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亚硫酸氢钠测序法检测水稻FIE基因CpG岛甲基化状态 被引量:6
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作者 汪艳杰 龙鸿 姚家玲 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期134-139,共6页
建立了适用于水稻基因组特定基因甲基化检测的亚硫酸氢钠测序法,并利用此方法对FIE2A基因CpG岛部分片段的甲基化差异进行了研究。采用CTAB法提取水稻叶片和胚乳细胞的基因组DNA,经亚硫酸氢钠化学修饰后,针对已修饰的FIE基因序列设计特... 建立了适用于水稻基因组特定基因甲基化检测的亚硫酸氢钠测序法,并利用此方法对FIE2A基因CpG岛部分片段的甲基化差异进行了研究。采用CTAB法提取水稻叶片和胚乳细胞的基因组DNA,经亚硫酸氢钠化学修饰后,针对已修饰的FIE基因序列设计特异引物并结合巢式PCR扩增,TA载体克隆、测序,最后对测序结果进行分析。结果表明巢式PCR能够增加特异性产物的产生,FIE基因CpG岛在对称的CG和CNG位点甲基化水平较高,而在非对称CNN位点甲基化水平最低,此外在叶片中的平均甲基化水平较高。由此表明本研究建立的亚硫酸氢钠测序法适用于水稻基因组特定基因甲基化状态的检测。 展开更多
关键词 亚硫酸氢钠 DNA甲基化 水稻 FIE基因 CPG岛
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改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态 被引量:4
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作者 张莉君 王先良 +1 位作者 孙晞 徐顺清 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期411-412,415,共3页
目的改进亚硫酸氢钠测序法,并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后Ras相关家族1A基因(RASSF1A)启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增,T-A载体克隆、测序。结... 目的改进亚硫酸氢钠测序法,并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后Ras相关家族1A基因(RASSF1A)启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增,T-A载体克隆、测序。结果HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化。结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测。 展开更多
关键词 亚硫酸氢钠 甲基化 聚合酶链反应 Ras相关家族1A基因
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表观遗传学研究方法进展 被引量:7
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作者 郑小国 陈亮 +1 位作者 楼巧君 罗利军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期63-71,共9页
表观遗传调控是基因表达调控的重要组成部分,已成为当前研究的热点。目前其研究主要集中在DNA甲基化和组蛋白修饰。针对这两种表观修饰,其研究方法也取得了较大进展,一方面方法的灵敏度和特异性都在不断提高;另一方面表观修饰的检测正... 表观遗传调控是基因表达调控的重要组成部分,已成为当前研究的热点。目前其研究主要集中在DNA甲基化和组蛋白修饰。针对这两种表观修饰,其研究方法也取得了较大进展,一方面方法的灵敏度和特异性都在不断提高;另一方面表观修饰的检测正在逐步从定性检测向定量分析方向发展,从个别位点向高通量检测发展。此外,新一代测序技术的应用将大大推动表观遗传研究的发展,包括单分子实时测序法、单分子纳米孔测序法等。综述目前常用的DNA甲基化、组蛋白修饰研究方法以及最新的单分子测序技术,并对它们在表观遗传修饰检测中的应用作了简要对比分析。 展开更多
关键词 表观遗传学 DNA甲基化 组蛋白修饰 限制性内切酶酶切 亚硫酸 染色质免疫共沉淀 单分子实时 单分子纳米孔
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食管鳞状细胞癌survivin表达与其CpG岛甲基化的研究 被引量:16
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作者 胡华梅 杨晓亚 +3 位作者 熊刚 王凯 陈雪丹 白云 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期13-15,共3页
目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)肿瘤组织survivin基因的表达与其CpG岛甲基化状态的关系。方法采用RT-PCR的方法检测ESCC细胞株、ESCC肿瘤组织及对应的远癌组织中的sur-vivin基因mRNA的表达;采用亚硫... 目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)肿瘤组织survivin基因的表达与其CpG岛甲基化状态的关系。方法采用RT-PCR的方法检测ESCC细胞株、ESCC肿瘤组织及对应的远癌组织中的sur-vivin基因mRNA的表达;采用亚硫酸氢钠修饰后测序法(BSP)检测survivin基因CpG岛甲基化状态。结果ESCC肿瘤组织survivin mRNA表达阳性率为65.5%,而绝大部分远癌组织表达阴性;20例survivin表达阳性的肿瘤组织、survivin表达阴性的远癌组织及5株ESCC细胞所扩增片段中的CpG位点均呈非甲基化状态。结论ESCC组织中survivin的表达与否与其CpG岛的甲基化状态无关,提示该区域的甲基化修饰未参与调控survivin基因的转录。 展开更多
关键词 survivin基因 食管鳞状细胞癌 甲基化 亚硫酸氢钠修饰后(bsp)
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5羟色胺转运体启动子区CpG岛甲基化与精神分裂症的相关研究 被引量:3
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作者 董燕 程宇琪 +2 位作者 徐健 许秀峰 白燕 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期631-634,共4页
目的探讨5羟色胺转运体(5-HTT)启动子区CpG岛甲基化水平与精神分裂症的相关性。方法纳入符合美国精神障碍诊断与统计手册第Ⅳ版(DSM-IV)诊断标准的首发精神分裂症患者30例和正常对照30名,采用亚硫酸氢钠测序法测定受试者的5-HTT基因启... 目的探讨5羟色胺转运体(5-HTT)启动子区CpG岛甲基化水平与精神分裂症的相关性。方法纳入符合美国精神障碍诊断与统计手册第Ⅳ版(DSM-IV)诊断标准的首发精神分裂症患者30例和正常对照30名,采用亚硫酸氢钠测序法测定受试者的5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果患者组和正常对照组间5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平的差异无统计学意义(2=0.25,P>0.05);以两组的平均年龄27岁分层后再比较,患者组和对照组相同年龄段的5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平差异亦无统计学意义(P>0.05),按性别分组后比较,患者组和对照组间的差异也无统计学意义(P>0.05)。结论本研究未发现5-HTT基因启动子区CpG岛甲基化水平与精神分裂症相关。 展开更多
关键词 DNA甲基化 精神分裂症 5-羟色胺转运体 亚硫酸氢钠
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奶牛乳腺组织RPS6KB1基因启动子甲基化分析 被引量:4
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作者 郑宜文 王春梅 +2 位作者 高学军 王小艳 李庆章 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期469-474,共6页
DNA甲基化是目前生命科学领域的研究热点之一,DNA甲基化在维持细胞功能、遗传印记、个体生长发育中起着重要作用.本研究采用亚硫酸氢盐测序(BSP)技术检测了不同发育时期奶牛乳腺组织及不同乳品质泌乳期奶牛乳腺组织RPS6KB1启动子的甲基... DNA甲基化是目前生命科学领域的研究热点之一,DNA甲基化在维持细胞功能、遗传印记、个体生长发育中起着重要作用.本研究采用亚硫酸氢盐测序(BSP)技术检测了不同发育时期奶牛乳腺组织及不同乳品质泌乳期奶牛乳腺组织RPS6KB1启动子的甲基化特征,实时荧光定量PCR检测RPS6KB1基因mRNA差异表达.实验结果显示,在RPS6KB1基因启动子内存在CpG及非CpG的甲基化模式,其中泌乳期奶牛之间甲基化水平相似,妊娠期奶牛甲基化程度高于泌乳期奶牛.荧光定量结果显示不同发育时期,RPS6KB1基因mRNA水平表达差异显著(P<0.05),而两组泌乳期奶牛之间差异不显著(P>0.05).说明RPS6KB1的表达受到其启动子甲基化的调控,非CpG甲基化模式可能具有与CpG甲基化模式相似的生物学功能,参与RPS6KB1的表达调控. 展开更多
关键词 奶牛 乳腺 RPS6KB1 亚硫酸(bsp) DNA甲基化
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医药其它
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第3期77-83,共7页
关键词 融合蛋白 DYSTROPHIN 启动子调控 高拷贝数 细胞生长 蠕形青霉 无细胞系统 遗传修饰 链霉菌
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