亚细胞定位 被引量：8
12
作者 胡国明 邢小勇 +5 位作者 李娜 苏炜德 温峰琴 项海涛 胡永浩 包世俊 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期1-7,共7页
【目的】验证牛支原体P48蛋白在细胞中的位置,并为后续功能的研究奠定基础.【方法】运用Overlap PCR扩增获得点突变后的牛支原体武威分离株P48基因,并将其克隆至pGEM-T Easy,将测序正确的质粒克隆至表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒p... 【目的】验证牛支原体P48蛋白在细胞中的位置,并为后续功能的研究奠定基础.【方法】运用Overlap PCR扩增获得点突变后的牛支原体武威分离株P48基因,并将其克隆至pGEM-T Easy,将测序正确的质粒克隆至表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-P48,表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并在IPTG诱导下成功获得融合蛋白表达产物rMbP48,大小约为51ku.重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.在分离牛支原体膜蛋白的基础上应用Western-blot及间接ELISA对P48蛋白在细胞中的分布进行分析.【结果】P48蛋白主要存在于牛支原体的膜分离相.全菌免疫荧光试验进一步证实脂蛋白P48位于牛支原体的膜表面.【结论】牛支原体P48蛋白是存在于牛支原体表面的一种具有免疫原性的脂蛋白.本研究为进一步研究P48蛋白的生物学特性及建立高效的牛支原体诊断方法奠定了基础. 展开更多
关键词 牛支原体 P48 基因克隆 原核表达 亚细胞定位
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不同小白菜品种硝酸盐含量、氮代谢关键酶活性及NRT1表达和亚细胞定位 被引量：6
13
作者 李彦华 杨芸 +9 位作者 徐卫红 周鑫斌 王卫中 迟荪琳 李桃 张春来 赵婉伊 秦余丽 王正银 谢德体 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第7期78-84,共7页
采用液体培养实验研究了不同硝铵比(NO_3^-∶c(NH_4^+)分别为50∶50、75∶25和100∶0)对低硝酸盐富集品种‘香港特选奶白菜’和高硝酸盐富集品种‘揭农四号春白菜’硝酸盐含量、氮代谢关键酶活性的影响,并探讨了两个品种小白菜硝酸盐转... 采用液体培养实验研究了不同硝铵比(NO_3^-∶c(NH_4^+)分别为50∶50、75∶25和100∶0)对低硝酸盐富集品种‘香港特选奶白菜’和高硝酸盐富集品种‘揭农四号春白菜’硝酸盐含量、氮代谢关键酶活性的影响,并探讨了两个品种小白菜硝酸盐转运蛋白基因的表达和亚细胞定位。结果表明:‘香港特选奶白菜’和‘揭农四号春白菜’在硝铵比100∶0处理中,叶硝酸盐含量分别较硝铵比50∶50处理增加了13.2%和30.4%,叶柄硝酸盐含量增加了14.3%和4.9%。随着硝铵比的增加,小白菜叶片硝酸还原酶、谷氨酸合成酶活力呈降低趋势,亚硝酸还原酶活力呈上升趋势,谷氨酸脱氢酶活力呈先增加后降低趋势,且两个小白菜品种之间差异显著。低亲和硝酸盐转运蛋白(nitrate transporter,NRT)1基因NRT1在两个小白菜品种中均显著表达,且高富集硝酸盐品种"揭农四号春白菜"的表达量显著高于低富集硝酸盐品种‘香港特选奶白菜’的表达量。NRT1是一个定位于细胞膜上的低亲和NRT。 展开更多
关键词 硝铵比 硝酸盐含量 氮代谢关键酶 硝酸盐转运蛋白基因 亚细胞定位 小白菜
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泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质亚细胞定位及质谱鉴定 被引量：11
14
作者 范国强 曾辉 翟晓巧 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期83-86,175,共5页
借助胶体金免疫电镜和质谱分析技术,利用制备的专化性抗体,进行豫杂一号泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质(m24ku,pI6.8)叶片和茎尖的亚细胞定位和质谱鉴定研究。结果显示:豫杂一号泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质分布于健康苗叶片和茎尖细胞... 借助胶体金免疫电镜和质谱分析技术,利用制备的专化性抗体,进行豫杂一号泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质(m24ku,pI6.8)叶片和茎尖的亚细胞定位和质谱鉴定研究。结果显示:豫杂一号泡桐丛枝病发生特异相关蛋白质分布于健康苗叶片和茎尖细胞的细胞壁、液泡和叶绿体部位,患病幼苗叶片和茎尖细胞相同亚细胞器部位未发现该蛋白质的存在,进一步表明植原体侵染阻断了此蛋白的合成。此外,基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)分析该特异蛋白后,通过查询MSDB数据库初步断定该特异相关蛋白为水稻叶绿体分子伴侣Q6K822-ORYSA的同源蛋白。 展开更多
关键词 泡桐 丛枝病特异相关蛋白质 胶体金免疫电镜 亚细胞定位 质谱鉴定
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蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及功能预测 被引量：9
15
作者 吕爽 杨涛 +3 位作者 孙恩成 徐青元 张继凯 吴东来 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第1期1-7,共7页
蓝舌病病毒（bluetongue virus,BTV）编码4种非结构蛋白（NS1~NS4）,其中NS4是新发现的非结构蛋白。为深入探索该新型非结构蛋白的功能,本研究首先采用生物信息学分析其序列结构特征及可能的功能域,结果发现NS4蛋白的N端α-螺旋结构域... 蓝舌病病毒（bluetongue virus,BTV）编码4种非结构蛋白（NS1~NS4）,其中NS4是新发现的非结构蛋白。为深入探索该新型非结构蛋白的功能,本研究首先采用生物信息学分析其序列结构特征及可能的功能域,结果发现NS4蛋白的N端α-螺旋结构域中具有富含碱性氨基酸的核定位信号（NLS）,而C端α-螺旋结构域中具有亮氨酸拉链结构的核输出信号（NES）。为进一步证实NS4的亚细胞定位,本试验构建了表达NS4全长及其缺失突变体的重组质粒,结果显示缺失NLS的NS4重组蛋白弥散在胞浆,而缺失NES后NS4重组蛋白只定位于细胞核,表明NS4蛋白亚细胞定位具有核—胞浆穿梭过程。最后结合3D同源建模发现NS4与CCAAT增强子结合蛋白（C/EBPβ）等具有较高的同源性,据此推测NS4可能为转录调控蛋白,与DNA或其他转录因子存在相互作用。总之,本研究为NS4蛋白的功能研究提供了更多新线索和新思路,填补了BTV基础研究的空白。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 NS4蛋白 亚细胞定位 同源建模
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从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究 被引量：7
16
作者 赵佳福 段志强 +3 位作者 杨远青 嵇辛勤 王圆圆 孙成娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期1954-1960,共7页
试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌... 试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确后,转染HEK-293T细胞,36h后观察荧光,分析ApoA1蛋白在真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,从江香猪ApoA1基因与GenBank上公布的野猪序列相比,有6处发生了碱基突变,其中5处为有义突变,分别导致180位氨基酸由丙氨酸变为谷氨酸、185位氨基酸由组氨酸变为谷氨酰胺、186位氨基酸由缬氨酸变为亮氨酰胺、209位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸;PSORTⅡPrediction和荧光共定位试验结果均表明,ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质,约占总表达量的77.8%。本试验成功克隆了从江香猪ApoA1基因CDS区,且ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质中,为进一步构建ApoA1基因转基因动物模型、开展ApoA1基因与人类因肥胖引起的相关疾病关系的研究奠定基础。 展开更多
关键词 丛江香猪 ApoA1基因 pEGFP-C1载体 HEK-293T细胞 生物信息学分析 亚细胞定位
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鸡Piwi蛋白的亚细胞定位研究 被引量：4
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作者 戴爱琴 常国斌 +5 位作者 陈蓉 张颖 阴彦辉 马腾 李建超 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期15-22,共8页
通过构建2种真核表达载体比较Piwi蛋白在真核细胞中的表达部位,为进一步研究Piwi蛋白的生物学功能提供依据。采用RT-PCR方法克隆了狼山鸡睾丸组织中Piwi基因CDS,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-Piwi,... 通过构建2种真核表达载体比较Piwi蛋白在真核细胞中的表达部位,为进一步研究Piwi蛋白的生物学功能提供依据。采用RT-PCR方法克隆了狼山鸡睾丸组织中Piwi基因CDS,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-Piwi,脂质体PEI介导基因转染NIH-3T3细胞,同时构建pcDNA3.1-Piwi真核表达载体,采用细胞间接免疫荧光方法检测Piwi蛋白在NIH-3T3细胞的表达部位。结果表明,成功克隆出公鸡Piwi基因的全序列CDS,大小为2 604bp,与GenBank中预计的序列基本一致;融合表达载体pEGFP-C1-Piwi在整个细胞中都有表达;而间接免疫荧光方法检测到pcDNA3.1-Piwi载体主要在NIH-3T3细胞质中表达。Piwi蛋白主要在细胞质中表达,采用间接免疫荧光方法比EGFP报告基因法更为可靠,适合目的蛋白的亚细胞定位研究。 展开更多
关键词 Piwi蛋白 真核表达 亚细胞定位 绿色荧光蛋白 间接免疫荧光
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词袋模型在蛋白质亚细胞定位预测中的应用 被引量：5
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作者 赵南 张梁 +2 位作者 薛卫 王雄飞 任守纲 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期296-301,共6页
运用词袋模型结合传统的蛋白质特征提取算法提取蛋白质序列特征,采用K-means算法构建字典,计算获得蛋白质序列的词袋特征,最终将提取的特征值送入SVM多类分类器,对数据集中蛋白质的亚细胞位置进行预测,在一定程度上提高了亚细胞定位预... 运用词袋模型结合传统的蛋白质特征提取算法提取蛋白质序列特征,采用K-means算法构建字典,计算获得蛋白质序列的词袋特征,最终将提取的特征值送入SVM多类分类器,对数据集中蛋白质的亚细胞位置进行预测,在一定程度上提高了亚细胞定位预测的准确率。 展开更多
关键词 词袋模型 K-MEANS 支持向量机 亚细胞定位预测
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猪Prox1基因的染色体定位和亚细胞定位的研究 被引量：5
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作者 袁继红 龙欢 +1 位作者 田明芳 杨在清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期351-357,共7页
在克隆猪Prox1基因(sProx1)的基础上,对猪Prox1基因进行染色体定位分析,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物进行亚细胞水平定位。本研究将人和鼠的Prox1基因编码区在猪的ESTs数据库中进行检索,然后根据EST进行序列拼接并设计引物对猪Prox1... 在克隆猪Prox1基因(sProx1)的基础上,对猪Prox1基因进行染色体定位分析,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物进行亚细胞水平定位。本研究将人和鼠的Prox1基因编码区在猪的ESTs数据库中进行检索,然后根据EST进行序列拼接并设计引物对猪Prox1基因编码区进行克隆。通过比对人、鼠及其他物种Prox1基因第二个内含子序列,设计引物扩增猪Prox1基因部分内含子,根据克隆得到的部分内含子序列设计引物,利用猪-仓鼠体细胞辐射杂种板(IMpRH)对猪Prox1基因进行染色体定位。根据已获得的猪Prox1基因编码区序列,构建猪Prox1基因的融合绿色荧光超表达载体EGFP-Prox1,并转染猪肾PK15细胞,12h后倒置荧光显微镜观察Prox1蛋白在亚细胞内的定位。结果表明:Prox1基因定位于猪第9号染色体长臂的26区,与标记SW1651紧密连锁;构建猪Prox1基因的真核表达载体pEGFP-N1-Prox1,融合蛋白EGFP-Prox1定位于PK15细胞的细胞核中。 展开更多
关键词 猪 Prox1 染色体定位 绿色荧光融合超表达载体 亚细胞定位
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共焦荧光显微定量研究血卟啉单甲醚亚细胞定位 被引量：5
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作者 王雷 戴维德 +4 位作者 李家泽 刘凡光 顾瑛 李晓松 曾晶 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期77-79,共3页
目的 :研究血卟啉单甲醚 (HMME)在鼠肺毛细血管内皮细胞内的亚细胞定位 ;方法 :孵育时间分别为 2小时、2 4小时 ,四种荧光探针标记四种细胞器。激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)探测HMME和探针荧光图像。定性比较两种荧光分布模式 ,并定量... 目的 :研究血卟啉单甲醚 (HMME)在鼠肺毛细血管内皮细胞内的亚细胞定位 ;方法 :孵育时间分别为 2小时、2 4小时 ,四种荧光探针标记四种细胞器。激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)探测HMME和探针荧光图像。定性比较两种荧光分布模式 ,并定量计算高探针荧光区域与细胞内HMME荧光均量比I2 /I1 ;结果 :两种孵育时间下 ,HMME荧光均呈胞浆弥散分布 ,且在核周附近的高尔基体灰度较高 ,细胞核几乎无荧光分布。I2 /I1 高低顺序 2小时组 :高尔基体 >内质网 >溶酶体 线粒体 ;2 4小时组 :高尔基体 >线粒体 内质网 >溶酶体 ,且高尔基体组显著下降伴随线粒体组大幅上升 ;结论 :此定量分析方法能有效用于光敏剂亚细胞定位研究 ,对弥散分布光敏剂尤其适合 ;两种孵育时间下 ,高尔基体为HMME主要定位点 ,内质网有一定分布 ,溶酶体分布很少 ,细胞核几乎无分布 ;短孵育时间线粒体分布很少 。 展开更多
关键词 光动力疗法 血卟啉单甲醚 亚细胞定位 激光扫描共聚焦显微镜 HMME
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