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题名沙门菌和志贺菌二重PCR检测方法的建立及应用
被引量：8
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作者
盘宝进
罗兆飞
韦梅良
汪文龙
刘军义
陈立标
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机构
广西出入境检验检疫局技术中心
东兴出入境检验检疫局
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出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2009年第5期19-23,共5页
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基金
国家质检总局科技兴检项目(2007IK034)
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文摘
根据GenBank提供的沙门菌invA基因序列和志贺菌ipaH基因序列设计引物，建立了二重PCR方法，在同一反应体系同时检测两种致病菌核酸，经二重PCR方法扩增后，在同一泳道同时检出沙门菌284bp和志贺菌611bp特异性扩增条带，而普通大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、阪畸大肠埃希菌、绿脓杆菌、蜡样芽胞杆菌、马链球菌、产单核细胞李斯特菌、鹅大肠埃希菌、猪水肿病大肠埃希菌均未出现这两种条带。对PCR产物进行测序，测序结果与已发表的基因核苷酸序列比较，沙门菌同源性为93％～100％，志贺菌同源性为98％～100％。应用建立的沙门菌和志贺菌二重PCR方法对广西6个试验猴养殖场1665份猴粪便样品进行检测，检出沙门菌阳性25份，志贺菌阳性90份，阳性检出率分别为1．5％和5．4％。表明建立的沙门菌和志贺菌二重PCR检测方法特异性强、敏感性高，适用于临床粪便样品的快速检测。
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关键词
猴
沙门菌
志贺菌
二重聚合酶链式反应
检测
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Keywords
simian
Salmonella
Shigella
double PCR
detection
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分类号
S852.61
[农业科学—基础兽医学]
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题名转基因玉米59122品系的特异性检测
被引量：8
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作者
许文涛
杨蓉
陆姣
张南
罗云波
何景
黄昆仑
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机构
中国农业大学食品科学与营养工程学院食品安全实验室
农业部转基因产品检验监督测试中心(北京)
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期139-142,共4页
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基金
国家"863"计划项目(2006AA10Z440)
国家自然科学基金项目(30800770)
国家转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08012-001)
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文摘
使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59122的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序列,并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物,运用半巢式PCR技术建立了59122的品系特异性二重PCR检测方法,扩增片段100bp,横跨pat终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,转基因大豆Roundup Ready和转基因油菜GT73等为材料,证明本方法与其他转基因作物具有高特异性。本方法在检测59122时,确定出连接体系中线性DNA的最佳质量浓度为1ng/μL左右,检出限达到0.1%,灵敏度为38个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品,或作为常规PCR定性检测后的验证方法。
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关键词
转基因作物
品系特异性检测
半巢式聚合酶链式反应
反向聚合酶链式反应
二重聚合酶链式反应
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Keywords
genetically modified crop
event-specific transgenic detection
semi-nested polymerase chain reaction
inverse polymerase chain reaction
duplex polymerase chain reaction
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分类号
Q789
[生物学—分子生物学]
S513
[农业科学—作物学]
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