目的以去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(Na Bu)和乙酰转移酶p300作为乙酰化作用因素,探讨人胚肾HEK293细胞中乙酰化对二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(DDAH1)表达水平的调节。方法应用real-time PCR方法检测Na Bu刺激或转染野生型及突变型p300表达载...目的以去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(Na Bu)和乙酰转移酶p300作为乙酰化作用因素,探讨人胚肾HEK293细胞中乙酰化对二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(DDAH1)表达水平的调节。方法应用real-time PCR方法检测Na Bu刺激或转染野生型及突变型p300表达载体后DDAH1 m RNA表达水平的变化;应用Western blot方法检测Na Bu和p300对DDAH1蛋白表达水平的影响。结果 Real-time PCR结果显示Na Bu以时间依赖方式上调DDAH1 m RNA表达水平,同时转染野生型p300表达载体显著上调DDAH1 m RNA水平,而突变型p300作用不明显;Western blot结果显示Na Bu及野生型p300可提高DDAH1蛋白表达,但突变型p300无此作用,与对DDAH1 m RNA表达的作用一致。结论乙酰化可上调HEK293细胞中DDAH1 m RNA和蛋白表达水平。展开更多
非对称二甲基精氨酸(asymmetric d imethylarginine,ADMA)是一氧化氮合酶(NOS)的内源性竞争性抑制物,竞争性抑制NOS使NO含量减少,引起一系列血管异常效应。二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶(d imethylarginine d imethylam inohydrolase,DD...非对称二甲基精氨酸(asymmetric d imethylarginine,ADMA)是一氧化氮合酶(NOS)的内源性竞争性抑制物,竞争性抑制NOS使NO含量减少,引起一系列血管异常效应。二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶(d imethylarginine d imethylam inohydrolase,DDAH)是主导ADMA代谢的催化酶。DDAH减少或活性降低会使ADMA在体内积累,导致内皮功能异常。本文介绍了DDAH引起内皮功能异常的机制,并对有关影响DDAH活性或表达的药物研究作一概述。展开更多
目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,D...目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,DDAH-1)在肝细胞癌表达的变化。方法:选取2003-2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)筛选全部标本共同差异表达频率>80%、差异强度>3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱(electrospray ionisation tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定分析;采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH-1进行检测。结果:2-DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调,7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH-1是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示,20例标本中16例DDAH-1表达明显升高;免疫组化检测证实,10例标本DDAH-1全部呈强阳性表达。结论:肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH-1在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。展开更多
文摘目的以去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(Na Bu)和乙酰转移酶p300作为乙酰化作用因素,探讨人胚肾HEK293细胞中乙酰化对二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(DDAH1)表达水平的调节。方法应用real-time PCR方法检测Na Bu刺激或转染野生型及突变型p300表达载体后DDAH1 m RNA表达水平的变化;应用Western blot方法检测Na Bu和p300对DDAH1蛋白表达水平的影响。结果 Real-time PCR结果显示Na Bu以时间依赖方式上调DDAH1 m RNA表达水平,同时转染野生型p300表达载体显著上调DDAH1 m RNA水平,而突变型p300作用不明显;Western blot结果显示Na Bu及野生型p300可提高DDAH1蛋白表达,但突变型p300无此作用,与对DDAH1 m RNA表达的作用一致。结论乙酰化可上调HEK293细胞中DDAH1 m RNA和蛋白表达水平。
文摘非对称二甲基精氨酸(asymmetric d imethylarginine,ADMA)是一氧化氮合酶(NOS)的内源性竞争性抑制物,竞争性抑制NOS使NO含量减少,引起一系列血管异常效应。二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶(d imethylarginine d imethylam inohydrolase,DDAH)是主导ADMA代谢的催化酶。DDAH减少或活性降低会使ADMA在体内积累,导致内皮功能异常。本文介绍了DDAH引起内皮功能异常的机制,并对有关影响DDAH活性或表达的药物研究作一概述。
文摘目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,DDAH-1)在肝细胞癌表达的变化。方法:选取2003-2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)筛选全部标本共同差异表达频率>80%、差异强度>3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱(electrospray ionisation tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定分析;采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH-1进行检测。结果:2-DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调,7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH-1是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示,20例标本中16例DDAH-1表达明显升高;免疫组化检测证实,10例标本DDAH-1全部呈强阳性表达。结论:肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH-1在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。
