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牛朊蛋白在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达
被引量：
4
1
作者
丁耀忠
张杰
+6 位作者
刘永生
陈豪泰
曾巧英
马丽娜
马艳平
杨生海
殷宏
《江西农业学报》
CAS
2009年第4期101-103,共3页
从T载体上得到的目的基因和dhfr共扩增基因真核表达载体构建了pCI-PrP102。纯化后的重组质粒通过脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经MTX加压筛选获得稳定表达的细胞株,间接免疫荧光试验检测到目的蛋白的表达。
关键词
牛朊蛋白
二氢叶酸还原酶缺陷型cho细胞
稳定表达
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职称材料
用弱化dhfr双顺反子载体在CHO细胞中高效表达低分子量尿激酶突变体
被引量：
1
2
作者
潘淑媛
高丽华
+6 位作者
胡显文
杨波
殷亮
胥照平
张正光
郗永义
陈惠鹏
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第8期834-840,共7页
将二氢叶酸还原酶基因（dhfr）克隆至pIRES载体中弱化的脑心肌炎病毒（ECMV）内部核糖体进入位点（IRES）的下游，构建了含有弱化dhfr筛选标记和可用氨甲蝶呤（MTX）加压提高表达水平的双顺反子真核表达载体pIRES—dhfr。利用该表达载...
将二氢叶酸还原酶基因（dhfr）克隆至pIRES载体中弱化的脑心肌炎病毒（ECMV）内部核糖体进入位点（IRES）的下游，构建了含有弱化dhfr筛选标记和可用氨甲蝶呤（MTX）加压提高表达水平的双顺反子真核表达载体pIRES—dhfr。利用该表达载体表达了一种无糖基化和具有凝血酶抗性的低分子量尿激酶型纤溶酶原激活剂（LMW—uPA）突变体（缺失尿激酶原的1—143位氨基酸，Arg156→Lys，Asn302→Ala），用脂质体转染方法将表达载体pIRES—dhfr／LMW—UK转染CHO—dhfr-细胞后经过一轮MTX筛选，几乎所有获得的单克隆细胞株都表达LMW—UK，其中约50％为表达水平较接近（500—5000IU／10^6cells／d）的高表达阳性克隆。用转瓶无血清培养表达水平约为17．5pg／cell／d的rCHO细胞系LB2-UK，收集的上清经过阳离子交换柱和凝胶过滤层析两步纯化后，获得的重组蛋白的纯度可以达到99％。用S-2444发色底物法检测，所获得的突变体双链UK比例大于98％。
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关键词
低分子量尿激酶
突变体
内部核糖体进入位点
二氢叶酸
还原酶
基因
重组
cho
细胞
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职称材料
题名
牛朊蛋白在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达
被引量：
4
1
作者
丁耀忠
张杰
刘永生
陈豪泰
曾巧英
马丽娜
马艳平
杨生海
殷宏
机构
甘肃农业大学
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
出处
《江西农业学报》
CAS
2009年第4期101-103,共3页
基金
国家自然科学基金项目(30671563)
文摘
从T载体上得到的目的基因和dhfr共扩增基因真核表达载体构建了pCI-PrP102。纯化后的重组质粒通过脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经MTX加压筛选获得稳定表达的细胞株,间接免疫荧光试验检测到目的蛋白的表达。
关键词
牛朊蛋白
二氢叶酸还原酶缺陷型cho细胞
稳定表达
Keywords
Bovine prion protein
cho
/dhfr-cell
Stable expression
分类号
S823.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
用弱化dhfr双顺反子载体在CHO细胞中高效表达低分子量尿激酶突变体
被引量：
1
2
作者
潘淑媛
高丽华
胡显文
杨波
殷亮
胥照平
张正光
郗永义
陈惠鹏
机构
军事医学科学院生物工程研究所
吉林大学生命科学院
出处
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第8期834-840,共7页
基金
863计划（Z18-03-12）资助项目.
文摘
将二氢叶酸还原酶基因（dhfr）克隆至pIRES载体中弱化的脑心肌炎病毒（ECMV）内部核糖体进入位点（IRES）的下游，构建了含有弱化dhfr筛选标记和可用氨甲蝶呤（MTX）加压提高表达水平的双顺反子真核表达载体pIRES—dhfr。利用该表达载体表达了一种无糖基化和具有凝血酶抗性的低分子量尿激酶型纤溶酶原激活剂（LMW—uPA）突变体（缺失尿激酶原的1—143位氨基酸，Arg156→Lys，Asn302→Ala），用脂质体转染方法将表达载体pIRES—dhfr／LMW—UK转染CHO—dhfr-细胞后经过一轮MTX筛选，几乎所有获得的单克隆细胞株都表达LMW—UK，其中约50％为表达水平较接近（500—5000IU／10^6cells／d）的高表达阳性克隆。用转瓶无血清培养表达水平约为17．5pg／cell／d的rCHO细胞系LB2-UK，收集的上清经过阳离子交换柱和凝胶过滤层析两步纯化后，获得的重组蛋白的纯度可以达到99％。用S-2444发色底物法检测，所获得的突变体双链UK比例大于98％。
关键词
低分子量尿激酶
突变体
内部核糖体进入位点
二氢叶酸
还原酶
基因
重组
cho
细胞
Keywords
low molecular weight urokinase, mutant, internal ribosome entry site, dhfr, recombinant
cho
cell
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛朊蛋白在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达
丁耀忠
张杰
刘永生
陈豪泰
曾巧英
马丽娜
马艳平
杨生海
殷宏
《江西农业学报》
CAS
2009
4
在线阅读
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职称材料
2
用弱化dhfr双顺反子载体在CHO细胞中高效表达低分子量尿激酶突变体
潘淑媛
高丽华
胡显文
杨波
殷亮
胥照平
张正光
郗永义
陈惠鹏
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
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