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亚溶解剂量的补体C5b-9复合物诱导肾小球系膜细胞增生及其NF-κB活化的作用 被引量:6
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作者 佟建霞 王迎伟 +5 位作者 邱文 高玲娟 徐娟 吴宜琴 徐静华 徐闻欢 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期230-233,241,F0002,共6页
目的:研究亚溶解剂量补体C5b-9(SC5b-9)复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增生和细胞外基质(ECM)分泌的作用,并探讨NF-κB核转录因子是否介入SC5b-9的促增生效应。方法:体外纯培养大鼠GMCs,并行光镜、电镜及功能鉴定。质控SC5b-9后,将... 目的:研究亚溶解剂量补体C5b-9(SC5b-9)复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增生和细胞外基质(ECM)分泌的作用,并探讨NF-κB核转录因子是否介入SC5b-9的促增生效应。方法:体外纯培养大鼠GMCs,并行光镜、电镜及功能鉴定。质控SC5b-9后,将GMCs分为5组,即SC5b-9刺激组、SC5b-9+PDTC组(吡咯啉烷二甲基硫脲)、ATS组、灭活人血清组及完全营养液组。应用RT-PCR检测40minPCNA和FNmRNA水平;同时应用免疫组化检测18hGMCs增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维粘连蛋白(FN)及细胞核内NF-κBp65表达情况。结果:实验40min,SC5b-9刺激组PCNA和FNmRNA表达上调,PDTC处理后表达则明显下降,其余3组PCNA均呈阴性,另3组FN则均有一定基础表达。SC5b-9刺激组,GMCs免疫组化显示:PCNA、α-SMA、FN、NF-κBp65表达增加,PDTC处理后则4者表达明显下调,其余各组,PCNA、α-SMA、NF-κBp65均呈阴性,FN亦有一定的基础表达。结论:SC5b-9可能通过激活NF-κB促进GMCs增生和ECM分泌。 展开更多
关键词 溶解剂量补体c5b-9 肾小球系膜细胞 增殖细胞核抗原 平滑肌肌动蛋白 纤维粘连蛋白 核因子-κB
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沉默血小板反应蛋白-1基因对亚溶解型C5b-9诱导肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响
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作者 邱文 李妍 +2 位作者 周建博 赵聃 王迎伟 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期29-34,47,共7页
目的研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法设计合成针对TSP-1基因4... 目的研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP-1shRNA(shTSP-1)后,将shTSP-1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况。另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量。结果核酸序列分析证明,4种TSP-1shRNA重组质粒均构建成功。Western blot实验证实,构建的shTSP-1-3(Thbs1-3)具有最佳的沉默效率。将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b-9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成。结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用。 展开更多
关键词 肾小球系膜细胞 亚溶解型c5b-9复合物 血小板反应蛋白-1 细胞外基质 小发夹RNA
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人脐静脉内皮细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型建立 被引量:2
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作者 李阳 谢予朋 +3 位作者 闫荟 孙晓迪 石亚飞 孙世光 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1317-1320,共4页
目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的补体攻膜复合物C5b-9模型并确定其亚溶破剂量。方法通过体外培养HUVEC,在其表面组装攻膜复合物C5b-9,激光共聚焦检测其组装情况;增加补体浓度,通过激光共聚焦定性观察细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活... 目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的补体攻膜复合物C5b-9模型并确定其亚溶破剂量。方法通过体外培养HUVEC,在其表面组装攻膜复合物C5b-9,激光共聚焦检测其组装情况;增加补体浓度,通过激光共聚焦定性观察细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性定量检测,确定其亚溶破剂量。结果激光共聚焦结果显示C5b-9成功组装于HUVEC表面;当C5b6的浓度达到1.6 mg·L-1时,LDH的分泌量骤增,激光共聚焦显示该剂量下部分细胞胞膜破裂。结论成功建立人脐静脉内皮细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型,为研究动脉粥样硬化药物防治奠定基础。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 人脐静脉内皮细胞 攻膜复合物 c5b-9 溶破剂量 激光共聚焦显微技术 乳酸脱氢酶
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RNA干扰沉默p300基因对亚溶解型C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡和ATF3乙酰化的影响 被引量:2
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作者 张婧 何风霞 +3 位作者 邱文 赵聃 卢燕来 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第3期275-280,共6页
目的:构建大鼠p300基因短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,观察沉默p300基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)凋亡和激活转录因子3(activating transcription f... 目的:构建大鼠p300基因短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,观察沉默p300基因对亚溶解型(sublytic)C5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMC)凋亡和激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)乙酰化水平的影响。方法:用DNA重组技术针对p300基因不同位点设计3个shRNA序列,然后分别克隆到真核表达载体pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA中,经电转染入GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。Western blot筛选干涉效果最佳的p300 shRNA,流式细胞术检测GMC凋亡率,免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western blot联合检查ATF3乙酰化水平。结果:核酸测序表明p300 shRNA重组质粒构建成功。Western blot显示p300 shRNA-2具有最佳沉默效率。p300 shRNA处理GMC后,由sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡率显著下降,同时ATF3乙酰化水平也明显降低。结论:成功构建了大鼠p300 shRNA真核表达质粒,并初步证实了p300能够促进sublytic C5b-9诱导的GMC凋亡,其机制可能与p300乙酰化修饰ATF3有关。 展开更多
关键词 RNA干扰 P300 溶解c5b-9 凋亡 乙酰化
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基因芯片筛查亚溶解型C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞基因表达差异的研究
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作者 周颖 邱文 +4 位作者 夏梅 周建博 李妍 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期660-666,共7页
目的:应用高通量的基因芯片技术筛查亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)介导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesan-gial cells,GMCs)的基因表达谱的变化。方法:体外分离、培养大鼠GMCs,人工质控sublytic C5b-9复合物的形成,并用其刺激培养GM... 目的:应用高通量的基因芯片技术筛查亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)介导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesan-gial cells,GMCs)的基因表达谱的变化。方法:体外分离、培养大鼠GMCs,人工质控sublytic C5b-9复合物的形成,并用其刺激培养GMCs,然后分别提取sublytic C5b-9刺激GMCs 40 min、3 h及未刺激对照组细胞的总RNA。经逆转录合成生物素标记的cDNA探针,然后与基因芯片杂交(涵盖31 000个转录本,代表28 000个基因)。经Affymetrix Scanner 3000扫描芯片荧光信号图像、GCOS1.4读取数据后将差异表达基因注释于GO基因功能分类体系,分析其相应的功能。结果:芯片检查数据显示,sublytic C5b-9刺激GMCs 40 min时上调2倍以上及下调2倍以上的基因分别为4 124个和2 234个,刺激3 h时上调2倍以上及下调2倍以上的基因分别为4 512个和2 859个;而sublytic C5b-9刺激GMCs 40 min和3 h后同时上调2倍以上及下调2倍以上的基因分别为2 325个和1 419个。sublytic C5b-9刺激GMCs表达差异基因其功能主要涉及生物学过程调节、生物调节、定位相关、刺激应答、生长发育、增殖、代谢过程、细胞生理过程、多细胞机体过程等。结论:Sublytic C5b-9刺激GMCs确能引起基因表达谱的变化。 展开更多
关键词 溶解c5b-9 肾小球系膜细胞 基因芯片
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大鼠Thy-1肾炎增殖病变及sublytic C5b-9致其肾小球系膜细胞增生的实验研究 被引量:6
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作者 赵聃 李妍 +3 位作者 周建博 张婧 邱文 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1343-1350,共8页
目的:检查大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)的增生病变及亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物在GMC增殖中的作用。方法:复制大鼠Thy-1N模型,分别于注射Thy-1抗体后18 h、3 d和7 d时,取... 目的:检查大鼠Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)的增生病变及亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物在GMC增殖中的作用。方法:复制大鼠Thy-1N模型,分别于注射Thy-1抗体后18 h、3 d和7 d时,取肾组织,用real-time PCR和Western blot方法检查其肾组织中细胞增殖指标,即细胞周期蛋白D2(cyclin D2)和增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的mRNA丰度及蛋白表达水平。用免疫荧光观察肾小球中C5b-9复合物的沉积。同时,使用BrdU掺入法、光镜及电镜观察大鼠肾小球细胞的增殖情况。此外,体外培养大鼠GMC,进行不同分组处理后再给予sublytic C5b-9刺激,用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymidine incorporation,3H-TdR)检查GMC的增殖情况。结果 :大鼠Thy-1N病变18 h,肾组织中cyclin D2、PCNA表达和肾内BrdU阳性细胞数均开始升高,实验3 d和7 d,其表达进一步提高。同时肾小球内可见C5b-9复合物沉积,部分C5b-9包绕的肾细胞形态完好。另形态学观察还发现,实验18 h,部分GMC溶解坏死,而实验3 d,GMC数量明显增多,7 d增加更为显著。体外实验中,大鼠GMC在sublytic C5b-9刺激后18 h,其细胞增殖水平显著增高,而用sublytic C5b-9刺激GMC产生的培养上清处理正常的GMC后,亦能轻度刺激GMC增殖。结论:大鼠Thy-1N肾小球病变存在早期增殖和继发增生的病理改变,而GMC的早期增殖可能与sublytic C5b-9作用有关。 展开更多
关键词 THY-1肾炎 肾小球系膜细胞 增殖 亚溶解型c5b-9复合物
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Sublytic C5b-9上调KLF5促进Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞生成IL-23的作用
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作者 刘玉 应帅 +4 位作者 罗灿 李玉 荣灿 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第9期1198-1206,共9页
目的:研究亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)上调转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)促进Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)产生炎症因子白细胞介素(interl... 目的:研究亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)上调转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)促进Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)产生炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-23的作用。方法:(1)建立大鼠Thy-1N模型和体外培养大鼠GMC,用Western blot(WB)检查Thy-1N大鼠肾组织和受sublytic C5b-9刺激的GMC中KLF5和IL-23的表达。(2)分别将KLF5过表达质粒(pIRES2-KLF5)或KLF5小干扰质粒(shKLF5)转染GMC,通过实时荧光定量PCR和WB检测KLF5和IL-23的mRNA和蛋白水平。(3)将IL-23全长启动子荧光素酶报告基因质粒(p GL3-IL-23-FL)转染GMC,再给予sublytic C5b-9刺激,或将p GL3-IL-23-FL与pIRES2-KLF5或shKLF5共转染GMC,用荧光素酶报告基因实验检测IL-23启动子活性的变化。(4)将慢病毒(lentivirus,LV)包装的LV-shKLF5和LV-shCTR行肾动脉灌注术导入大鼠肾组织,经小动物脏器可见光三维成像和冰冻切片观察GFP表达,证实LV-shCTR在肾组织中富集效率。之后再复制大鼠Thy-1N,用WB检查肾组织中KLF5和IL-23的蛋白表达。结果:(1)Thy-1N大鼠的肾组织和sublytic C5b-9刺激的GMC中,KLF5和IL-23的表达均显著升高,且KLF5的表达高峰稍早于IL-23。(2)在GMC中过表达或敲低KLF5能分别引起IL-23表达的升高或降低。(3)Sublytic C5b-9刺激或KLF5过表达均可增加GMC中IL-23启动子的活性,但敲低KLF5后可明显下调由sublytic C5b-9刺激GMC诱导的IL-23启动子活性。(4)敲低Thy-1N大鼠肾组织中KLF5的表达后,其肾组织中IL-23的表达水平明显降低。结论:大鼠Thy-1N发病早期,sublytic C5b-9刺激GMC后可通过上调KLF5促进IL-23基因的转录与表达。 展开更多
关键词 THY-1肾炎 溶解c5b-9 肾小球系膜细胞 krüppel样因子5 白细胞介素-23
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SP1基因在sublytic C5b-9促大鼠肾小球系膜细胞增殖中的作用
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作者 朱宇峰 蔡梦媛 +7 位作者 刘昌伟 王庆林 张恩瑞 钱宝梅 张志伟 赵聃 邱文 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1499-1505,共7页
目的:检查特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)在Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织中和亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)刺激的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)中的表达情况,并探讨SP1表达上调对sub... 目的:检查特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)在Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织中和亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)刺激的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)中的表达情况,并探讨SP1表达上调对sublytic C5b-9促大鼠GMCs增殖的作用。方法:复制大鼠Thy-1N模型,同时用sublytic C5b-9刺激体外培养的大鼠GMCs,分别用real-time PCR和Western blot检查Thy-1N大鼠肾组织(体内)和sublytic C5b-9刺激的大鼠GMCs(体外)中SP1基因的mRNA和蛋白表达水平及其表达时相。与此同时,构建SP1基因的表达质粒(p EGFP-N1/SP1-His)和发夹状小干扰RNA质粒(SP1shRNA,shSP1)。将上述质粒分别转染大鼠GMCs(同时设对照质粒转染组),再给予或不给予sublytic C5b-9刺激。用real-time PCR和Western blot检查SP1表达量,并行CCK-8实验检查GMCs的增殖情况。结果:在Thy-1N大鼠肾组织和sublytic C5b-9刺激的大鼠GMCs中,SP1 mRNA和蛋白表达水平均显著上调,且其体内外表达时相较为一致。体外过表达SP1可显著促进GMCs增殖,而沉默SP1可明显抑制sublytic C5b-9诱导的GMCs增殖反应。结论:Sublytic C5b-9刺激大鼠GMCs后能通过上调SP1表达促进GMCs增殖。 展开更多
关键词 Thy-1肾炎(Thy-1N) 肾小球系膜细胞(GMcs) 增殖 溶解c5b-9(sublytic c5b-9) 特异性蛋白1(SP1)
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