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布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用被引量：17: 1; 作者孟茹陈创夫 +4 位作者张辉乔军任艳王正荣蒋松《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1012-1017,共6页; 本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性... 展开更多; 关键词布氏杆菌结核杆菌二重实时荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 2; 作者孔刚锐吴志明 +7 位作者闫若潜赵明军王东方赵雪丽闫志玲程俊贞陈慧娟靳利粉《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期27-33,共7页; 据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条... 展开更多; 关键词高低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT—pcr TAQMAN MGB荧光探针检测应用; 在线阅读下载PDF 职称材料

转基因大豆及其制品二重荧光定量PCR的建立与验证被引量：3: 3; 作者王凤军叶素丹 +1 位作者陈冠武包永华《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期236-239,271,共5页; 研究选用花椰菜花叶病毒35S启动子(P-35S)和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(T-NOS)为靶标基因,运用多重实时荧光PCR技术对转基因大豆及其制品进行快速筛选检测。实验通过样品核酸提取与质控,多重引物及荧光探针的设计与筛选,反应条... 展开更多; 关键词转基因大豆二重实时荧光pcr 快速筛选检测深加工制品; 在线阅读下载PDF 职称材料

贝类包拉米虫和派琴虫二重荧光定量PCR方法的建立: 4; 作者张艳芳谢芝勋 +6 位作者谢丽基刘加波庞耀珊范晴罗思思邓显文谢志勤《中国动物检疫》 CAS 2013年第5期49-53,共5页; 根据GenBank中包拉米虫和派琴虫保守基因序列,用Primer Express3.0软件设计合成了两对引物和两条TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测包拉米虫和派琴虫的二重荧光定量PCR方法。该方法对包拉米虫和派琴虫的检... 展开更多; 关键词包拉米虫派琴虫二重实时荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用被引量：17: 1; 作者孟茹陈创夫张辉乔军任艳王正荣蒋松; 机构石河子大学动物科技学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1012-1017,共6页; 基金国际合作重点项目(2006DFA33740) 国家自然科学基金项目(30760187); 文摘本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝.μL-1,结核杆菌为50拷贝.μL-1,两病原都存在时为100拷贝.μL-1,比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。; 关键词布氏杆菌结核杆菌二重实时荧光定量pcr; Keywords Brucella Mycobacterium tuberculosis duplex real-time fluorescence quantitative pcr; 分类号 S852.614 [农业科学—基础兽医学] S852.618 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 2; 作者孔刚锐吴志明闫若潜赵明军王东方赵雪丽闫志玲程俊贞陈慧娟靳利粉; 机构河南科技大学动物科技学院河南省动物疫病预防控制中心; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期27-33,共7页; 基金河南省科技创新人才计划项目(豫科人组[2011]1号); 文摘据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白2(Nsp2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(Real-time fluorescent quantitative RTPCR)检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LPPRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。; 关键词高低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT—pcr TAQMAN MGB荧光探针检测应用; Keywords highly/lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus duplex Real-time fluorescent quantitative RT-pcr TaqMan MGB fluorescence probe detection application; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转基因大豆及其制品二重荧光定量PCR的建立与验证被引量：3: 3; 作者王凤军叶素丹陈冠武包永华; 机构浙江经贸职业技术学院汕头出入境检验检疫局; 出处《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期236-239,271,共5页; 基金浙江经贸职业技术学院科研项目(16QN02) 浙江省供销社科研项目(16SSY04); 文摘研究选用花椰菜花叶病毒35S启动子(P-35S)和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(T-NOS)为靶标基因,运用多重实时荧光PCR技术对转基因大豆及其制品进行快速筛选检测。实验通过样品核酸提取与质控,多重引物及荧光探针的设计与筛选,反应条件和反应体系的对比优化,摸索出二重荧光定量PCR检测的最佳反应体系。同时通过特异性、重复性、灵敏性和适用性实验验证,确保了该方法在同时检测2个靶标基因时,无荧光信号的相互干扰,不会出现假阴性和假阳性结果。结果表明,方法特异性高,可同时筛查两个靶标基因,扩增效率在90%~110%之间,标准曲线决定系数R2>0.98,确定了最低检测限为2拷贝/μL。开发和建立的二重荧光定量PCR检测技术可以实现一管多检的实际需要,降低试剂成本,缩短检测时间,为大豆及其深加工产品转基因成分的快速检测提供了有效方法,为促进食品进出口提供技术保障。; 关键词转基因大豆二重实时荧光pcr 快速筛选检测深加工制品; Keywords genetically modified soybean duplex fluorescence quantitative pcr rapid detection deeply processed products; 分类号 TS214.2 [轻工技术与工程—粮食、油脂及植物蛋白工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名贝类包拉米虫和派琴虫二重荧光定量PCR方法的建立: 4; 作者张艳芳谢芝勋谢丽基刘加波庞耀珊范晴罗思思邓显文谢志勤; 机构广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室; 出处《中国动物检疫》 CAS 2013年第5期49-53,共5页; 基金国家百千万人才工程人选专项资金项目(No.945200603) 广西特聘专家专项(2011B020) 广西科技攻关项目(桂科攻0630001-3M)共同资助; 文摘根据GenBank中包拉米虫和派琴虫保守基因序列,用Primer Express3.0软件设计合成了两对引物和两条TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测包拉米虫和派琴虫的二重荧光定量PCR方法。该方法对包拉米虫和派琴虫的检测敏感性达到200个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对包拉米虫和派琴虫不同模板浓度进行组合,仍可有效同时检测到这两个原虫。该方法对单孢子虫、马尔太虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体的检测,结果全为阴性。研究建立的包拉米虫和派琴虫荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于贝类包拉米虫和派琴虫感染的检测。; 关键词包拉米虫派琴虫二重实时荧光定量pcr; Keywords Bonamia sp Perkinsus sp Duplex real-time pcr; 分类号 S944.344 [农业科学—水产养殖]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用	孟茹陈创夫张辉乔军任艳王正荣蒋松	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	17	在线阅读下载PDF 职称材料
2	鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用	孔刚锐吴志明闫若潜赵明军王东方赵雪丽闫志玲程俊贞陈慧娟靳利粉	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2013	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	转基因大豆及其制品二重荧光定量PCR的建立与验证	王凤军叶素丹陈冠武包永华	《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心	2018	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	贝类包拉米虫和派琴虫二重荧光定量PCR方法的建立	张艳芳谢芝勋谢丽基刘加波庞耀珊范晴罗思思邓显文谢志勤	《中国动物检疫》 CAS	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料